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一種分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞混合酶及其分離方法與流程

文檔序號(hào):12644632閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞混合酶,其特征在于它是按照體積比為1:0.5~1.5:0.5~1.5:1.5~2.5的比例將膠原酶I,II,IV,V混和而成;所述的膠原酶I,II,IV,V的質(zhì)量百分比濃度分別為0.5~0.8%、0.5~1.5%、0.5~0.8%和0.5~1.5%。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞混合酶,其特征在于它是按照體積比為1:1:1:2的比例將膠原酶I,II,IV,V混和而成;所述的膠原酶I,II,IV,V的質(zhì)量百分比濃度分別為0.5%、1%、0.5%和1%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞混合酶,其特征在于所述的高效分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞混合酶過(guò)0.22um濾器過(guò)濾除菌,-20℃下無(wú)菌保存。

4.一種用混合酶分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞的方法,其特征在于它是按照以下步驟進(jìn)行的:

一、將權(quán)利要求1制得的混合酶37℃預(yù)熱;

二、將待處理組織剪碎,按體積比為1:2.5~3的比例將混合酶與剪碎后的組織混合均勻;

三、置于37~38℃恒溫?fù)u床搖30~40min后,終止消化,過(guò)濾,離心;

四、獲取組織干細(xì)胞,接種于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng);

五、培養(yǎng)36h后,在無(wú)菌操作條件下將上清倒入離心管內(nèi),在轉(zhuǎn)速為1300rpm的條件下離心6min,收集沉淀,即完成所述的用混合酶分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種用混合酶分離胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞的方法,其特征在于混合酶與剪碎后的組織混合比例為1:2.7。

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