一種羅漢果苷v的工業(yè)化制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及羅漢果果實(shí)有效成分的提取領(lǐng)域，尤其涉及一種羅漢果苷V的工業(yè)化提取制備技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]羅漢果[Siraitia grosuenorii]為葫蘆科植物羅漢果的果實(shí)，是一種極具開發(fā)潛力的天然產(chǎn)物資源，羅漢果甜苷是羅漢果中主要有效成分，它是一種三萜烯葡萄糖苷，具有廣泛的生物特性。其中羅漢果苷V為羅漢果果實(shí)中含量和甜度均較高的成分，其含量約為
I%，甜度相當(dāng)于蔗糖的300倍，是主要的甜味成分。羅漢果甜苷具有安全，味質(zhì)好，甜度高，熱穩(wěn)定性好，顏色淺，受外界環(huán)境PH影響小(pH值介于2?10)等特性。我國(guó)于1996年7月正式批準(zhǔn)該產(chǎn)品作為食品添加劑。
[0003]羅漢果工業(yè)生產(chǎn)通常采用結(jié)晶重結(jié)晶、層析或二者聯(lián)用方法。但無(wú)論哪種制備方法，其工藝都十分繁瑣，耗時(shí)極長(zhǎng)，生產(chǎn)效率很低，且純度不高，無(wú)法獲得90%以上純度的產(chǎn)品。中國(guó)專利(申請(qǐng)?zhí)?201210167052.9，發(fā)明名稱:一種從羅漢果中提取羅漢果苷V和法尼醇的方法)描述了運(yùn)用層析和結(jié)晶重結(jié)晶結(jié)合的方法提取羅漢果苷V的方法，過(guò)程步驟冗雜，且提取得到的產(chǎn)品純度不高。由于生產(chǎn)中大量使用易燃有機(jī)溶劑，如乙酸乙酯，石油醚、丙酮等作為結(jié)晶或?qū)游鋈軇?，安全性差?br>[0004]另有中國(guó)專利(申請(qǐng)?zhí)?200810073876.3)描述了一種采用兩步層析(分別使用無(wú)定型正相硅膠和C18反相硅膠)的方法分離提純羅漢果苷V。該方法相較于常規(guī)的結(jié)晶重結(jié)晶法在步驟簡(jiǎn)化和產(chǎn)物純度方面已有一些提高，但所用溶劑如二氯甲烷，對(duì)環(huán)境和安全危害大，分離速度慢，且難以在線實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)分離進(jìn)程的缺點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)傳統(tǒng)羅漢果苷V粗品精制過(guò)程中所存在的工藝繁瑣，純度不高等問題，本發(fā)明的目的旨在提供一種羅漢果苷V的工業(yè)化制備方法，簡(jiǎn)化制備方法且具有在線分離的特性。
[0006]本發(fā)明的上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)，一種羅漢果苷V的工業(yè)化制備方法，包括步驟:1、用水、有機(jī)溶劑或兩者的混合溶劑在加熱、微波或超聲任一種輔助作用下對(duì)羅漢果原料進(jìn)行浸提，固液分離后得到羅漢果提取液，而后采用至少為噴霧、旋蒸的方法去除液體，獲得羅漢果苷V質(zhì)量含量1%?20%的羅漢果苷粗品；11、用水將羅漢果苷粗品配置成溶液，過(guò)濾去除不溶物；111、將羅漢果苷溶液泵入動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱內(nèi)填料為1ym?50 μπι的反相球形娃膠，上樣量與羅漢果苷粗品質(zhì)量相對(duì)應(yīng)，柱內(nèi)流動(dòng)相為質(zhì)量濃度10%?90%且具有可調(diào)梯度的有機(jī)溶劑水溶液，先控制有機(jī)溶液水溶液的初始梯度為2: 8?4: 6，流速為100ml/min，洗脫30min?50min，而后調(diào)整有機(jī)溶液水溶液的梯度為1:1?9: 1，繼續(xù)洗脫至50min?60min，調(diào)整紫外光度檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，自流動(dòng)相開始流動(dòng)起對(duì)動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，在線收集對(duì)應(yīng)色譜峰的洗脫液，得到純度大于95%的羅漢果苷V。
[0007]進(jìn)一步地，步驟I和步驟III中所述有機(jī)溶劑至少為甲醇、乙醇、乙腈、食品級(jí)乙醇。
[0008]進(jìn)一步地，所述反相球形娃膠為粒徑10 μm的正十八燒基反相娃膠粒。
[0009]進(jìn)一步地，所述反相球形硅膠為粒徑22 μ m的正十八烷基反相硅膠粒。
[0010]進(jìn)一步地，所述反相球形硅膠為粒徑50 μ m的正十八烷基反相硅膠粒。
[0011]進(jìn)一步地，所述柱內(nèi)流動(dòng)相為乙醇與水，初始梯度為2: 8?3: 7。
[0012]進(jìn)一步地，所述柱內(nèi)流動(dòng)相為乙腈與水，初始梯度為2: 8?3: 7。
[0013]進(jìn)一步地，所述柱內(nèi)流動(dòng)相為甲醇與水，初始梯度為2: 8?4: 6。
[0014]本發(fā)明制備技術(shù)方案的實(shí)施，其較之于傳統(tǒng)制備工藝所具有的顯著優(yōu)點(diǎn)為:直接采用粗提取后的羅漢果苷粗品來(lái)制備羅漢果苷V，無(wú)需大量復(fù)雜繁瑣的前處理和后處理過(guò)程，所用溶劑廉價(jià)、安全，且分離純化過(guò)程可在線實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，大大提高了安全性，節(jié)約了成本，適用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。高效液相色譜最終測(cè)定顯示，羅漢果苷V純度大于95%，總雜小于5%。
【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1是原始羅漢果苷粗品的高效液相色譜測(cè)定圖譜。
[0016]圖2是用填充了 10 μm正十八燒基反相娃膠填料(上樣量600mg)的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱分離純化羅漢果苷V的高效液相色譜測(cè)定圖譜。
[0017]圖3是用填充了 10 μ m正十八烷基反相硅膠填料(上樣量Ig)的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱分離純化羅漢果苷V的高效液相色譜測(cè)定圖譜。
[0018]圖4是用填充了 10 μ m正十八燒基反相娃膠填料(上樣量3g)的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱分離純化羅漢果苷V的高效液相色譜測(cè)定圖譜。
[0019]圖5是用填充了 10 μ m正十八烷基反相硅膠填料(上樣量3g)的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱分離純化羅漢果苷V的制備圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0020]本發(fā)明鑒于【背景技術(shù)】中公開的針對(duì)羅漢果苷V粗品現(xiàn)有精制過(guò)程中所存在的工藝繁瑣，純度不高等問題，創(chuàng)新提出了一種羅漢果苷V的工業(yè)化制備方法。該方法可以直接采用粗提取后的羅漢果苷粗品來(lái)制備羅漢果苷V，無(wú)需大量復(fù)雜繁瑣的前處理和后處理過(guò)程，所用溶劑廉價(jià)、安全，且分離純化過(guò)程可在線實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)
[0021]從本發(fā)明制備方法的概述來(lái)看，其包括羅漢果苷粗品的制備，利用羅漢果苷粗品配置溶液及采用高效液相色譜(HPLC)法優(yōu)化和判斷羅漢果苷V的最佳分離純化條件，實(shí)現(xiàn)尚效提取。
[0022]分步驟來(lái)看，步驟1:用水或有機(jī)溶劑或兩者的混合溶劑在加熱、微波、超聲等任一種輔助作用下對(duì)羅漢果原料進(jìn)行浸提，固液分離后得到羅漢果提取液，而后采用至少為噴霧、旋蒸的方法去除液體，獲得羅漢果苷V質(zhì)量含量I %?20%的羅漢果苷粗品，其高效液相色譜測(cè)定圖譜如圖1所示。
[0023]步驟I1、用水將羅漢果苷粗品配置成溶液，過(guò)濾去除不溶物。
[0024]步驟II1、將羅漢果苷溶液泵入動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱內(nèi)填料為10 μπι?50 μπι的反相球形娃膠，上樣量與羅漢果苷粗品質(zhì)量相對(duì)應(yīng)，柱內(nèi)流動(dòng)相為質(zhì)量濃度10%?90%且具有可調(diào)梯度的有機(jī)溶劑水溶液，先控制有機(jī)溶液水溶液的初始梯度為
2: 8?4: 6，流速為100ml/min，洗脫30min?50min，而后調(diào)整有機(jī)溶液水溶液的梯度為1:1?9: 1，繼續(xù)洗脫至50min?60min，調(diào)整紫外光度檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，自流動(dòng)相開始流動(dòng)起對(duì)動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，在線收集對(duì)應(yīng)色譜峰的洗脫液，得到純度大于95%的羅漢果苷V。
[0025]在上述籠統(tǒng)的原理性技術(shù)方案指導(dǎo)下，其較為具體或現(xiàn)實(shí)的優(yōu)選實(shí)施過(guò)程可以是:由于羅漢果干粗品的制備為本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)手段，在本發(fā)明的后續(xù)工藝步驟中幾乎沒有差別，故在該優(yōu)選實(shí)施例及后述的若干實(shí)施例中，步驟I的描述將被省略。在完成羅漢果苷粗品的準(zhǔn)備后，取600mg羅漢果苷粗品用水配置成質(zhì)量濃度0.3%的溶液，并過(guò)濾除去不溶物。而后將該羅漢果苷溶液泵入動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)中。這里柱尺寸為Φ50mmX250mm，而柱內(nèi)填料為10 μπι的正十八燒基反相娃膠粒，上樣量也為600mg，柱內(nèi)流動(dòng)相為食品級(jí)乙醇與水的混合溶液，初始梯度范圍為2: 8?3: 7。出