本發(fā)明屬于生物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從羅漢果中提取羅漢果總皂苷的方法。

背景技術(shù)：

羅漢果Siraitia grosvenorii，屬雙子葉植物綱葫蘆科羅漢果屬植物的果實(shí)，主要產(chǎn)于廣西、廣東、湖南、江西等地。羅漢果的干燥果實(shí)為橢圓或圓形，外殼棕褐色或煙熏色，附有大量細(xì)小黑色柔毛，比鵝蛋略大。干果較輕，種子、果皮和果肉均可入藥。羅漢果的營養(yǎng)價(jià)值極高，含有大量的糖類、蛋白質(zhì)、維生素、脂肪酸、多種人體必需的氨基酸和微量元素。

羅漢果果實(shí)中分離并鑒定出了賽門甙Ⅰ(sianenosideⅠ)、羅漢果甜甙ⅡE(eogrosideⅡE)、羅漢果甜甙Ⅲ(mogrosideⅢ)、羅漢果甜甙ⅢE(mogrosideⅢE)、羅漢果甜甙Ⅳ(ogrosideⅣ)、羅漢果甜甙Ⅴ(mogrosideⅤ)、羅漢果甜甙A、羅漢果新甙等葫蘆烷素三萜甙類物質(zhì)，除羅漢果甜甙Ⅳ無甜味，羅漢果新甙為苦味外，均為甜味物質(zhì)，其中羅漢果甜甙Ⅴ的甜度最高，相當(dāng)于蔗糖的300倍，且甜味純正、無異味、回味感強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好，可作為食品、菜肴的甜味劑，是糖尿病人的理想糖代品。羅漢果甜甙Ⅴ熱穩(wěn)定性好，在100℃水溶液中穩(wěn)定，在120℃連續(xù)加熱12h以上仍不會(huì)被破壞，屬非發(fā)酵物質(zhì)，利于加工貯存。

目前，從羅漢果總皂苷的制備方法主要有以下兩種，一是水提加樹脂分離法，將羅漢果破碎后裝入提取罐中，加水提取，多次提取后，合并提取液，過濾，上樹脂進(jìn)行吸附分離，用乙醇或甲醇洗脫，洗脫液去醇后，噴霧干燥而成；二是醇提膜分離法，其工藝是將羅漢果破碎，裝入提取罐中，加入乙醇進(jìn)行提取，多次提取后，合并提取液，過濾，將濾液通過膜分離濃縮，濃縮液真空干燥而成。然而上述方法制得的羅漢果總皂苷中含有羅漢果新甙，導(dǎo)致提取物中有強(qiáng)烈的后苦味，影響了羅漢果總皂苷的口感并限制了其作為天然甜味劑的應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)提取的羅漢果提取物中帶有強(qiáng)烈的后苦味，提供一種味道純正，無苦味的羅漢果總皂苷的制備方法。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案是從羅漢果中提取羅漢果總皂苷的方法，包括以下步驟：

1)將羅漢果加入乙醇提取，將提取液過濾，取濾液回收乙醇，得到浸膏A；

2)將浸膏A加水溶解后上D201大孔樹脂，先用水洗脫至無色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，將洗脫液回收乙醇，得到浸膏B；

3)將浸膏B加水溶解，上D101+大孔樹脂，用水洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，即得。

步驟1)中，將羅漢果加入其重量5～10倍的乙醇回流提取3次，每次提取1～2h，合并提取液，過濾，收集濾液，回收乙醇，即為浸膏A。羅漢果中含有大量的蛋白質(zhì)、葡萄糖和果糖，采用乙醇為溶媒，乙醇不利于蛋白質(zhì)和果糖的溶解，可以減少雜質(zhì)的溶出，對(duì)后續(xù)純化有益。乙醇體積濃度為40～50％為佳，乙醇濃度過高會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生凝聚作用，使得蛋白質(zhì)滯留在顆粒的內(nèi)部孔道中，反而增加羅漢果甜甙的擴(kuò)散阻力，降低終產(chǎn)品的收率。乙醇濃度過低則雜質(zhì)含量較大，影響終產(chǎn)品的純度。

步驟2)中，水的用量為浸膏A重量的8～15倍。第一次上D201大孔吸附樹脂柱，可吸附溶液中的羅漢果甜甙以及少量色素類成分，溶液上柱流速為0.3～0.5BV/h，水的洗脫流速為1～2BV/h，用水洗脫可優(yōu)先將色素洗脫下來，乙醇的洗脫速度為0.5～0.6BV/h，可將樹脂中吸附的羅漢果總皂苷洗脫下來。乙醇體積濃度為75～80％為宜。

步驟3)中，根據(jù)羅漢果新甙的分子質(zhì)量、大小以及極性，對(duì)D101大孔樹脂進(jìn)行改進(jìn)，使其對(duì)羅漢果新甙的吸附力增強(qiáng)，而對(duì)其他甜甙的吸附力減弱，當(dāng)采用水進(jìn)行洗脫時(shí)，除羅漢果新甙之外的其他皂苷與大孔樹脂的吸附力較弱，優(yōu)先洗脫出來，而羅漢果新甙則留在樹脂中，從而達(dá)到脫去羅漢果新甙的作用。

所述D101+樹脂為苯乙烯型非極性共聚體，其技術(shù)參數(shù)為：

1)外觀：乳白色不透明球狀顆粒；

2)粒徑范圍0.3～1.25mm≥95％；

3)含水量：60～75％；

4)濕真密度：1.05～1.15g/ml；

5)濕視密度：0.60～0.65g/ml；

6)比表面積：520～550㎡/g；

7)平均孔徑：

8)孔隙率：42～46％；

9)孔容：1.18～1.24ml/g。

步驟3)中，水的用量為浸膏B重量的10～15倍。溶液上柱流速為0.3～0.5BV/h，水的洗脫流速為0.5～0.6BV/h。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提取的羅漢果總皂苷中不含有羅漢果新甙，甜味純正，無回苦味。

具體實(shí)施方式

以下具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不作為對(duì)本發(fā)明的限定。

實(shí)施例1

1)將羅漢果加入其重量5倍的體積濃度為40％的乙醇回流提取3次，每次提取1h，合并提取液，過濾，取濾液回收乙醇，得到浸膏A；

2)將浸膏A加入其重量8倍的水溶解后上D201大孔樹脂，溶液上柱流速為0.3BV/h，先用水洗脫至無色，水的洗脫流速為1BV/h，然后用體積濃度為75％的乙醇洗脫，乙醇的洗脫速度為0.5BV/h，收集乙醇洗脫液，將洗脫液回收乙醇，得到浸膏B；

3)將浸膏B加入其重量10倍的水溶解，上D101+大孔樹脂，溶液上柱流速為0.3BV/h，用水洗脫，水的洗脫流速為0.5BV/h，收集水洗脫液，濃縮，干燥，即得羅漢果總皂苷。經(jīng)品嘗，羅漢果總皂苷甜味純正，無回苦味。將羅漢果總皂苷進(jìn)行HPLC分析，其中羅漢果新甙的含量為0.001％。

實(shí)施例2

1)將羅漢果加入其重量10倍的體積濃度為50％的乙醇回流提取3次，每次提取2h，合并提取液，過濾，取濾液回收乙醇，得到浸膏A；

2)將浸膏A加入其重量15倍的水溶解后上D201大孔樹脂，溶液上柱流速為0.5BV/h，先用水洗脫至無色，水的洗脫流速為2BV/h，然后用體積濃度為80％的乙醇洗脫，乙醇的洗脫速度為0.6BV/h，收集乙醇洗脫液，將洗脫液回收乙醇，得到浸膏B；

3)將浸膏B加入其重量15倍的水溶解，上D101+大孔樹脂，溶液上柱流速為0.5BV/h，用水洗脫，水的洗脫流速為0.6BV/h，收集水洗脫液，濃縮，干燥，即得羅漢果總皂苷。經(jīng)品嘗，羅漢果總皂苷甜味純正，無回苦味。將羅漢果總皂苷進(jìn)行HPLC分析，其中羅漢果新甙的含量為0.002％。

實(shí)施例3

1)將羅漢果加入其重量8倍的體積濃度為45％的乙醇回流提取3次，每次提取1.5h，合并提取液，過濾，取濾液回收乙醇，得到浸膏A；

2)將浸膏A加入其重量12倍的水溶解后上D201大孔樹脂，溶液上柱流速為0.4BV/h，先用水洗脫至無色，水的洗脫流速為1.5BV/h，然后用體積濃度為78％的乙醇洗脫，乙醇的洗脫速度為0.55BV/h，收集乙醇洗脫液，將洗脫液回收乙醇，得到浸膏B；

3)將浸膏B加入其重量12倍的水溶解，上D101+大孔樹脂，溶液上柱流速為0.4BV/h，用水洗脫，水的洗脫流速為0.55BV/h，收集水洗脫液，濃縮，干燥，即得羅漢果總皂苷。經(jīng)品嘗，羅漢果總皂苷甜味純正，無回苦味。將羅漢果總皂苷進(jìn)行HPLC分析，其中羅漢果新甙的含量為0.003％。

實(shí)施例4

1)將羅漢果加入其重量5倍的體積濃度為50％的乙醇回流提取3次，每次提取1h，合并提取液，過濾，取濾液回收乙醇，得到浸膏A；

2)將浸膏A加入其重量15倍的水溶解后上D201大孔樹脂，溶液上柱流速為0.3BV/h，先用水洗脫至無色，水的洗脫流速為2BV/h，然后用體積濃度為75％的乙醇洗脫，乙醇的洗脫速度為0.6BV/h，收集乙醇洗脫液，將洗脫液回收乙醇，得到浸膏B；

3)將浸膏B加入其重量10倍的水溶解，上D101+大孔樹脂，溶液上柱流速為0.5BV/h，用水洗脫，水的洗脫流速為0.5BV/h，收集水洗脫液，濃縮，干燥，即得羅漢果總皂苷。經(jīng)品嘗，羅漢果總皂苷甜味純正，無回苦味。將羅漢果總皂苷進(jìn)行HPLC分析，其中羅漢果新甙的含量為0.002％。