專利名稱：使用胎盤干細胞治療結(jié)節(jié)病的制作方法
使用胎盤干細胞治療結(jié)節(jié)病
1.發(fā)明領域本文提供的是一種分離的胎盤細胞(例如胎盤干細胞)、所述胎盤干細胞的群體，及使用它們來治療結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥例如系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病、皮膚結(jié)節(jié)病、L0fgren氏綜合征、神經(jīng)結(jié)節(jié)病、肺結(jié)節(jié)病、心臟結(jié)節(jié)病、眼結(jié)節(jié)病或具有其它器官或組織受累(involvement)的結(jié)節(jié)病的方法。2.
背景技術：
結(jié)節(jié)病(sarcoidosis),也稱為類肉瘤病(sarcoiddisease)或 Besnier-Boeck病，是一種多系統(tǒng)肉芽腫性炎癥性疾病，可累及多個器官(例如肺、皮膚、心臟、眼、肝臟、神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟或骨骼肌系統(tǒng))。結(jié)節(jié)病的病因仍不清楚，雖然人們一直認為它與遺傳敏感個體在暴露于環(huán)境因素、職業(yè)因素或感染因素之后的免疫應答發(fā)生改變有關系。 類固醇療法(例如皮質(zhì)類固醇，例如潑尼松)一直是結(jié)節(jié)病的標準療法。然而，皮質(zhì)類固醇的使用有許多缺點。例如，某些患者對類固醇療法不起反應。另外，皮質(zhì)類固醇具有一些嚴重的副作用，并且它們的使用通常受到進行性或嚴重病癥的限制。因此，存在著使用例如人胎盤干細胞來治療結(jié)節(jié)病的新方法的需求。3.發(fā)明概述在一個方面，本文提供的是治療、處理、緩解或預防結(jié)節(jié)病、或一種或多種結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙和/或病癥，例如與結(jié)節(jié)病相關的、導致結(jié)節(jié)病或由結(jié)節(jié)病引起的疾病、障礙和/或病癥的方法。本文還提供的是用于治療結(jié)節(jié)病、或由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的疾病、障礙或病癥的試劑盒。在一個實施方案中，本文提供的是一種治療患有結(jié)節(jié)病、或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥的個體的方法，該方法包括給予所述個體治療有效量的組織培養(yǎng)塑料器具貼壁的胎盤細胞(tissue cultureplastic-adherent placental cells),例如胎盤多能細胞或胎盤干細胞，在本文中也稱為PDACs (胎盤衍生貼壁細胞(placenta derivedadherent cells),例如在下文第4. 2節(jié)中描述的胎盤衍生貼壁細胞)、或者PDACs (例如胎盤干細胞)條件化培養(yǎng)基，其用量和時間足以達到結(jié)節(jié)病或所述疾病、障礙或病癥的一個或多個癥狀的可檢測改善。在另一個方面，本文提供的是胎盤細胞(例如胎盤干細胞)在制備用于治療、處理、緩解或預防結(jié)節(jié)病或由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的疾病、障礙和/或病癥的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本文提供的是試劑盒，該試劑盒包含PDACs或其治療用細胞組合物，可制成藥學上可接受的形式，例如通過與藥學上可接受的載體混合；和涂藥器(applicator),以及使用說明書。在某些實施方案中，所述方法包括將胎盤細胞(例如胎盤干細胞)以足以可檢測改善所述結(jié)節(jié)病或所述疾病或障礙的一個或多個癥狀的用量和時間給予所述個體，與所述胎盤干細胞給予之前的個體相比。在某些實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞減少(例如可檢測地減少)所述個體中的所述一個或多個癥狀的數(shù)量或嚴重程度，或減少所述個體中的所述一個或多個癥狀的數(shù)量或嚴重程度的增加速率，例如，和/或結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥的一個或多個癥狀的可檢測改善。在多個具體的實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞減少(例如可檢測地減少)所述個體的一種或多種肉芽腫的數(shù)量或嚴重程度，或減少所述個體的一種或多種肉芽腫的數(shù)量或嚴重程度的增加速率。在一個實施方案中，所述治療有效量是導致所述結(jié)節(jié)病的至少一個癥狀有可檢測改善的量。在一個具體的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病，并且所述癥狀包括肉芽腫的形成、疲勞、體重減輕、發(fā)熱、酸痛、疼痛、關節(jié)炎、干眼癥、膝關節(jié)腫脹、視力模糊、呼吸短促、咳嗽或皮膚病損中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是皮膚結(jié)節(jié)病，并且所述癥狀包括皮膚病損。在一個更具體的實施方案中，所述皮膚結(jié)節(jié)病包含環(huán)形結(jié)節(jié)病、紅皮病型結(jié)節(jié)病、魚鱗癬狀結(jié)節(jié)病、色素沉著不足結(jié)節(jié)病、硬斑病狀結(jié)節(jié)病、粘膜結(jié)節(jié)病、丘疹性結(jié)節(jié)病、瘢痕結(jié)節(jié)病、皮下結(jié)節(jié)病或潰瘍性結(jié)節(jié)病中的一種或多種。在一個更具體的實施方案中，所述皮膚 病損包含結(jié)節(jié)性紅斑、錢幣狀濕疹、多形性紅斑、皮膚鈣質(zhì)沉著癥和瘙癢癥、凍瘡樣狼瘡、皮膚斑、斑丘疹、皮膚中更深部的結(jié)節(jié)性病損或舊疤痕的浸潤中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是L0fgren氏綜合征，并且所述癥狀包括結(jié)節(jié)性紅斑、雙側(cè)肺門淋巴結(jié)腫大、關節(jié)炎、關節(jié)疼痛或發(fā)熱中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是神經(jīng)結(jié)節(jié)病，并且所述癥狀包括神經(jīng)系統(tǒng)中肉芽腫的形成、頭痛、精神混亂、不適或面部麻痹中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是肺結(jié)節(jié)病，并且所述癥狀包括咳嗽、呼吸短促、胸痛、胸悶感、聲音撕啞、鼻塞和反復或持久的鼻竇炎中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是心臟結(jié)節(jié)病，并且所述癥狀包括胸痛、心悸、充血性心力衰竭、心包炎或乳頭肌功能紊亂、呼吸短促、踝關節(jié)腫脹、不規(guī)則心跳或猝死中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是眼結(jié)節(jié)病，并且所述癥狀包括紅眼或淚眼、肉芽腫性眼色素層炎、虹膜小結(jié)、視網(wǎng)膜脈絡膜炎、結(jié)膜炎、淚腺受累或突眼中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是具有其它器官或組織受累的結(jié)節(jié)病，例如具有骨骼肌、肝臟、血液、精神科、腎臟、脾臟、鼻竇、口、胃或腸、內(nèi)分泌系統(tǒng)、胸膜或生殖系統(tǒng)受累的結(jié)節(jié)病。在另一個具體的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是肺部組織或器官除外的一個或多個器官或組織的結(jié)節(jié)病。在一個更具體的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是肺除外的一個或多個器官或組織的結(jié)節(jié)病。在某些實施方案中，該治療方法包括將至少約1x107、5x107、1x108、5x108、1x109、5xl09或IxIOici個胎盤細胞給予所述個體。在另一個具體的實施方案中，所述胎盤細胞已在體外增殖不超過2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個群體倍增。在任何本文所述實施方案的另一個實施方案中，所述胎盤細胞在所述給予之前已經(jīng)過冷藏保存和解凍。在任何上述方法的某些實施方案中，所述胎盤細胞是附著在組織培養(yǎng)塑料器具上并且通過流式細胞術檢測是⑶34—、⑶10+、⑶105+和⑶200+。在一個具體的實施方案中，所述胎盤細胞具有分化成骨生成細胞或軟骨生成細胞的能力。在另一個實施方案中，所述胎盤細胞是附著在組織培養(yǎng)塑料器具上；通過流式細胞術檢測是⑶34—、⑶10+、⑶105+和⑶200+ ；并且具有分化成具有骨生成細胞或軟骨生成細胞的一個或多個特征(例如骨細胞或軟骨細胞的特征)的細胞的能力。在其它的實施方案中，所述胎盤細胞另外還具有分化成具有以下特征的細胞的能力神經(jīng)細胞或神經(jīng)原性細胞的一個或多個特征，例如神經(jīng)元的特征；神經(jīng)膠質(zhì)細胞的一個或多個特征，例如神經(jīng)膠質(zhì)或星形膠質(zhì)細胞的特征；脂肪細胞的一個或多個特征，例如脂肪細胞的特征；胰腺細胞的一個或多個特征；和/或心臟細胞的一個或多個特征。在另一個實施方案中，所述胎盤細胞通過流式細胞術和/或RT-PCR檢測是⑶34 _、CD10+、CD105+ 和 CD200+，以及 CD38 ' CD45 ' CD8(T、CD86 ' CD133、HLA-DR, DP, DQ'SSEA3'SSEA4、CD29+、CD44+、CD73+、CD90+、CD105+、HLA-A，B, C+、PDLΓ、ABC_p+ 和 / 或 0CT-4+中的一種或多種。在另一個實施方案中，所述胎盤細胞通過流式細胞術檢測是CD34_、⑶45'⑶10+、⑶90+、⑶105+和⑶200+。在另一個實施方案中，所述胎盤細胞通過流式細胞術檢測是 CD34 ^、CD45 ^、CD10+、CD80 ^、CD86 ^、CD90+、CD105+ 和 CD200+。在另一個實施方案中，所述胎盤細胞通過流式細胞術檢測是⑶34 -、⑶45 -、⑶10+、⑶80 -、⑶86 ^、⑶90+、⑶105+和⑶200+，并且另外還是⑶29+、⑶38 ^、⑶44+、⑶54+、SH3+或SH4+中的一種或多種。在另一 個實施方案中，所述胎盤細胞通過流式細胞術檢測是⑶34'⑶38'⑶45'⑶10+、⑶29+、CD44+、CD54+、CD73+、CD80 ^、CD86 ^、CD90+、CD105+ 和 CD200+。在另一個實施方案中，所述⑶34'⑶10+、⑶105+和⑶200+胎盤細胞另外還是CD117、CD133'KDIT(VEGFR20、HLA_A, B, C+、HLA_DP，DQ, DIT 或程序性死亡-I 配體(PDLl) +中的一種或多種，或其任何組合。在另一個具體的實施方案中，所述胎盤細胞通過流式細胞術檢測是 CD34' CD38' CD45' CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD73+、CD80' CD86' CD90+、CD105+、CD117'CD133'CD200+、KDIT(VEGFR20、HLA_A, B, C+、HLA_DP，DQ, DIT 或程序性死亡-I配體(PDLl)+。在另一個實施方案中，本文所述的胎盤細胞中的任一種另外還是ABC_p+(通過流式細胞術檢測)或0CT-4+(P0U5Fl+)(例如通過RT-PCR測定)，其中ABC-ρ是胎盤特異性ABC轉(zhuǎn)運蛋白(也稱為乳癌抗性蛋白(BCRP)及稱為米托蒽醌抗性蛋白(MXR))。在另一個實施方案中，本文所述的胎盤細胞中的任一種另外還是SSEA3_* SSEA4_，例如通過流式細胞術測定，其中SSEA3是階段特異性胚胎抗原3 (Stage Specific Embryonic Antigen 3)，而SSEA4是階段特異性胚胎抗原4。在另一個實施方案中，本文所述的胎盤細胞中的任一種另外還是SSEA3-和SSEA4'在本文所述方法的另一個實施方案中，本文所述的胎盤細胞中的任一種另外還是 MHC-I+ (例如 HLA-A, B, C+)、MHC-IΓ (例如 HLA-DP, DQ, DIT)或 HLA-G—中的一種或多種。在另一個實施方案中，本文所述的胎盤細胞中的任一種通過流式細胞術檢測另外還是MHC-I+ (例如 HLA-A, B, C+)、MHC-II _ (例如 HLA-DP, DQ, DIT)和 HLA-G _ 中的每一種。在另一個實施方案中，所述⑶34'⑶10+、⑶105+、⑶200+細胞另外還是⑶29+、CD38 _、CD44+、CD54+、CD80 _、CD86 _、SH3.或SH4+中的一種或多種。在另一個實施方案中，所述細胞另外還是⑶44+。在另一個實施方案中，所述⑶34'⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盤細胞另外還是 CD13+、CD29+、CD33+、CD38_、CD44+、CD45_、CD54+、CD62E ' CD62L、CD62P、SH3+ (CD73+)、SH4+ (CD73+)、CD8(T、CD86 ' CD90+、SH2+ (CD 105+)、CD 106/VCAM+、CD 117、CD 144/VE-鈣粘著蛋白低、CD184/CXCR4 ' CD133 ' OCT-4+、SSEA3 ^、SSEA4 ^、ABC_p+、KDR- (VEGFR2-)、HLA-A, B, C+、HLA-DP, DQ, DR_、HLA-G^或程序性死亡-I配體(TOLl)+中的一種或多種，或其任何組合。在另一個實施方案中，所述⑶34_、⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盤細胞通過流式細胞術檢測另外還是 CD13+、CD29+、CD33+、CD38 ^、CD44+、CD45 ^、CD54/ICAM+、CD62E ^、CD62L'CD62P' SH3+(CD73+)、SH4+(CD73+), CD8(T、CD86' CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CD 117 ' CD 144/VE-鈣粘著蛋白 diD1、CD 184/CXCR4 ' CD 133 ' OCT-4+、SSEA3 ^、SSEA4 ^、ABC_p+、KDR- (VEGFR2 ^)、HLA-A, B, C+、HLA-DP, DQ, DR' HLA-G-和程序性死亡-I 配體(PDLl)+。在本文所公開的方法的其它實施方案中，所述分離的胎盤細胞通過流式細胞術檢測是 CD200.和 HLA-G- ;CD73+、CD105+ 和 CD200. ;CD200+ 和 OCT-4+ ;CD73+、CD105+ 和 HLA-G-；CD73+和CD105+ ;或0CT-4+ ;或其任何組合。在本文所公開的方法的某些實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶10+、⑶29+、CD34' CD38' CD44+、CD45' CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3' SSEA4' OCT-4+、MHC-I+或ABC-P+中的一種或多種，其中ABC-p是胎盤特異性ABC轉(zhuǎn)運蛋白(也稱為乳癌抗性蛋白(BCRP)及稱為米托蒽醌抗性蛋白(MXR))。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是CD10+、CD29+、CD34 ^、CD38 ^、CD44+、CD45 ^、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3 ^、SSEA4 ^ 和 0CT-4+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶10+、⑶29+、⑶34 _、⑶38 _、⑶45 _、CD54+、SH2+、SH3+和SH4+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是CD10+、CD29+、CD34_、⑶38 —、⑶45 —、⑶54+、SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是 CD10+、CD29+、CD34 ^、CD38 ^、CD44+、CD45 ^、CD54+、CD90+、MHC-1+、SH2+、SH3+、SH4+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+和ABC-p+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是OCT-4+、CD34 ^、SSEA3 ^ 和 SSEA4 ^。在一個具體的實施方案中，所述 OCT-4+、CD34 ^、SSEA3 ^和 SSEA4-細胞另外還是 CD10+、CD29+、CD34'CD44+、CD45'CD54+、CD90+、SH2+、SH3+和 SH4+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+和⑶34_，且或是SH3+或SH4+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶34 —且或是⑶10+、⑶29+、⑶44+、⑶54+、⑶90+或0CT-4+。在某些實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶10+、⑶34—、⑶105+和⑶200+。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法中的分離的胎盤細胞是CD10+、CD29' CD44+、CD45' CD54/ICAM' CD62-E' CD62-L' CD62-P' CD8(T、CD86' CD103、CD104'CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-鈣粘著蛋白 dini、CD184/CXCR4' β 2-微球蛋白 din1、MHC-Idim、MHC-IΓ、HLA-Gdim和/或I3DLldim中的一種或多種。在某些實施方案中，這樣的胎盤細胞至少是⑶29_和⑶54_。在另一個實施方案中，這樣的分離的胎盤細胞至少是⑶44+和⑶106+。在另一個實施方案中，這樣的分離的胎盤細胞至少是⑶29+。在任何上述特征的某些實施方案中，細胞標記(例如分化簇或免疫原性標記)的表達是通過流式細胞術測定的。在某些其它的實施方案中，細胞標記的表達是通過RT-PCR測定的。在另一個實施方案中，可用于本文所公開方法中的所述胎盤細胞，例如，所述⑶10+、⑶34_、⑶105+、⑶200+細胞，以比同等數(shù)量骨髓衍生間充質(zhì)干細胞高的可檢測水平表達一個或多個基因，其中所述的一個或多個基因是ACTG2、ADARBU AMIG02、ARTS-UB4GALT6、BCHE、Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、MEST, NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A中的一種或多種，并且其中所述的骨髓衍生間充質(zhì)干細胞在培養(yǎng)物中經(jīng)歷了同所述分離的胎盤細胞已經(jīng)歷的傳代數(shù)相等的傳代數(shù)。在某些實施方案中，所述一個或多個基因的所述表達是例如通過RT-PCR或微陣列分析測定的，例如使用U133-A微陣列(Affymetrix)。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞當培養(yǎng)例如從約3到約35個群體倍增不等時，在包含以下成分的培養(yǎng)基中表達所述一個或多個基因60%DMEM-LG (例如來自Gibco)和40%MCDB_201 (例如來自Sigma) ;2%胎牛血清(例如來自HycloneLabs. ) ;Ix胰島素_轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒(ITS) ;lx亞油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ;10_9M地塞米松(例如來自Sigma) ; 10_4M抗壞血酸2-磷酸酯(例如來自Sigma) ;10ng/mL表皮生長因子(例如來自R&DSystems);和10ng/mL血小板衍生生長因子(TOGF-BB)(例如來自R&D Systems)。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞當培養(yǎng)從約3到約35個群體倍增時，在包含以下成分的培養(yǎng)基中表達所述一個或多個基因60%DMEM-LG (例如來自Gibco)和40%MCDB_201 (例如來自Sigma) ;2%胎牛血清(例如來自Hyclone Labs. ) ; Ix胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒(ITS) ; Ix亞油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA)；10_9M地塞米松(例如來自Sigma) ; 10_4M抗壞血酸2-磷酸酯(Sigma) ;10ng/mL表皮生長因子(例如來自R&D Systems);和10ng/mL血小板衍生生長因子(I3DGF-BB)(例如來自R&D Systems)。在有些實施方案中，所述胎盤細胞表達⑶200但不表達HLA-G，或表達⑶73、⑶105和CD200，或表達CD200和0CT-4，或表達CD73和CD105但不表達HLA-G，或表達CD73和CD105并且當包含所述干細胞的胎盤細胞群體是在允許胚胎樣小體(embryoid-likebody)形成的條件下培養(yǎng)時促進在所述群體中形成一個或多個胚胎樣小體，或表達0CT-4并且當包含所述干細胞的胎盤細胞群體是在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時促進在所述群體中形成一個或多個胚胎樣小體。在某些實施方案中，所述胎盤細胞以比同等數(shù)量骨髓衍生間充質(zhì)干細胞(BM-MSCs)高的可檢測水平表達CD200和ARTSUl型腫瘤壞死因子的氨肽酶調(diào)節(jié)物)；ARTS-I和LRAP(白細胞衍生精氨酸氨肽酶)；IL6(白介素_6)和TGFB2(轉(zhuǎn)化生長因子，β2) ;IL6和KRT18(角蛋白18) ;IER3 (立即早期應答3)、MEST (中胚層特異性轉(zhuǎn)錄物同系物)和 TGFB2 ;CD200 和 IER3 ;CD200 和 IL6 ;CD200 和 KRT18 ;CD200 和 LRAP ;CD200 和MEST KD200和NFE2L3 (核因子(類紅細胞衍生2)樣3);或⑶200和TGFB2，其中所述骨髓衍生間充質(zhì)干細胞在培養(yǎng)物中經(jīng)歷了同所述分離的胎盤細胞已經(jīng)歷的傳代數(shù)相等的傳代數(shù)。在其它的實施方案中，所述胎盤細胞以比同等數(shù)量骨髓衍生間充質(zhì)干細胞BM-MSCs高的可檢測水平表達 ARTS-1、CD200、IL6 和 LRAP ；ARTS-U IL6、TGFB2、IER3、KRT18 和 MEST ；CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3，和 TGFB2 ;ARTS_1、CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3和TGFB2 ;或IER3、MEST和TGFB2，其中所述骨髓衍生間充質(zhì)干細胞在培養(yǎng)物中經(jīng)歷了同所述分離的胎盤細胞已經(jīng)歷的傳代數(shù)相等的傳代數(shù)。在各種不同的實施方案中，可用于本文所公開方法中的所述分離的胎盤細胞，例如胎盤干細胞或胎盤多能細胞，都包含在細胞群體里面，其中所述群體中細胞的至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99%是所述分離的胎盤細胞。在某些其它的實施方案中，所述細胞群體中的胎盤細胞基本上不含具有母體基因型的細胞；例如，在所述群體中的胎盤細胞的至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%具有胎兒基因型，即是來源于胎兒的。在某些其它的實施方案中，包含所述胎盤細胞的細胞群體基本上不含具有母體基因型的細胞；例如，在所述群體中的細胞的至少 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%具有胎兒基因型，即是來源于胎兒的。在某些其它的實施方案中，包含所述胎盤細胞的細胞群體包含具有母體基因型的細胞；例如，在所述群體中的細胞的至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99% 具有母體基因型，即是母體來源的。在本文所述胎盤細胞(例如PDACs)的任何實施方案的一個實施方案中，當包含所述分離的胎盤細胞的胎盤細胞群體是在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時，例如在增殖條件下培養(yǎng)時，所述胎盤細胞促進在所述群體中形成一個或多個胚胎樣小體。在本文所公開的任何胎盤細胞的某些實施方案中，所述細胞是人的。在某些實施方案中，任何胎盤細胞，例如本文所述的胎盤干細胞或胎盤多能細胞， 對接受者來說都是自體的。在某些其它的實施方案中，任何胎盤細胞，例如本文所述的胎盤干細胞或胎盤多能細胞，對接受者來說都是異源的。在某些實施方案中，所述胎盤細胞在所述給予之前是冷藏保存的。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是從胎盤細胞庫(例如PDAC庫)獲得的。在分離的胎盤細胞的上述實施方案的任一個中，所述分離的胎盤細胞在生長培養(yǎng)基即配制成促進增殖的培養(yǎng)基中在培養(yǎng)期間一般不分化，例如，在生長培養(yǎng)基中在增殖期間一般不分化。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞不需要飼養(yǎng)層來增殖。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞僅僅在飼養(yǎng)細胞層不存在時培養(yǎng)的培養(yǎng)物中不分化。在某些實施方案中，所述分離的胎盤細胞是通過灌注產(chǎn)后胎盤獲得的，該產(chǎn)后胎盤已排干血液并經(jīng)灌注去掉殘留血液；已排干血液但不灌注去掉殘留血液；或者既不排干血液也不經(jīng)灌注去掉殘留血液。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是通過物理和/或酶促破壞胎盤組織獲得的。在下文第4. 2節(jié)詳細描述了可用于本文提供的方法中的胎盤細胞的細胞表面標記、分子標記和遺傳標記。在多個具體的實施方案中，要給予胎盤干細胞的所述個體另外還給予第二種療法(例如第二種治療劑)中的一種或多種，其中所述的第二種療法(例如第二種治療劑)包含抗炎藥、類固醇藥、免疫抑制藥、抗生素、TNF-α抑制劑(例如英夫利昔單抗(infliximab)、阿達木單抗(adalimumab))、PDE_4抑制劑(例如apremiliast)、IL_12抑制劑、IL-23抑制齊U、阿肽地爾(aviptadil)、IFN- Y抑制劑或抗痕藥(例如氯喹(chloroquine)或輕氯喹(hydroxychloroquine))。可用于治療結(jié)節(jié)病、或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥的抗炎藥的實例包括但不限于美沙拉嚷(mesalamine)、5_ASA(5_ 氛基水楊酸(5_aminosalicylic acid))類藥(例如ASACOL (美沙拉嗪(mesalamine),緩釋劑型)、DIPENTUM(奧沙拉嗪(Osalazine))、PENTASA (美沙拉嗪(mesalamine),控釋劑型))、柳氮磺胺卩比唳(sulfasalazine)(5-ASA和磺胺卩比唳(sulfapyridine)的組合)、抗炎抗體類藥(例如英夫利昔單抗(infliximab) (REM1CADE ))等?？捎糜谥委熃Y(jié)節(jié)病、或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥的類固醇藥的實例包括但不限于可的松(cortisone)、氫化可的松(hydrocortisone)、潑尼松(predisone)、甲基潑尼松(methylprednisone)等。典型地，根據(jù)本領域的實踐，類固醇藥的劑量首先以相對大的劑量遞送，然后隨著炎癥消退(inflammation subsides)而遞送較小的劑量?？捎糜谥委熃Y(jié)節(jié)病、或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的免疫抑制藥的實例包括但不限于環(huán)孢菌素A(cyclosporine A)、6_巰基嘌呤(6_mercaptopurine)或硫唑嘌呤(azathioprine)。任何抗生素類藥都可以用于治療克羅恩病(Crohn’ s disease),包括例如氨節(jié)西林(ampicillin)、磺酰胺(sulfonamide)、頭孢菌素(cephalosporin)、四環(huán)素(tetracycline)和/或甲硝唑(metronidazole)。在另一個具體的實施方案中，所述的第二種療法是給予豬鞭蟲(porcine whipworms),例如豬鞭蟲(Trichuris suis)的卵。在另一個實施方案中，對于局部或系統(tǒng)施用,可以通過移植、植入(例如植入細胞本身或作為基質(zhì)-細胞組合的組成部分的細胞)、注射(例如直接注射到疾病或病癥部位，例如直接注射到肉芽腫)、輸注、通過導管遞送或用于提供細胞療法的本領域已知的任何其它手段，完成將胎盤細胞(例如PDACs)或包含此類細胞的治療組合物給予有需要的個體。在其它實施方案中，可以通過靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、心室內(nèi)、尿道內(nèi)、胸骨內(nèi)、顱內(nèi)、肌內(nèi)、 滑膜內(nèi)、眼內(nèi)、玻璃體內(nèi)(例如在有眼受累的情況下)、大腦內(nèi)、腦室內(nèi)(例如在有神經(jīng)或腦受累的情況下)、心臟內(nèi)(例如在有心臟受累的情況下)、鞘內(nèi)、骨內(nèi)輸注、膀胱內(nèi)、和經(jīng)皮、腦池內(nèi)、硬膜外、皮下施用，將胎盤細胞(例如PDACs)或包含此類細胞的治療組合物遞送到某個個體。在多個具體的實施方案中，將胎盤細胞局部地給予(例如直接給予)一個或多個由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的受損害組織內(nèi)或其附近(例如在所述受損害組織的l-5cm以內(nèi))。在多個具體的實施方案中,將胎盤細胞病損內(nèi)(intralesionally)給予(例如直接給予)一個或多個由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的病損或肉芽腫內(nèi)或其附近(例如在所述病損或肉芽腫的l_5cm以內(nèi))。在某些實施方案中，將胎盤細胞與基質(zhì)(例如可注射基質(zhì))組合給予。在某些其它的實施方案中，將胎盤細胞與固體基質(zhì)(例如骨代用品)組合給予患有結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的個體，其中基質(zhì)或骨代用品在下文第4. 7. 4節(jié)中有示例性描述。在上述方法的另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是通過大劑量(bolus)注射給予的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是通過靜脈內(nèi)輸注給予的。在一個具體的實施方案中，所述靜脈內(nèi)輸注是靜脈內(nèi)輸注約I至約8小時。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是給予顱內(nèi)的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是給予腹膜內(nèi)的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是給予動脈內(nèi)的。在該治療方法的另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是給予肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下或眼內(nèi)的。在上述方法的另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是通過手術植入給予所述個體一種包含所述分離的胎盤細胞的物質(zhì)組合物(composition of matter)。在一個具體的實施方案中，所述物質(zhì)組合物是基質(zhì)(matrix)或支架(scaffold)。在另一個具體的實施方案中，所述基質(zhì)或支架是水凝膠。在另一個具體的實施方案中，所述基質(zhì)或支架是去細胞化組織。在另一個具體的實施方案中，所述基質(zhì)或支架是合成的生物可降解的組合物。在另一個具體的實施方案中，所述基質(zhì)或支架是泡沫。在上述方法的另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞給予所述個體一次。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞分兩次或更多次獨立用藥給予所述個體。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括給予介于約IxlO4和IxlO5之間的分離的胎盤細胞，例如，胎盤細胞/千克所述個體。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括給予介于約IxlO5和IxlO6之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括給予介于約IxlO6和IxlO7之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括給予介于約IxlO7和IxlO8之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體。在其它具體的實施方案中，所述給予包括給予介于約IxlO6和約2xl06之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體；介于約2xl06和約3xl06之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體；介于約3xl06和約4xl06之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體；介于約4xl06和約5xl06之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體；介于約5xl06和約6xl06之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體；介于約6xl06和約7xl06之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體；介于約7xl06和約SxlO6之間的分離的胎盤 細胞/千克所述個體；介于約SxlO6和約9xl06之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體；或介于約9xl06和約IxlO7之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括將介于約IxlO7和約2xl07之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體給予所述個體。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括將介于約I. 3xl07和約I. 5xl07之間的分離的胎盤細胞/千克所述個體給予所述個體。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括將高達約3xl07分離的胎盤細胞/千克所述個體給予所述個體。在一個具體的實施方案中，所述給予包括將介于約5xl06和約2xl07之間的分離的胎盤細胞給予所述個體。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括將約20毫升溶液中的約150xl06分離的胎盤細胞給予所述個體。在一個具體的實施方案中，所述給予包括將介于約5xl06和約2xl07之間的分離的胎盤細胞給予所述個體，其中所述細胞是含在包含10%右旋糖酐(例如右旋糖酐_40)、5%人血清白蛋白和任選的免疫抑制劑的溶液中。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括將介于約5xl07和3xl09之間的分離的胎盤細胞給予靜脈內(nèi)。在多個具體的實施方案中，所述給予包括將約9xl08分離的胎盤細胞或約I. 8xl09分離的胎盤細胞給予靜脈內(nèi)。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括將介于約5xl07和IxlO8之間的分離的胎盤細胞給予病灶內(nèi)。在另一個具體的實施方案中，所述給予包括將約9xl07分離的胎盤細胞給予病灶內(nèi)。3. I.定義本文所用的術語“約”，當指陳述的數(shù)值時，表示在所陳述數(shù)值的±10%以內(nèi)的值。本文所用的術語“SH2”是指結(jié)合細胞標記⑶105上的表位的抗體。因此，被稱作SH2+的細胞是CD105+。本文所用的術語“SH3”和SH4”是指結(jié)合細胞標記⑶73上存在的表位的抗體。因此，被稱作SH3+和/或SH4+的細胞是⑶73+。胎盤具有在其里面發(fā)育的胎兒的基因型，但在妊娠期間也與母體組織有密切的物理接觸。所以，本文所用的術語“胎兒基因型”意指胎兒的基因型，例如，與從中獲得特殊的分離胎盤細胞(如本文所述的)的胎盤相關的胎兒的基因型，而不是懷胎兒的母親的基因型。本文所用的術語“母體基因型”意指懷胎兒(例如與從中獲得特殊的分離胎盤細胞(如本文所述的)的胎盤相關的胎兒)的母親的基因型。
本文所用的術語“肉芽腫”是指由于炎癥反應生成的免疫細胞的球狀集合體，舉例來說，當免疫系統(tǒng)試圖消滅被視為外來的物質(zhì)(例如感染性生物體例如細菌和真菌以及其它材料例如角蛋白、縫線碎片和植物顆粒)但無法將其消滅時。本文所用的術語“分離的細胞”，例如“分離的胎盤細胞(isolatedplacentalcell) ”、“分離的胎盤干細胞(isolated placental stem cell) ”等,意指基本上與從中獲得干細胞的組織(例如胎盤)的其它不同細胞分離開的細胞。如果細胞，例如非干細胞(干細胞是與其天然締合的)或展示不同標記概況(marker profile)的干細胞的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%，例如在干細胞的收集和/或培養(yǎng)期間從干細胞中取出，則這種細胞就是“分離的”。本文所用的“多能的”，當提及細胞時，意指細胞具有分化成某些、但不一定是所有類型的體細胞，或者分化成具有某些、但不是具有所有類型的體細胞的特征的細胞，或者分化成具有三個胚層(three germlayers)的一層或多層的細胞的能力。在某些實施方案中，例如，分離的胎盤細胞(PDAC)，如下文第4. 2節(jié)所描述的，其具有分化成具有神經(jīng)生成細胞(neurogenic cell)、軟骨生成細胞(chondrogenic cell)和 / 或骨生成細胞(osteogenic cell)的特征的能力，就是一種多能細胞。本文所用的術語“分離的細胞群體”意指基本上與從中獲得細胞群體的組織(例如胎盤)的其它細胞分離開的細胞群體。本文所用的術語“胎盤細胞”是指從哺乳動物胎盤(例如，如下文第4. 2節(jié)所描述的)分離出來的或從哺乳動物胎盤分離的細胞培養(yǎng)出來的干細胞或祖細胞，在本文中也稱為“PDACs”，或者稱為原代分離的細胞或培養(yǎng)的細胞，不論在原代培養(yǎng)之后的傳代數(shù)如何。在某些實施方案中，然而，本文所用的術語“胎盤細胞”不是指滋養(yǎng)層細胞(toophoblasts)、細胞滋養(yǎng)層細胞(cytotrophoblasts)、合胞體滋養(yǎng)層細胞(syncitiotrophoblasts)、成血管細胞(angioblasts)、成血成血管細胞(hemangioblasts)、胚胎生殖細胞、胚胎干細胞、從囊胚細胞的內(nèi)層細胞質(zhì)中獲得的細胞、或從晚期胚胎的性腺嵴中獲得的細胞，例如胚胎生殖細胞；并且本文提供的方法中所用的胎盤細胞也不是以上提及的細胞。如果細胞顯示出干細胞的屬性，例如與一種或多種干細胞類型相關的標記或基因表達概況；在培養(yǎng)物中復制至少10-40次的能力，和分化成顯示出三個胚層的一層或多層的分化細胞的特征的能力，那么這種細胞被視為“干細胞”。除非本文中另有說明，否則術語“胎盤的”包括臍帶。本文所公開的分離的胎盤細胞，在某些實施方案中，在分化條件下能在體外(in vitro)分化，在體內(nèi)(in vivo)分化,或者它們兩者。當特定標記超過背景是可檢測的時候，本文所用的胎盤細胞對于該標記來說是“陽性的”。特定標記的檢測，可以例如或者通過使用抗體、或者通過基于編碼標記的基因或mRNA序列的寡核苷酸探針或引物來完成。例如，胎盤細胞對于例如CD73是陽性的，因為CD73在胎盤細胞上以可檢測地大于背景(與例如同種型(isotype)對照相比較)的量是可檢測的。當標記可用于將一種細胞與至少另一種細胞類型區(qū)別開，或者可用于選擇或分離細胞(當標記存在或者由細胞表達時)時，則這種細胞對于該標記也是陽性的。在例如抗體介導的檢測的情況下，“陽性”，作為特定細胞表面標記的指示存在時，意指使用對該標記有特異性的抗體例如熒光標記的抗體，該標記是可檢測的，“陽性”也指以產(chǎn)生信號的量展示標記的細胞，例如在細胞計數(shù)器(cytometer)中，即超過背景是可檢測的。舉例來說，若細胞用對⑶200有特異性的抗體可檢測地標記，并且來自該抗體的信號可檢測地高于對照(例如背景或同種型對照)的信號，那么該細胞就是“CD200+”。反過來說，在相同情況下中的“陰性”意指與對照(例如背景或同種型對照)相比，使用對細胞表面標記有特異性的抗體，該標記是不可檢測的。舉例來說，若細胞用對CD34有特異性且程度大于對照的抗體無法可再現(xiàn)可檢測地標記，那么這種細胞就是“CD34—”。使用合適的對照，使用抗體無法檢測或無法可檢測的標記，以同樣的方式確定為是陽性還是陰性。舉例來說，如果在來自細胞或細胞群體的RNA中檢出的OCT-4 RNA量是可檢測地大于背景，如例如通過RNA檢測法例如RT-PCR、狹線印跡法(slot blot)等測定的，那么這種細胞或細胞群體可被確定是OCT-4+。除非本文中另有說明，否則使用抗體來檢測分化簇(cluster of differentiation, “CD”)標記。在某些實施方案中，如果使用RT-PCR，0CT-4是可檢測的，那么0CT-4被確定是存在的，且細胞是“0CT-4+”。本文所用的表述語“低”，當涉及流式細胞術中可檢測的標記表達時，意指標記表達少于被測細胞的10%，或者在例如流式細胞術中，歸因于標記的熒光超過背景小于llog。本文所用的“治療”包括疾病、障礙或病癥(例如sarcpodpsos)或其任何參數(shù)或 癥狀的嚴重性得到緩解、改善、減輕，或者其時程縮短。4.發(fā)明詳述4. I結(jié)節(jié)病或由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的疾病、障礙或病癥的治療本文提供的是治療結(jié)節(jié)病或由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的疾病或障礙的方法，包括給予有效量的組織培養(yǎng)塑料器具貼壁的胎盤干細胞，例如PDACs，正如下文第4. 2節(jié)所描述的。下文詳細論述了用于治療此類個體和用于給予此類干細胞(單獨或與其它療法組合)的方法。4. I. I 結(jié)節(jié)病結(jié)節(jié)病是一種多系統(tǒng)肉芽腫性炎癥性疾病。該病是以多個器官中有小的、肉芽性的炎癥病損或肉芽腫(例如非干酪性肉芽腫)的形成，和/或在受累的組織或器官中免疫應答的存在(例如CD4+T淋巴細胞和巨噬細胞的存在)為典型特征。肉芽腫性炎癥可歸因于單核細胞、巨噬細胞、明顯Thl應答和活化T-淋巴細胞的累積，伴有TNF- a、IL-2、IL-12、IFN- y、IL-I、IL-6 或 IL-15 的產(chǎn)生升高。結(jié)節(jié)病可以是系統(tǒng)性的(例如系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病)或局部的(例如局灶性類肉瘤樣反應)。肉芽腫可在幾乎任何器官中出現(xiàn)，但在肺或淋巴結(jié)中最為常見。其它的常見部位包括肝、脾、皮膚和眼。特定器官的受累在程度上可以是溫和的或嚴重的、自限性的或慢性的、和限制的或廣泛的。癥狀常常是逐漸出現(xiàn)的，但可突然偶發(fā)出現(xiàn)。結(jié)節(jié)病患者所經(jīng)歷的常見癥狀包括疲勞、呼吸短促、咳嗽不止、面部、手臂或小腿上的皮損或皮疹、眼的炎癥、體重減輕、盜汗、呼吸困難、咳嗽、胸部不適、啰音(crackles)、倦怠、虛弱、厭食、體重減輕或發(fā)熱。其它癥狀包括例如淋巴腺腫大(腋窩腫塊)、肝腫大、脾腫大、口干或鼻出血。下文描述了不同類型結(jié)節(jié)病的癥狀。臨床病程一般變化較大。在有些實施方案中，結(jié)節(jié)病可以是無癥狀的。在其它的實施方案中，組織或器官可以仍然發(fā)炎或變成瘢痕性的或纖維化的，如果組織或器官中的一種或多種肉芽腫不愈合的話。在又一些實施方案中，結(jié)節(jié)病可引起致虛弱的慢性病，最終可導致死亡(例如不可逆的肺纖維化)。
因此，在一個方面，本文所提供的PDACs、此類細胞的群體和包含PDACs的細胞群體，都可用于治療表現(xiàn)結(jié)節(jié)病、或由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的一種或多種疾病、障礙或病癥的個體。在一個具體的實施方案中，本文提供的是治療患有結(jié)節(jié)病的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善。在一個具體的實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞減少(例如可檢測地減少)所述個體的一種或多種肉芽腫的數(shù)量或嚴重程度，或減少所述個體的一種或多種肉芽腫的數(shù)量或嚴重程度的增加速率。在另一個具體的實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞減少(例如可檢測地減少)單核細胞、巨噬細胞或活化T-淋巴細胞的數(shù)量,或減少單核細胞、巨噬細胞或活化T-淋巴細胞的數(shù)量的增加速率。在另一個具體的實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞減少(例如可檢測地減少)所述個體的一種或多種 TNF- a、IL-2、IL-12、IFN- y、IL_1、IL_6、IL-15 或 Thl 應答的水平，或減少其水平的增加速率。在某些實施方案中，所述結(jié)節(jié)病是系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病、皮膚結(jié)節(jié)病、L0i'gren氏綜合征、神經(jīng)結(jié)節(jié)病、肺結(jié)節(jié)病、心臟結(jié)節(jié)病、眼結(jié)節(jié)病、肝臟結(jié)節(jié)病、骨骼肌結(jié)節(jié)病、腎臟結(jié)節(jié)病或 具有其它器官或組織受累的結(jié)節(jié)病中的一種或多種。系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病-是具有多器官受累的結(jié)節(jié)病。在一個實施方案中，本文提供的是治療患有系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善。在有些實施方案中，所述的系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀包括非特異性全身癥狀，例如體重減輕、疲勞、食欲減退、發(fā)熱、發(fā)冷、盜汗、肉芽腫的形成、疲勞、酸痛、疼痛或關節(jié)炎。在其它的實施方案中，系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病可與受累的特定器官有關的特異性癥狀同時出現(xiàn)(例如干眼癥、膝關節(jié)腫脹、視力模糊、呼吸短促、咳嗽、皮膚病損(例如皮疹)等)。在多個具體的實施方案中，所述特異性癥狀是肺、肺淋巴、骨骼肌、肝臟、關節(jié)、血液、皮膚、眼、精神科、神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟、脾臟、神經(jīng)、鼻竇、心臟、骨、口、胃、腸、內(nèi)分泌系統(tǒng)、胸膜或生殖系統(tǒng)癥狀中的一種或多種。皮膚結(jié)節(jié)病-是一種具有皮膚受累的結(jié)節(jié)病的并發(fā)癥。在另一個實施方案中，本文提供的是治療患有皮膚結(jié)節(jié)病的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述皮膚結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述皮膚結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善。在某些實施方案中，所述皮膚結(jié)節(jié)病包含環(huán)形結(jié)節(jié)病、紅皮病型結(jié)節(jié)病、魚鱗癬狀結(jié)節(jié)病、色素沉著不足結(jié)節(jié)病、硬斑病狀結(jié)節(jié)病、粘膜結(jié)節(jié)病、丘疹性結(jié)節(jié)病、瘢痕結(jié)節(jié)病、皮下結(jié)節(jié)病和潰瘍性結(jié)節(jié)病。在有些實施方案中，所述的皮膚結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀包括多種皮膚病損或病癥、或特異性或非特異性(例如類似于一些其它的皮膚病)。示例性的與皮膚結(jié)節(jié)病相關的皮膚病損或病癥包含丘疹(例如肉芽腫性紅斑痤瘡、粉刺或良性皮膚附屬器官腫瘤)、皮膚斑(例如銀屑病、扁平苔蘚、錢幣狀濕疹、盤狀紅斑狼瘡、環(huán)形肉芽腫、皮膚T-細胞淋巴瘤、卡波西肉瘤(Kaposi’ ssarcoma)或第二期梅毒)、凍瘡樣狼瘡(例如瘡疤或盤狀紅斑狼瘡)、結(jié)節(jié)性紅斑(例如凸起、發(fā)紅、松馳的皮膚疼痛、蜂窩織炎、癤病或其它炎癥性脂膜炎)、斑丘疹、皮膚中更深部的結(jié)節(jié)性病損或舊疤痕的浸潤。其它皮膚癥狀包括例如皮疹、舊疤痕變得更凸起、皮膚病損或脫發(fā)。/j汝re/ 氏綜合征-代表系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病的一種急性表現(xiàn)，它以結(jié)節(jié)性紅斑、雙側(cè)肺門淋巴結(jié)腫大和關節(jié)炎或關節(jié)疼痛三聯(lián)癥為典型特征。它也可以伴有發(fā)熱。在另一個實施方案中，本文提供的是治療患有LGfgren氏綜合征的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述L0fgi'en氏綜合征的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述LGfgren氏綜合征的一個或多個癥狀的可檢測改善。在多個具體的實施方案中，所述一個或多個癥狀包括結(jié)節(jié)性紅斑、雙側(cè)肺門淋巴結(jié)腫大、關節(jié)炎、關節(jié)疼痛或發(fā)熱。神經(jīng)結(jié)節(jié)病或神經(jīng)類肉瘤-是指在腦、脊髓和神經(jīng)系統(tǒng)的任何其它部位出現(xiàn)有炎癥和異常沉積的結(jié)節(jié)病。在另一個實施方案中，本文提供的是治療患有神經(jīng)結(jié)節(jié)病的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述神經(jīng)結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述神經(jīng)結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善。神經(jīng)結(jié)節(jié)病可累及神經(jīng)系統(tǒng)的任何部位，例如面部肌肉的神經(jīng)(顱神經(jīng)VII)，其可導致面神經(jīng)無力(例如面癱)、眼部神經(jīng)或控制味覺、嗅覺或聽力的神經(jīng)的癥狀。在有些實施方案中，神經(jīng)結(jié)節(jié)病的癥狀包括月經(jīng)期中的變化、過度疲乏(例如疲勞)、頭痛、視力變化、視網(wǎng)膜病變、神經(jīng)根痛(radicularpain)、腸或膀胱控制的喪失、腕管綜合征和/或截癱、過度口渴或高尿輸出。在其它的實施方案中，神經(jīng)結(jié)節(jié)病的癥狀包括精神混亂、定向障礙、聽力減退、癡呆或譫妄、頭昏(dizziness)或眩暈(例如運動的異常感覺)、復視覺或其它視力問題、面癱(虛弱、耷拉下垂)、頭痛、嗅覺或味覺的喪失、異常味覺、精神困擾、癲癰發(fā)作或言語減退、肌肉無力或感覺喪失，或者在有些情況下，垂體功能減退。在多個具體的實施方案中，神經(jīng)結(jié)節(jié)病的癥狀包括神經(jīng)系統(tǒng)(例如腦、脊髓、或面神經(jīng)和視神經(jīng))中肉芽腫的形成、頭痛、精神混亂、不適或面部麻痹。肺結(jié)節(jié)病-是指累及肺組織或器官(例如肺)的結(jié)節(jié)病。在另一個實施方案中，本文提供的是治療患有肺結(jié)節(jié)病的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述肺結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述肺結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善。肺結(jié)節(jié)病的癥狀通常包括肺部和/或胸部癥狀，這些癥狀可通過例如肺鎵(Ga)掃描、胸部X射線、肺功能試驗、運動脈搏氧飽和度(exercise pulseoximetry)、胸部的CT掃描、PET掃描、CT指導的活檢、縱隔鏡檢查術、開放肺活檢或支氣管鏡檢查法加活檢來確定。在某些實施方案中，肺結(jié)節(jié)病的癥狀包括肺泡隔、細支氣管和支氣管壁中的肉芽腫，呼吸短促、咳嗽、肺容積損失和異常的肺僵硬、肺功能異?；蛲嘶?、肺容積減小、順應性降低、肺組織的瘢痕形成或從肺組織出血。其它癥狀包括例如吸入肺部的空氣量有限、高·于正常呼氣流速、肺活量減小(完全呼入到完全呼出)、FEV1/FVC比率增加、阻塞性肺變化(其可引起可呼出的空氣量減少)或胸部淋巴結(jié)腫大(其可壓迫氣道)或當體內(nèi)炎癥或結(jié)節(jié)阻礙氣流時出現(xiàn)的肺高壓或肺衰竭。
雖然不受任何理論的束縛，但是Scadding標準是最常用于患有肺結(jié)節(jié)病的患者疾病分期的度量法。簡而言之，各期的影像學證據(jù)可描述如下1期雙側(cè)肺門和/或縱隔淋巴結(jié)病變(淋巴結(jié)腫大)；11期雙側(cè)肺門和/或縱隔淋巴結(jié)病變；肺浸潤的證據(jù)；III期實質(zhì)組織中的改變；無淋巴結(jié)腫大；和IV期肺纖維化的證據(jù)。因此，本文提供的是治療患有肺結(jié)節(jié)病或由肺結(jié)節(jié)病引起的或與肺結(jié)節(jié)病有關的疾病、障礙或病癥的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述肺結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述肺結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善，如通過Scadding標準確定的。在有些實施方案中，肺結(jié)節(jié)病可發(fā)展成肺纖維化(例如不可逆的肺纖維化)，其可使肺的結(jié)構(gòu)變形并且削弱呼吸或?qū)е轮夤軘U張，支氣管擴張是一種以大氣道的破壞和加寬為特征的肺病。因此，在一個具體的實施方案中，所述疾病或障礙是肺纖維化或支氣管擴張(bronchietasis)。在一個更具體的實施方案中,本文提供的是治療患有由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的肺纖維化(例如不可逆的肺纖維化)的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予 導致所述肺纖維化(例如不可逆的肺纖維化)的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述肺纖維化(例如不可逆的肺纖維化)的一個或多個癥狀的可檢測改善。在另一個具體的實施方案中，本文提供的是治療患有由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的支氣管擴張的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述支氣管擴張的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述支氣管擴張的一個或多個癥狀的可檢測改善。在其它的實施方案中，結(jié)節(jié)病可累及肺淋巴系統(tǒng)例如肺門(hilar)或縱隔受累，通過胸部X射線確定的，并且與無觸痛的外周或頸淋巴結(jié)病變的癥狀一同存在。心臟結(jié)節(jié)病-是指具有心肌受累的結(jié)節(jié)病。在另一個實施方案中，本文提供的是治療患有心臟結(jié)節(jié)病的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述心臟結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述心臟結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善。在有些實施方案中，心臟結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀類似于循環(huán)系統(tǒng)疾病或障礙的癥狀，例如，心肌梗塞、心肌病、動脈瘤、心絞痛、主動脈狹窄、主動脈炎、心律失常、動脈硬化、動脈炎、非對稱性心室間隔肥厚(ASH)、動脈粥樣硬化、心房顫動和快速跳動、細菌性心內(nèi)膜炎、巴洛綜合征(Barlow’ s Syndrome) (二尖瓣脫垂)、心動過緩、伯格病(Buerger’ sDisease)(血栓閉塞性脈管炎)、心臟肥大、心臟炎、頸動脈疾病、主動脈縮窄、先天性心臟缺損、充血性心力衰竭、冠狀動脈疾病、艾森門格爾綜合征(Eisenmenger’ s Syndrome)、栓塞、心內(nèi)膜炎、紅斑性肢痛病、顫動、肌纖維發(fā)育不良、心臟傳導阻滯(heartblock)、心臟雜音、高血壓、低血壓、特發(fā)性嬰兒動脈鈣化、川崎病(Kawasaki Disease)(粘膜皮膚淋巴結(jié)綜合征、粘膜皮膚淋巴結(jié)病、小兒多動脈炎)、代謝綜合征、微血管心絞痛、心肌炎、發(fā)作性心房心動過速(PAT)、結(jié)節(jié)性周圍動脈炎(多動脈炎、結(jié)節(jié)性多動脈炎)、心包炎、外周血管疾病、臨界肢體缺血、靜脈炎、肺瓣膜狹窄(肺動脈狹窄)、雷諾病(Raynaud’ sDisease)、腎動脈狹窄、腎血管性高血壓、風濕性心臟病、糖尿病性血管病變、間隔缺損、無癥狀心肌缺血(silentischemia)、X綜合征、心動過速、Takayasu動脈炎、法洛四聯(lián)癥(Tetralogy of Fallot)、大血管移位、三尖瓣閉鎖、永存動脈干(truncusarteriosus)、心瓣膜病、靜脈曲張性潰瘍、靜脈曲張、脈管炎、心室間隔缺損、午夫-帕金森-懷特綜合征(Wolff-Parkinson-WhiteSyndrome)、心內(nèi)膜墊缺損、急性風濕性發(fā)熱、急性風濕性心包炎、急性風濕性心內(nèi)膜炎、急性風濕性心肌炎、慢性風濕性心臟病、二尖瓣的疾病、二尖瓣狹窄、風濕性二尖瓣不足、主動脈瓣的疾病、其它心內(nèi)膜結(jié)構(gòu)的疾病、缺血性心臟病(急性和亞急性)、心絞痛、急性肺心臟病、肺栓塞、慢性肺心臟病、脊柱后側(cè)凸性心臟病、心肌炎、心內(nèi)膜炎、心內(nèi)膜心肌纖維化、心內(nèi)膜纖維彈性組織增生、房室阻滯、心臟節(jié)律障礙、心肌變性、腦血管疾病、動脈、小動脈和毛細血管的疾病、或血管和淋巴管的疾病。因此，在某些實施方案中，患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的個體的改善可以通過所述結(jié)節(jié)病或所述結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的一個或多個癥狀的可檢測改善來評價或證明，其中所述個體給予了本文提供的PDACs或治療組合物。在某些實施方案中，該方法包括將胎盤細胞按心臟功能的一個或多個指標足以 達到可檢測改善的用量和時間給予所述個體，其中所述的心臟功能的指標是胸部心臟輸出(CO)、心臟指數(shù)(Cl)、肺動脈楔壓(PAWP)、心臟指數(shù)(Cl)、％分數(shù)縮短(%FS)、射血分數(shù)(EF)、左心室射血分數(shù)(LVEF);左心室舒張末期直徑(LVEDD)、左心室收縮末期直徑(LVESD)、收縮率(dP/dt)、心房或心室功能降低、泵送效率增加、泵送效率的損失率減小、血液動力學功能的損失減小、或與心肌病變相關的并發(fā)癥減少，正如與給予所述PDACs之前的個體相比較的。在本文提供的治療方法的多個具體的實施方案中，所述PDACs是與干細胞(S卩，不是PDACs的干細胞)、成肌細胞、肌細胞、成心肌細胞、心肌細胞、或成肌細胞、肌細胞、成心肌細胞和/或心肌細胞的祖細胞一起給予的。在一個具體的實施方案中，本文提供的治療方法包括將PDACs (例如包含所述細胞的治療組合物)給予患有結(jié)節(jié)病或由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的疾病、障礙或病癥的患者；并且評估患者心臟功能的改善情況，其中所述治療用細胞組合物是作為基質(zhì)-細胞復合物(matrix-cell complex)給予的。在某些實施方案中，所述基質(zhì)是支架，優(yōu)選生物可吸收的，至少包含所述細胞。最后，本文進一步提供的是接觸過刺激干細胞或祖細胞沿著心臟生成(cardiogenic)途徑、血管生成(angiogenic)途徑、造血細胞生成(hemangiogenic)途徑或血管原性(vasculogenic)途徑分化的一個或多個因子的PDACs的群體，例如在以上提及的一個或多個因子存在下孵育或培養(yǎng)的PDACs的群體。這樣的因子包括但不限于諸如以下的因子生長因子、趨化因子、細胞因子、細胞產(chǎn)物、去甲基化劑、和現(xiàn)在已知刺激分化或以后決定刺激分化的其它因子，例如干細胞以及心臟生成途徑、血管生成途徑、造血細胞生成途徑或血管原性途徑或譜系的因子。在某些實施方案中，PDACs可以通過將所述細胞在包含去甲基化劑、BMP (骨形態(tài)發(fā)生蛋白)、FGF(成纖維細胞生長因子)、Wnt因子蛋白、Hedgehog蛋白和/或抗Wnt因子中的至少一個的因子存在下進行培養(yǎng)在體外沿著心臟生成途徑、血管生成途徑、造血細胞生成途徑或血管原性途徑或譜系分化。PDACs和此類細胞的群體，可以治療性地或預防性地提供給個體，例如，患有與結(jié)節(jié)病有關的心臟或循環(huán)系統(tǒng)的疾病、障礙或病癥的個體、或累及與結(jié)節(jié)病有關的心臟或循環(huán)系統(tǒng)的個體。這樣的疾病、障礙或病癥可包括由于動脈粥樣硬化所致的充血性心力衰竭、心肌病變或心臟損傷，例如缺血性損傷，例如來自心肌梗塞或創(chuàng)傷(急性或慢性)的。眼結(jié)節(jié)病-是累及眼的結(jié)節(jié) 病。在另一個實施方案中，本文提供的是治療患有眼結(jié)節(jié)病的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述眼結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述眼結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善。在某些實施方案中，眼結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀包括眼色素層炎(例如肉芽腫性眼色素層炎)、眼色素層腮腺炎、視網(wǎng)膜炎癥、視覺敏銳性喪失、紅色盲、淚眼、虹膜小結(jié)、視網(wǎng)膜脈絡膜炎、結(jié)膜炎、淚腺受累或突眼。具有骨骼肌、肝臟、血液、精神科、腎臟、脾臟、鼻竇、口、胃或腸、內(nèi)分泌系統(tǒng)、胸膜或生殖系統(tǒng)受累的結(jié)節(jié)病在某些實施方案中，結(jié)節(jié)病可累及肌肉、肝臟、關節(jié)、血液、精神科、腎臟、脾臟、鼻竇、骨、口、胃或腸、內(nèi)分泌系統(tǒng)、胸膜或生殖系統(tǒng)并且與相應的癥狀一同存在。在另一個實施方案中，本文提供的是治療患有具有骨骼肌、肝臟、關節(jié)、血液、精神科、腎臟、脾臟、鼻竇、口、胃或腸、內(nèi)分泌系統(tǒng)、胸膜或生殖系統(tǒng)受累的結(jié)節(jié)病的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善。在一個實施方案中，具有骨骼肌受累的結(jié)節(jié)病可以是無癥狀的，伴有或不伴有酶升高，或者與例如隱伏或急性肌病變伴有肌肉無力、關節(jié)炎(例如踝、膝、腕和肘的關節(jié)炎)、慢性關節(jié)炎伴有雅庫畸形(Jaccoud’s deformities)或指炎、外周關節(jié)炎、關節(jié)痛、骨質(zhì)溶解或胞囊病損、骨質(zhì)減少或L5fgreii氏綜合征的癥狀一同存在。在另一個實施方案中，具有肝臟受累的結(jié)節(jié)病可以是無癥狀的，或者與一個或多個癥狀例如肝功能試驗結(jié)果中的溫和升高、用福射不透明的染料在CT掃描上的低透亮病損(hypolucent lesions)、肝腫大、肝臟酶水平中的變化、肝病、發(fā)熱、不適、疲勞、膽汁郁積、肝硬化或者與類似于肉芽腫性肝炎的癥狀一同存在。在另一個實施方案中，罹患血液結(jié)節(jié)病的患者具有淋巴細胞減少癥、慢性病的貧血、由于骨髓的肉芽腫性浸潤所致貧血、全血細胞減少癥、脾隔離(splenicsequestration)、血小板減少癥或白細胞減少癥的一個或多個癥狀。在另一個實施方案中，罹患結(jié)節(jié)病的患者可表現(xiàn)出精神科癥狀(例如抑郁癥)。在另一個實施方案中，具有腎臟受累的結(jié)節(jié)病可與無癥狀的高鈣尿癥、間質(zhì)性腎炎、由腎結(jié)石引起的慢性腎衰竭或腎鈣質(zhì)沉著癥的癥狀一同存在。在另一個實施方案中，具有脾臟受累的結(jié)節(jié)病可以是無癥狀的，或者與疼痛、血小板減少癥的癥狀一同存在，或如通過X射線或CT掃描測定的。在另一個實施方案中，具有鼻竇受累的結(jié)節(jié)病可以與竇粘膜的癥狀伴有類似于普通的變應性和感染性鼻竇炎、或凍瘡樣狼瘡(upus pernio)的癥狀一同存在。在另一個實施方案中，具有口受累的結(jié)節(jié)病可以與無癥狀的腮腺腫脹、腮腺炎伴有口干癥、黑福特綜合征(Heerfordt’ ssyndrome)、眼色素層炎、雙側(cè)腮腺腫脹、面癱、慢性發(fā)熱、口凍瘡樣狼瘡、或變形的硬顎、臉頰、舌頭和牙齦的癥狀一同存在。在另一個實施方案中，具有胃或腸、內(nèi)分泌系統(tǒng)、胸膜或生殖系統(tǒng)受累的結(jié)節(jié)病的癥狀包括胃肉芽腫、腸系膜淋巴結(jié)病、腹痛、全垂體功能減退癥、甲狀腺浸潤、繼發(fā)性甲狀旁腺功能減退、高鈣血癥或淋巴細胞滲出積液。在另一個實施方案中，本文提供的是治療罹患具有肺部組織或器官除外的一個或多個組織或器官受累的結(jié)節(jié)病的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善。在另一個實施方案中，本文提供的是治療罹患具有肺除外的一個或多個組織或器官受累的結(jié)節(jié)病的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的可檢測改善。
其它的疾病、障礙或病癥 在有些實施方案中，所述結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙是癌癥(例如已知在結(jié)節(jié)病中受累的器官中的癌癥)。在另一個實施方案中，本文提供的是治療患有結(jié)節(jié)病相關癌癥的個體的方法，包括給予所述個體分離的胎盤細胞、分離的胎盤細胞群體或包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述給予導致所述結(jié)節(jié)病相關癌癥的一個或多個癥狀的進程的可檢測縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述結(jié)節(jié)病相關癌癥的一個或多個癥狀的可檢測改善。雖然不受任何理論的束縛，但是罹患結(jié)節(jié)病的患者可具有癌癥(例如肺癌或惡性淋巴瘤(Iymphonas))的危險性增加。在某些實施方案中，所述癌癥是實體瘤。在有些實施方案中，所述癌癥是原發(fā)性導管癌、白血病、急性T細胞白血病、慢性髓系淋巴瘤(CML)、急性髓細胞性白血病、慢性髓細胞性白血病(CML)、肺癌、結(jié)腸腺癌、組織細胞性淋巴瘤、結(jié)腸直腸癌、結(jié)腸直腸腺癌或視網(wǎng)膜母細胞瘤。在一個具體的實施方案中，所述癌癥是毛細胞白血病、急性髓系白血病(急性髓細胞性白血病)或急性成髓細胞性白血病。在其它的實施方案中，所述結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙包含維生素D調(diào)節(jié)異常、高催乳素血癥、甲狀腺疾病(例如甲狀腺功能減退、甲狀腺功能亢進和甲狀腺自身免疫)、自身免疫障礙或結(jié)節(jié)病-淋巴瘤綜合征和過敏(例如腹腔疾病、IV型過敏)。典型地，在作出結(jié)節(jié)病最終診斷之前，對表現(xiàn)有結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀的個體評價結(jié)節(jié)病至少一次，例如，作為進行達到結(jié)節(jié)病診斷的試驗組成部分。另外，典型地，在作出結(jié)節(jié)病的診斷之后，對被診斷出患有結(jié)節(jié)病的個體評價結(jié)節(jié)病的癥狀至少一次，通常超過一次，以判斷該病的進程。這樣一種評價可包含肺功能或癥狀的診斷，例如，胸部影像、胸部X射線、胸部的CT掃描、PET掃描、CT指導的活檢、縱隔鏡檢查術、開放肺活檢、支氣管鏡檢查法與活檢、支氣管內(nèi)超聲或內(nèi)鏡超聲與縱隔淋巴結(jié)的FNA ;組織活檢,例如,組織活檢、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶血液；磁共振成像(MRI)，例如，以檢測心臟、神經(jīng)機能或肝臟受累，計算機斷層攝影術(CT)掃描、正電子發(fā)射斷層攝影術(PET)掃描、受累組織或器官的心電圖；肝功能試驗；眼檢查；血液、電離和尿鈣測定；血清磷測定；甲狀腺功能試驗；眼裂隙燈檢查以檢測眼色素層炎；或其它肉芽腫性障礙的排除?？梢酝ㄟ^所述結(jié)節(jié)病癥狀中的任何一個或多個評價結(jié)節(jié)病治療的有效性，例如給予胎盤細胞的有效性。也可以通過監(jiān)測在給予所述胎盤細胞之前和之后，所述個體中受累器官的癥狀或功能的進程的縮短、惡化的可檢測減輕、和/或所述個體中受累器官的癥狀或功能的可檢測改善，對有效性進行評價。在一個方面，本文提供的是治療患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥的患者的方法，包括將治療用細胞組合物給予患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥的患者，并且評估患者的結(jié)節(jié)病癥狀的改善情況，其中所述細胞組合物包含如本文所述的PDACs。在一個實施方案中，所述方法可包括對以下的(I)到(4)中的一項或多項，在所述給予之前測定一次或多次，和/或在所述給予之后測定一次或多次(I)所述個體中受累器 官的數(shù)量和/或程度；(2)所述個體中癥狀的數(shù)量和/或程度；(3)肉芽腫的數(shù)量和/或程度；或(4)所述個體中炎癥的程度。在某些實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞減少(例如可檢測地減少)的所述個體中所述一個或多個癥狀的數(shù)量或嚴重程度，或減少所述個體中所述一個或多個癥狀的數(shù)量或嚴重程度的增加速率，和/或?qū)е陆Y(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥的一個或多個癥狀的可檢測改善。在一個實施方案中，所述治療有效量是導致所述結(jié)節(jié)病的或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的至少一個癥狀可檢測改善的量。在另一個實施方案中，所述治療有效量是導致一種免疫細胞或多種免疫細胞的活性(例如增殖)被調(diào)節(jié)(例如抑制)的量。在一個具體的實施方案中，所述治療有效量是導致炎癥反應被抑制的量，如通過一種或多種炎癥性標記(例如C-反應蛋白，IL-6)測定的或通過PLAC試驗測定的。在一個具體的實施方案中，所述調(diào)節(jié)(例如抑制)是通過使免疫細胞與多個胎盤干細胞接觸足以達到所述胎盤干細胞可檢測地調(diào)節(jié)(例如抑制)免疫應答的時間來進行的。在另一個實施方案中，所述治療有效量是當移植到所述個體中的受累組織或器官時允許在受累的組織或器官中形成集落形成單位的量。在有些實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞導致(例如可檢測地導致)肺功能恢復，例如，通過胸部影像、胸部X射線、胸部的CT掃描、PET掃描或CT指導的活檢測定的。在其它的實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞減少皮膚病損的數(shù)量和/或程度，例如通過切除活檢測定的。在又一些實施方案中，當涉及癌癥時，所述胎盤細胞減少癌細胞的數(shù)量與給予所述胎盤細胞之前所述細胞的數(shù)量相比達至少例如10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99%。在另一個實施方案中，治療包括用包含胎盤細胞(例如PDACs)的治療用細胞組合物(或含或不含另一種細胞類型)治療患有結(jié)節(jié)病或由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的疾病、障礙或病癥的個體。在某些實施方案中，所述個體經(jīng)歷了來自該療法的益處，例如來自所述細胞支持其它細胞生長的能力，包括心臟中存在的干細胞或祖細胞，來自組織向內(nèi)生長或組織的血管化，和來自有益的細胞的因子(cellularfactors)、趨化因子、細胞因子(cytokines)等的存在,但是所述細胞不整合到所述個體中或在所述個體中繁殖。在另一個實施方案中，所述患者因用所述細胞治療性治療而受益，但是所述細胞在患者體內(nèi)不存活延長的時期。在一個實施方案中，所述細胞逐漸地削減其數(shù)量、活力或生化活性，在其它的實施方案中，所述細胞的削減之前有一段活性時期，例如生長、分裂或生化活性。在其它的實施方案中，衰老了的、無活力的乃至死亡的細胞都不能夠具有有益的治療效果。
患有結(jié)節(jié)病或由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的疾病、障礙或病癥的個體的改善可以通過所述結(jié)節(jié)病的或所述結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的一個或多個癥狀的可檢測改善來評價或證明，其中所述個體給予了本文提供的PDACs或治療組合物。也可以通過患者主訴，例如個體關于他或她在施用之后健康狀況的自我評價，來評價接受了本文提供的PDACs或包含PDACs的治療組合物的個體的改善情況。所述細胞給予的成功，在某些實施方案中，并不基于給予了 PDACs的個體的生存。相反，成功是基于如上所述的結(jié)節(jié)病的一個或多個癥狀改善的一個或多個標準體系(metrics)。因此，所述細胞不需要整合到和打擊患者的受累組織或器官。4. I. 2胎盤細胞的施用在有些實施方案中，對于局部或系統(tǒng)施用，可以通過移植、植入(例如植入細胞本身或作為基質(zhì)-細胞組合的組成部分的細胞)、注射(例如直接注射到所述疾病或病癥的部 位，例如直接注射到由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的一種或多種病損或肉芽腫)、輸注、通過導管遞送或用于提供細胞療法的本領域已知的任何其它手段，完成將胎盤細胞(例如PDACs)或包含此類細胞的治療組合物給予有需要的個體。在其它實施方案中，通過靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、尿道內(nèi)、胸骨內(nèi)、顱內(nèi)、肌內(nèi)、滑膜內(nèi)和皮下施用，可以將胎盤細胞(例如PDACs)或包含此類細胞的治療組合物遞送到某個個體。在一個實施方案中，所述治療用細胞組合物例如通過注射到所述個體的一個或多個部位而提供給有需要的個體。在一個具體的實施方案中，當有心臟受累時，通過心臟內(nèi)注射例如為心臟的缺血區(qū)域提供所述治療用細胞組合物。在其它具體的實施方案中，將所述細胞注射在受累器官的表面、注射到相鄰區(qū)域，乃至注射到更遠的區(qū)域。在優(yōu)選的實施方案中，所述細胞可位于患病或受傷的區(qū)域。在多個具體的實施方案中，將胎盤細胞病灶內(nèi)給予(例如直接給予)一個或多個由結(jié)節(jié)病引起的或與結(jié)節(jié)病有關的病損或肉芽腫內(nèi)或其附近(例如在所述病損或肉芽腫的l-5cm以內(nèi))。在某些實施方案中，將胎盤細胞與基質(zhì)(例如可注射基質(zhì))組合給予。在某些其它的實施方案中，將胎盤細胞與固體基質(zhì)(例如骨代用品)組合給予患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的個體，其中基質(zhì)或骨代用品在下文第4. 7. 4節(jié)中有描述。在某些其它的實施方案中，胎盤細胞靜脈內(nèi)給予所述個體。胎盤細胞可以來自任何容器并且通過醫(yī)療上適合遞送液體(例如包含細胞的液體)的任何遞送系統(tǒng)，給予某個個體。這樣的容器可以是例如無菌的塑料袋、瓶、罐或其它容器，從中胎盤細胞群體可容易地分配。例如，所述容器可以是血袋或其它適合于將液體靜脈內(nèi)給予接受者的醫(yī)學上可接受的塑料袋。病損內(nèi)或靜脈內(nèi)施用可包含例如約、至少、或不超過1x105、5x105、1x106、5x106、Ixl07、5xl07、lxl08、5xl08、lxl09、5xl09、lxl0ici、5xl0ici、lxl0n 或更多的分離的胎盤細胞(在單次劑量中)。在一個療程中，所述分離的胎盤細胞可給予一次或超過一次。優(yōu)選地，所給予的胎盤細胞包含50%活細胞或更多(即，群體中細胞的至少約50%是有功能的或有生命的)。優(yōu)選地,群體中細胞的至少約60%是活的。更優(yōu)選地，在所述藥物組合物中，群體中細胞的至少約70%、80%、90%、95%或99%是活的。在某些實施方案中，所述個體給予治療有效量的PDACs，例如，在包含所述PDACs的細胞群體中。在一個具體的實施方案中，所述群體包含約50%PDACs。在另一個具體的實施方案中，所述群體是PDACs的基本均一群體。在其它實施方案中，所述群體包含至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或99%PDACs0患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或病癥的個體可以在所述細胞將是治療上有益的任何時間給予PDACs。在某些實施方案中，例如，本發(fā)明的PDACs或治療組合物在心肌梗塞的 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23 或 24 小時，或 I、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或30天以內(nèi)給予。在距心肌梗塞最近的時間，例如在1-3天或1-7天以內(nèi)施用優(yōu)于在心肌梗塞之后較遠的時間例如3天或7天之后施用。在其它的實施方案中，本發(fā)明的細胞或治療組合物在所述疾病或病癥的首次診斷的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23 或 24 小時，或 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或 30 天以內(nèi)給予。
在某些實施方案中，待治療的個體是哺乳動物。在一個具體的實施方案中，待治療的個體是任何年齡和/或在任何臨床階段或患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥的人。在多個具體的實施方案中，所述個體是牲畜動物或馴養(yǎng)動物。在其它具體的實施方案中，待治療的個體是馬、羊、母?；蜷幣！⒇i、狗或貓。4. I. 2聯(lián)合療法結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙(例如系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病)的治療可包括將分離的胎盤細胞、特別是在下文第4. 2節(jié)詳細描述的分離的胎盤細胞(PDACs)結(jié)合第二種療法(例如第二種治療劑)中的一種或多種一起給予患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的個體。本文提供的聯(lián)合療法沒有限制給予受治療者各療法的順序。例如，第一種療法可以在將第二種療法給予曾經(jīng)患有、現(xiàn)在患有給定疾病或?qū)o定疾病敏感的受治療者之前(例如I分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、I小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、I周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、或12周)、同時、或之后(例如I分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、I小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、I周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、或12周)給予。任何另外的療法可以按任何順序與其它另外的療法一起給予。在某些實施方案中，第二種治療劑包括TNF-α抑制劑(例如英夫利昔單抗(infliximab)或阿達木單抗(adalimumab))、抗痕藥(例如氯喹或輕氯喹)、沙利度胺(thalidomide)、硫唑嘌呤(azathioprine)、麥考酹酸酯(mycophenolate)、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、甲氨蝶呤(methotrexate)、focalin、伊洛前列素(iIoprost)、甲氨蝶呤(methotrexate)、尼古丁 (nicotine)、沙利度胺(thalidomide)、安立生坦(ambrisentan)(例如 Ietairis)、波生坦(bosentan)、阿托伐他汀(atorvastatin)、己酮可可喊(pentoxifylline)、阿達木單抗(adalimumab)、利妥昔單抗(rituximab)、stelara (例如 ustekinumab)、阿月太地爾(aviptadil)、apremilast、remicade、humira、生長因子、趨化因子、細胞因子、細胞產(chǎn)物、去甲基化因子和現(xiàn)在已知的或以后確定刺激干細胞分化的其它因子、胰島素樣生長因子(IGF)、血小板衍生生長因子(TOGF)、表皮生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)Jf細胞生長因子(HGF)、白介素18 (IL-8)、抗血栓生成劑(例如肝素、肝素衍生物、尿激酶或PPack(右旋苯丙氨酸/脯氨酸/精氨酸/氯甲基酮)、抗凝血酶化合物、血小板受體拮抗齊U、抗凝血酶抗體、抗血小板受體抗體、阿司匹林(aspirin)、雙卩密達莫(dipyridamole)、魚精蛋白(protamine)、水蛭素(hirudin)、前列腺素抑制劑和/或血小板抑制劑)、抗凋亡劑(例如紅細胞生成素(Epo)、Epo衍生物或類似物或它們的鹽、促血小板生成素(Tpo)、IGF-I、IGF-II、肝細胞生長因子(HGF)、或半胱天冬蛋白酶(caspase)抑制劑)、抗炎藥(例如P38MAP激酶抑制劑、他汀類藥(statin)、IL-6抑制劑、IL-I抑制劑、吡嘧司特(Pemirolast)、曲尼司特(Tranilast)、Remicade、西羅莫司(Sirolimus)和 / 或非甾體抗炎化合物(例如乙酰水楊酸(acetylsalicylic acid)、布洛芬(ibuprofen)、替泊沙林(Tepoxalin)、托美汀(Tolmetin)或舒洛芬(Suprofen)))、免疫抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑(例如韓調(diào)磷酸酶(calcineurin)抑制劑，例如環(huán)孢菌素(cyclosporine)、他克莫司(Tacrolimus)、mTOR抑制劑例如西羅莫司(Sirolimus)或依維莫司(Everolimus);抗增殖藥，例如硫唑嘌呤(azathioprine)和/或麥考酹酸嗎乙酯(mycophenolate mofetil)；皮質(zhì)類固醇，例如潑尼松、潑尼松龍(prednisolone)或氫化可的松；steroid_sparingagent,例如硫唑嘌呤和甲氨蝶呤；抗體，例如單克隆抗IL_2Ra受體抗體、巴利昔單抗
(Basiliximab)、達克珠單抗(Daclizuma)、多克隆抗T-細胞抗體例如抗胸腺細胞球蛋白(ATG)、抗淋巴細胞球蛋白(ALG)和/或單克隆抗T細胞抗體0KT3或貼壁胎盤干細胞(如在美國專利第7，468，276號和美國專利申請公布第2007/0275362號中描述的，所述專利和專利申請中的每一個都通過引用其全部結(jié)合到本文中))和/或抗氧化劑(例如普羅布考(probucol);維生素A、C和/或E、輔酶Q-10、谷胱甘肽、L-半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸或任何上述物質(zhì)的抗氧化劑衍生物、類似物或鹽)。在某些實施方案中，包含所述PDACs的治療組合物還包含一種或多種另外的細胞類型，例如，成體細胞(例如成纖維細胞或內(nèi)胚層細胞)、干細胞和/或祖細胞。這樣的治療劑和/或一種或多種另外的細胞類型可以單獨地或結(jié)合兩種或更多種所述化合物或藥劑給予有其需要的個體。在一個實施方案中，所述的第二種治療劑是抗炎藥、類固醇藥、免疫抑制藥和/或抗生素?？捎糜谥委熃Y(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥的抗炎藥的實例包括但不限于美沙拉嗪、5-ASA(5-氨基水楊酸)類藥(例如ASACOL· (美沙拉嗪，緩釋劑型)、DIPENTUM(奧沙拉嗪)>PENTASA (美沙拉嗪，控釋劑型))、柳氮磺胺吡啶(5-ASA和磺胺吡啶的組合)、抗炎抗體類藥(例如英夫利昔單抗(REMICADE ))等。可用于治療結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病、障礙或病癥的類固醇藥的實例包括但不限于可的松、氫化可的松、潑尼松、甲基潑尼松等。典型地，根據(jù)本領域的實踐，類固醇藥的劑量首先以相對大的劑量遞送，然后隨著炎癥消退而遞送較小的劑量?？捎糜谥委熃Y(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病的免疫抑制藥的實例包括但不限于環(huán)孢菌素A、6-巰基嘌呤或硫唑嘌呤。任何抗生素都可以用于治療克羅恩病，包括例如氨芐西林、磺酰胺、頭孢菌素、四環(huán)素和/或甲硝唑。在另一個具體的實施方案中，所述的第二種療法是給予豬鞭蟲(porcinewhipworms),例如豬鞭蟲(Trichuris suis)的卵。在另一個實施方案中，本文提供的第二種療法是抗癌療法，例如以治療結(jié)節(jié)病相關癌癥，例如，一種或多種化學療法或化療化合物。這樣的其它抗癌療法可以在所述給予胎盤細胞(例如PDACs)的同時、同一療程期間給予所述個體，或者與所述給予胎盤細胞(例如PDACs)分開給予所述個體。在一個具體的實施方案中，給予所述其它抗癌療法與給予所述胎盤細胞按順序給予。在另一個具體的實施方案中，所述其它的一種抗癌療法或多種抗癌療法在給予所述胎盤細胞之前給予所述個體；例如，將這樣的其它抗癌療法的一個療程給予個體，并且是在給予個體分離的胎盤細胞之前完成的。在另一個具體的實施方案中，所述胎盤細胞是在給予所述其它抗癌療法之前給予個體的；例如，胎盤細胞的一個療程是在給予所述其它抗癌療法之前給予所述個體的，并且是在給予個體所述其它的一種抗癌療法或多種抗癌療法之前完成的。在一個具體的實施方案中，所述抗癌藥是美法侖(melphalan)(亦稱L-苯丙氨酸氮芥或L-PAM ;商品名Albertan)。因此，在一個實施方案中，治療患有多發(fā)性骨髓瘤的個體的方法包括給予所述個體美法侖，例如治療上有效的一劑或多劑美法侖。施用典型地是口服或靜脈內(nèi)用藥。在另一個具體的實施方案中，所述抗癌藥是沙利度胺。在另一個具體的實施方案中，所述抗癌藥是氨基取代的沙利度胺類似物或氨基取代的咪唑。在另一個具體的實施方案中，所述抗癌藥是pomalidomide(以商品名ACTIMID 銷售)；來那度胺(Ienalidomide)(以商品名REVLIMID 銷售)；或來那度胺與地塞米松的組合。在另一個具體的實施方案中，所述抗癌療法是硼替佐米(bortezomib) (VELCADE )。在另一個具體的實施方案中，所述抗癌藥包含美法侖、潑尼松和沙利度胺的組合(分開或一同用藥)。在另一個具體的實施方案中，所述抗癌藥是硼替佐米、美法侖和潑尼松的組合(分開或一同用藥)。其它的抗癌藥是本領域眾所周知的。因此，在其它具體的實施方案中，抗癌藥包括但不限于阿西維辛(acivicin);阿柔比星(aclarubicin);鹽酸阿考達唑(acodazole hydrochloride);阿克羅寧(acronine);阿多來新(adozelesin)；阿地白介素(aldesleukin);六甲蜜胺(altretamine);安波霉素(ambomycin)；醋酸阿美蒽醌(ametantroneacetate)；安口丫 P定(amsacrine);阿那曲唑(anastrozole)；安曲霉素(anthramycin);天冬酰胺酶(asparaginase);曲林菌素(asperlin)；阿扎胞苷(azacitidine);阿扎替派(azetepa);阿佐霉素(azotomycin);巴馬司他(batimastat);苯佐替派(benzodepa)；比卡魯胺(bicalutamide);鹽酸比生群(bisantrene hydrochloride) ; 二甲橫酸雙奈法德(bisnafidedimesylate)；比折來新(bizelesin);硫酸博來霉素(bleomycin sulfate);布喹那鈉(brequinar sodium)；溴匹立明(bropirimine);白消安(busulfan);放線菌素C (cactinomycin);卡魯睪酮(calusterone);卡醋胺(caracemide);卡貝替姆(carbetimer);卡鉬(carboplatin)；卡莫司汀(carmustine);鹽酸卡柔比星(carubicin hydrochloride);卡折來新(carzelesin);西地芬戈(cedefingol);塞來考昔(celecoxib) (C0X-2 抑制劑)；苯丁酸氮芥(chlorambucil);西羅霉素(cirolemycin)；順鉬(cisplatin);克拉屈濱(cladribine);甲橫酸克立那托(crisnatol mesylate);環(huán)憐酸胺(cyclophosphamide)；阿糖胞苷(cytarabine);達卡巴嗪(dacarbazine);放線菌素 D (dactinomycin)；鹽酸柔紅霉素(daunorubicinhydrochloride);地西他濱(decitabine);右奧馬鉬(dexormaplatin);地扎狐寧(dezaguanine);甲橫酸地扎狐寧(dezaguanine mesylate)；地口丫醌(diaziquone);多西他賽(docetaxel);多柔比星(doxorubicin);鹽酸多柔比星(doxorubicin hydrochloride);屈洛昔芬(droloxifene);梓樣酸屈洛昔芬(droloxifenecitrate);丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate);達佐霉素(duazomycin)；依達曲沙(edatrexate) ；efIomithinehydrochloride ;依沙蘆星(elsamitrucin)；恩洛鉬(enloplatin);恩普氨酯(enpromate);依匹哌卩定(epipropidine)；鹽酸表柔比星(epirubicinhydrochloride);厄布洛唑(erbulozole);鹽酸依索比星(esorubi c inhydrochloride);雌莫司汀(estramustine);雌莫司汀憐酸鈉；依他硝唑(etanidazole);依托泊苷(etoposide);磷酸依托泊苷；氯苯乙啼胺(etoprine);鹽酸法屈唑(fadrozole hydrochloride);法扎拉濱(fazarabine);芬維 A 胺(fenretinide);氟尿苷(fIoxuridine);憐酸氟達拉濱(fIudarabinephosphate);氟尿啼唳(fluorouracil)；氟西他濱(fIurocitabine);憐喹酮(fosquidone);福司曲星鈉(fostriecin sodium)；吉西他濱(gemcitabine);鹽酸吉西他濱(gemcitabine hydrochloride);輕基服(hydroxyurea);鹽酸伊達比星(idarubicin hydrochloride);異環(huán)憐酉先胺(ifosfamide)；伊莫福新(ilmofosine);異丙鉬(iproplatin);伊立替康(irinotecan);鹽酸伊立替康(irinotecan hydrochloride);醋酸蘭瑞妝(lanreotide acetate);來曲唑(Ietrozole)； 醋酸亮丙立德(leuprolide acetate);鹽酸利阿唑(Iiarozolehydrochloride);洛美曲索鈉(lometrexol sodium);洛莫司汀(Iomustine);鹽酸洛索蒽醌(Iosoxantronehydrochloride);馬索羅酷(masoprocol);美登素(maytansine);鹽酸雙氯乙基甲胺(mechlorethamine hydrochloride);醋酸甲地孕酮(megestrol acetate);醋酸美倫孕酮(melengestrol acetate);美法侖(melphalan);美諾立爾(menogaril);疏基票呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；甲氨蝶呤鈉(methotrexate sodium)；氯苯氨卩定(metoprine);美妥替哌(meturedepa);米丁度胺(mitindomide);米托卡星(mitocarcin);絲裂紅素(mitocromin);米托潔林(mitogillin);米托馬星(mitomalcin)；絲裂霉素(mitomycin);米托司培(mitosper);米托坦(mitotane);鹽酸米托蒽醌；麥考酌■酸(mycophenolic acid);諾考_唑(nocodazole);諾加霉素(nogalamycin);奧馬鉬(ormaplatin);奧昔舒侖(oxisuran);紫杉醇(paclitaxel);培門冬酶(pegaspargase)；培利霉素(peliomycin);戊氮芥(pentamustine);硫酸培洛霉素(peplomycinsulfate)；培磷酰胺(perfosfamide);哌泊溴焼(pipobroman);哌泊舒凡(piposulfan);鹽酸卩比羅蔥酉昆(piroxantrone hydrochloride);普卡霉素(plicamycin);普洛美坦(plomestane)；口卜吩姆鈉(porfimer sodium);泊非霉素(porfiromycin);潑尼莫司汀(prednimustine)；鹽酸丙卡巴肼(procarbazine hydrochloride) J票羅霉素(puromycin);鹽酸票羅霉素(puromycin hydrochloride);卩比唑呋林(pyrazofurin);利波腺苷(riboprine);沙芬戈(safingol);鹽酸沙芬戈(safingol hydrochloride);司莫司汀(semustine);辛曲秦(simtrazene);磷乙酰天冬氨酸鈉(sparfosatesodium);司帕霉素(sparsomycin);鹽酸螺方定錯(spirogermaniumhydrochloride);螺莫司汀(spiromustine);螺鉬(spiroplatin)；鏈黑菌素(streptonigrin);鏈佐星(streptozocin);磺氯苯脲(sulofenur);他利霉素(talisomycin);替可加蘭鈉(tecogalan sodium);泰索帝(taxotere);替加氟(tegafur)；鹽酸替洛蒽醌(teloxantrone hydrochloride);替莫泊芬(temoporfin);替尼泊苷(teniposide);替羅昔隆(teroxirone);睪酮(testolactone);硫咪票呤(thiamiprine)；硫鳥票呤(thioguanine);噻替派(thiotepa)；噻唑呋林(tiazofurin);替拉扎明(tirapazamine);枸橡酸托瑞米芬(toremifene citrate);醋酸曲托龍(trestoloneacetate);憐酸曲西立濱(triciribine phosphate);三甲曲沙(trimetrexate);葡糖醒酸三甲曲沙(trimetrexate glucuronate);曲普瑞林(triptorelin);鹽酸妥布氯唑(tubulozole hydrochloride);尿啼卩定氮芥(uracil mustard);烏瑞替派(uredepa);伐普肽(vapreotide);維替泊芬(verteporfin);硫酸長春堿(vinblastine sulfate);硫酸長春新堿(vincristine sulfate);長春地辛(vindesine);硫酸長春地辛(vindesinesulfate);硫酸長春匹定(vinepidinesulfate);硫酸長春甘酯(vinglycinate sulfate)；硫酸長春羅辛(vinleurosine sulfate);酒石酸長春瑞濱(vinorelbine tartrate);硫酸長春羅定(vinrosidine sulfate);硫酸長春利定(vinzolidine sulfate);伏氯唑(vorozole);折尼鉬(zeniplatin);凈司他丁 (zinostatin);和鹽酸佐柔比星(zorubicinhydrochloride)。 其它的抗癌藥物包括但不限于20-表-1，25-二羥基維生素D3 ;5_乙炔基尿啼 P定(5-ethynyIuraciI)；阿比特龍(abiraterone);阿柔比星(aclarubicin)；?；蛭?acylfulvene) ；adecypenol ;阿多來新(adozelesin);阿地白介素(aldesleukin) ；ALL-TK 拮抗劑；六甲蜜胺(altretamine);氨莫司汀(ambamustine)； amidox;氨憐汀(amifostine) ;5_ 氨基乙酸丙酸(aminolevulinic acid);氨柔比星(amrubicin);安卩丫唳(amsacrine);阿那格雷(anagrelide);阿那曲唑(anastrozole)；穿心蓮內(nèi)酯(andrographolide);血管生成抑制齊Li ;拮抗劑D ;拮抗劑G ;安雷利克斯(antarelix);抗背部化形態(tài)發(fā)生蛋白_1 ;抗雄激素(antiandrogen)，前列腺癌；抗雌激素(antiestrogen);抗腫瘤肽(antineoplaston);反義寡核苷酸；甘氨酸阿非迪霉素(aphidicolinglycinate);細胞凋亡基因調(diào)節(jié)劑；細胞凋亡調(diào)節(jié)劑；脫口票呤核酸(apurinic acid) ;ara_CDP-DL_PTBA ;精氨酸脫氨酶；asulacrine ;阿他美坦(atamestane);阿莫司汀(atrimustine) ；axinastatin I ；axinastatin2 ；axinastatin3 ;阿扎司瓊(azasetron);阿扎毒素(azatoxin);重氮酪氨酸；衆(zhòng)果赤霉素III衍生物；balanol ;巴馬司他(batimastat) ；BCR/ABL 拮抗劑；benzochlorins ;苯甲酉先星孢菌素(benzoylstaurosporine) ； β內(nèi)酰胺衍生物；β -alethine ;亞阿克拉霉素(betaclamycin)B ;禪木酸(betulinic acid) ;bFGF 抑制劑；比卡魯胺(bicalutamide)；比生群(bisantrene) ;bisaziridinylspermine ;雙奈法德(bisnafide) ；bistratene A ；比折來新(bizelesin) ;breflate ;溴匹立明(bropirimine);布度鈦(budotitane) ;丁胱亞橫酸亞胺(buthioninesulfoximine);卡泊三醇(calcipotriol) ；calphostin C;喜樹堿衍生物；卡培他濱(capecitabine);羧酰胺-氨基-三唑；羧基酰氨基三唑；CaRestM3 ；CARN 700 ;軟骨衍生抑制劑；卡折來新(carzelesin);酪蛋白激酶抑制劑(ICOS);栗樹精胺(castanospermine);天香素 B(cecropin B);西曲瑞克(cetrorelix) ；chlorlns ；氯喹喔啉磺酰胺；西卡前列素(cicaprost);順式-卩卜啉；克拉屈濱(cladribine)；氯米芬類似物；克霉唑(clotrimazole) ；collismycin A ；collismycin B ;考布他汀A4 (combretastatin A4);考布他汀類似物；conagenin ；crambescidin816 ;克立那托(crisnatol);隱藻素 8 (cryptophycin 8);隱藻素 A(cryptophycin A)衍生物；庫拉素A(curacin A) ；cyclopentanthraquinones ；cycloplatam ；cypemycin ;阿糖胞苷十八焼基磷酸鹽(cytarabine ocfosfate);細胞溶解因子；細胞生長抑素(cytostatin);達昔單抗(dacliximab);地西他濱(decitabine);脫氫膜海鞘素 B (dehydrodidenmin B);地洛瑞林(deslorelin);地塞米松;右異環(huán)憐酸胺(dexifosfamide);右雷佐生(dexrazoxane)；右維拉帕米(dexverapamil);地口丫酉昆(dezaguanine);膜海鞘素 B(didemnin B) ；didox ；二乙基正精胺(diethylnorspermine) ; 二氫_5_氮雜胞苷；9_ 二氫紫杉醇；dioxamycin ;二苯基螺莫司??；多西他賽(docetaxel) ; 二十二焼醇；多拉司瓊(dolasetron);去氧氟尿苷(doxifluridine);多柔比星(doxorubicin);屈洛昔芬(droloxifene);屈大麻酌· (dronabinol) ；duocarmycin SA;依布砸(ebselen);依考莫司汀(ecomustine);依地福新(edelfosine);依決洛單抗(edrecolomab);依氟鳥氨酸(efIornithine);欖香烯(elemene);乙啼替氟(emitefur);表柔比星(epirubicin);依立雄胺(epristeride)；雌莫司汀類似物；雌激素激動劑；雌激素拮抗劑；依他硝唑(etanidazole);磷酸依托泊苷(etoposide phosphate);依西美坦(exemestane);法屈唑(fadrozole)；法扎拉濱(fazarabine);芬維A胺(fenretinide);非格司亭(filgrastim);非那雄胺(finasteride);黃酮批多(flavopiridol);氟卓斯汀(flezelastine) ;fIuasterone ;氟達拉濱(fludarabine) ；fluorodaunorunicin hydrochloride ;福 )美克(forfenimex)；福美坦(formestane);福司曲星(fostriecin);福莫司汀(fotemustine);禮替沙林
(gadolinium texaphyrin);硝酸鎵；加洛他濱(galocitabine);加尼瑞克(ganirelix)；明膠酶抑制劑；吉西他濱(gemcitabine);谷胱甘肽抑制齊Li ;庚二醇二氨基磺酸酯(hepsulfam) ；heregulin ;六甲撐雙乙酰胺；金絲桃素(hypericin);伊班膦酸(ibandronicacid);伊達比星(idarubicin);艾多昔芬(idoxifene);伊決孟酮(idramantone);伊莫福新(ilmofosine);伊洛馬司他(ilomastat);伊馬替尼(imatinib)(例如GLE.EVEC )、咪喹莫德(imiquimod);免疫剌激肽；胰島素樣生長因子_1受體抑制劑；干擾素激動劑；干擾素;白介素；碘節(jié)胍(iobenguane);碘多柔比星(iododoxorubicin) ；4~依波米醇(4-ipomeanol);伊羅普拉(iroplact);伊索拉定(irsogladine) ；isobengazole ；異高軟海綿素 B(isohomohalicondrin B);伊他司瓊(itasetron) ； jasplakinolide ；海賠蝓提取物 F(kahalalide F);三醋酸層狀素-N(lamellarin_N triacetate);蘭瑞肽(lanreotide) ;Ieinamycin ;來格司亭(Ienograstim);硫酸香燕多糖(lentinansulfate) ; leptolstatin ;來曲唑(Ietrozole);白血病抑制因子；白細胞α干擾素；亮丙立德+雌激素+孕酮；亮丙瑞林(Ieuprorelin);左旋咪唑(Ievamisole);利阿唑(Iiarozole);線性多胺類似物；親脂性二糖肽；親脂性鉬化合物；lissoclinamide 7 ;洛鉬(Iobaplatin);蟲丘蟲 丨磷脂(Iombricine);洛美曲索(lometrexol);氯尼達明(Ionidamine)；洛索蒽醌(Iosoxantrone);洛索立賓(Ioxoribine);勒托替康(Iurtotecan);鐠替沙林(Iutetiumtexaphyrin) ;lysofylline ;裂角軍月太；美坦新(maitansine) ；mannostatinA ；馬立馬司他(marimastat);馬索羅酌· (masoprocol) ;maspin ;基質(zhì)溶解因子抑制劑；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑；美諾立爾(menogaril) ;merbarone ;美替瑞林(meterelin);甲硫氨酸酶；甲氧氯普胺(metoclopramide) ;MIF抑制齊[J ;米非司酮(mifepristone);米替福新(miItefosine);米立司亭(mirimostim);米托胍腙(mitoguazone) ;二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol);絲裂霉素類似物；米托萘胺(mitonafide) ;mitotoxin成纖維細胞生長因子-阜草素；米托蒽醌；莫法羅汀(mofarotene);莫拉司亭(molgramostim);愛必妥(Erbitux)，人絨毛膜促性腺激素；單磷酰脂質(zhì)A+分枝桿菌細胞壁sk;莫哌達醇(mopidamol);氮芥類抗癌藥；mycaperoxide B ;分枝桿菌細胞壁提取物；myriaporone ;N-乙酰地那林；N-取代的苯甲酰胺類；那法瑞林(nafarelin) ;nagrestip ;納洛酮+噴他佐辛(naloxone+pentazocine) ;napavin ;naphterpin ;那托司亭(nartograstim);奈達鉬(nedaplatin);奈莫柔比星(nemorubicin);奈立膦酸(neridronic acid);尼魯米特(nilutamide) ；nisamycin ;一氧化氮調(diào)節(jié)劑；氮氧化物抗氧化劑；nitrullyn ;奧利美生(oblimersen) (GENASENSEOi)) ; O6-節(jié)基鳥氛酸(06_benzylguanine);奧曲妝(octreotide) ;okicenone ;寡核苷酸；奧那司酮(onapristone);昂丹司瓊(ondansetron)；昂丹司瓊(ondansetron) ;oracin ; 口服細胞因子誘導劑；奧馬鉬(ormaplatin);奧沙特隆(osaterone)；奧沙利鉬(oxaliplatin) ；oxaunomycin ;紫杉醇(paclitaxel)；紫杉醇類似物；紫杉醇衍生物；palauamine ;掠櫚酰利索新(palmitoylrhizoxin);帕米勝酸(pamidronic acid);人參塊三醇(panaxytriol);帕諾米芬(panomifene)；parabactin ;帕折普汀(pazelliptine);培門冬酶(pegaspargase);培得星(peldesine)；戊聚硫鈉(pentosan polysulfate sodium);噴司他丁(pentostatin) ；pentrozole ；全氟溴焼(perflubron);培磷酰胺(perfosfamide);紫蘇子醇(perillylalcohol)；phenazinomycin ;醋酸苯酯；磷酸酯酶抑制劑；溶鏈菌制劑(picibanil);鹽酸毛果蕓香減(pilocarpine hydrochloride) 比柔 t匕星(pirarubicin) ; P比曲克辛(piritrexim)； placetin A ；placetin B ;纖溶酶原激活物抑制劑；鉬絡合物；鉬化合物；鉬-三胺絡合物；口卜吩姆鈉(porfimer sodium);泊非霉素(porfiromycin);潑尼松；丙基雙-B丫卩定酮；前列腺素J2;蛋白酶體抑制劑；基于蛋白A的免疫調(diào)節(jié)劑；蛋白激酶C抑制劑；蛋白激酶C抑制齊U，微藻(microalgal);蛋白酪氨酸磷酸酯酶抑制劑；卩票呤核苷磷酸化酶抑制劑；紅紫素類(purpurins);卩比唑啉并卩丫唳(pyrazoloacridine);卩比卩定氧基化(pyridoxylated)血紅蛋白聚氧乙烯綴合物；raf拮抗劑；雷替曲塞(raltitrexed);雷莫司瓊(ramosetron)；ras法尼基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑；ras抑制劑；ras_GAP抑制劑；去甲基化瑞替普??；Re 186 依替勝酸鍊；利索新(rhizoxin);核酶；RII retinamide ;rohitukine ;羅莫月太(romurtide);羅喹美克(roquinimex) ；rubiginone BI ；ruboxyl ;沙芬戈(safingol)；saintopin ；SarCNU ；sarcophytol A ;沙格司亭(sargramostim) ；Sdi I 模擬物；司莫司汀(semustine);衰老衍生抑制劑I ;有義寡核苷酸；信號轉(zhuǎn)導抑制劑；西佐喃(sizofiran)；索布佐生(sobuzoxane);硼卡鈉(sodiumborocaptate);苯基乙酸鈉；solverol ;生長調(diào)節(jié)素結(jié)合蛋白；索納明(sonermin);膦門冬酸(sparfosic acid) ；spicamycin D ;螺莫司汀(spiromustine) ;splenopentin ;海綿抑素 I (spongistatin I);角璧胺(squalamine)；stipiamide ;基質(zhì)溶素抑制劑；sulfinosine ;強效的血管活性腸肽拮抗劑；suradista ;蘇拉明(suramin);苦馬豆素(swainsonine);他莫司汀(tallimustine);甲碘化他莫昔芬(tamoxifen methiodide);牛橫莫司汀(tauromustine);他扎羅汀(tazarotene);替可加蘭鈉(tecogalansodium);替加氟(tegafur) ;tellurapyrylium ;端粒酶抑制劑；替莫泊芬(temoporfin);替尼泊苷(teniposide);四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)；tetrazomine ；thaliblastine ;噻可拉林(thiocoraline);促血小板生成素；促血小板生成素模擬物；胸腺法新(thymalfasin);促胸腺生成素受體激動劑；胸腺曲南(thymotrinan)；促甲狀腺激素；tin ethyl etiopurpurin ;替拉扎明(tirapazamine) ; 二氯化二茂鈦(titanocene bichloride) ；topsentin ;托瑞米芬(toremifene)；翻譯抑制劑；維甲酸(tretinoin);三乙酸尿苷；曲西立濱(triciribine);三甲曲沙(trimetrexate);曲普瑞林(triptorelin);托燒司瓊(tropisetron);妥羅雄脲(turosteride);酪氨酸激酶抑制劑；tyrphostins ;UBC抑制劑；烏本美司(ubenimex);泌尿生殖竇衍生生長抑制因子；尿激酶受體拮抗劑；伐普肽(vapreotide);變曲霉素B(variolin B);維拉雷瑣(velaresol);藜蘆明(veramine) ;verdins ;維替泊芬(verteporf in);長春瑞濱(vinorelbine) ;vinxaltine ; α Vβ 3 人源化抗單抗(vitaxin);伏氯唑(vorozole);扎諾特隆(zanoterone);折尼鉬(zeniplatin);亞節(jié)維C(zilascorb);和凈司他丁斯酉旨(zilascorb stimalamer)。在另一個實施方案中，所述聯(lián)合療法包括給予胎盤細胞與雙膦酸鹽的組合。在一個實施方案中，所述雙膦酸鹽是氯膦酸鹽(clodronate)和/或帕米膦酸鹽(pamidronate)。在一個具體的實施方案中，本文提供的聯(lián)合療法包括給予胎盤細胞與一種或多種TNF- α抑制劑(例如英夫利昔單抗、阿達木單抗)、皮質(zhì)類固醇(例如潑尼松)、PDE_4抑制劑(例如apremi liast)、IL-12抑制劑、IL-23抑制劑、阿肽地爾、IFN-Y抑制劑或抗瘧藥(例如氯喹或羥氯喹)的組合。
在一個具體的實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞任選與第二種療法(例如第二種治療劑)中的一種或多種的組合，減少(例如可檢測地減少)所述個體的一種或多種肉芽腫的數(shù)量或嚴重程度，或者減少所述個體的一種或多種肉芽腫的數(shù)量或嚴重程度的增加速率。在另一個具體的實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞任選與第二種療法(例如第二種治療劑)中的一種或多種的組合，減少(例如可檢測地減少)單核細胞、巨噬細胞或活化T-淋巴細胞的數(shù)量,或減少單核細胞、巨噬細胞或活化T-淋巴細胞的數(shù)量的增加速率。在另一個具體的實施方案中，所述治療有效量的胎盤細胞任選與第二種療法(例如第二種治療劑)中的一種或多種的組合，減少(例如可檢測地減少)所述個體中一種或多種TNF-α、IL-2、IL-12、IFN-Y、IL-I、IL_6、IL-15 或 Thl 應答的水平，或減少所述個體中一種或多種TNF-α、IL-2、IL-12、IFN- y , IL-I、IL-6, IL-15或Thl應答的水平的增加速率。4. 2分離的胎盤細胞與分離的胎盤細胞群體可用于治療患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的個體的分離的胎盤細胞(例如PDACs)是可從胎盤或其部分獲得的細胞，該細胞貼壁于組織培養(yǎng)基底并具有多能細胞或干細胞的特征，但不是滋養(yǎng)層細胞。在某些實施方案中，可用于本文所公開方法中的分離的胎盤細胞具有分化成非胎盤細胞類型的能力?？捎糜诒疚乃_方法中的分離的胎盤細胞可以是來源于或者胎兒或者母體的(即，可分別具有或者胎兒或者母親的基因型)。優(yōu)選地，所述分離的胎盤細胞和分離的胎盤細胞群體是來源于胎兒的。本文所用的短語“來源于胎兒的”或“非母體來源的”表示所述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體得自臍帶或與胎兒相關的胎盤結(jié)構(gòu)，即具有胎兒基因型。本文所用的短語“母體來源的”表示所述細胞或細胞群體得自與母親相關的胎盤結(jié)構(gòu)，例如，其具有母體基因型。分離的胎盤細胞(例如PDACs)或包含所述分離的胎盤細胞的細胞群體，可包含單獨來源于胎兒或母體的分離的胎盤細胞，或者可包含胎兒和母體二者來源混合的分離的胎盤細胞群體。所述分離的胎盤細胞和包含所述分離的胎盤細胞的細胞群體，可以通過下文論述的形態(tài)學特征、標記特征和培養(yǎng)物特征進行鑒定和選擇。在某些實施方案中，任何胎盤細胞，例如本文所述的胎盤干細胞或胎盤多能細胞對接受者(例如患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的個體)來說都是自體的。在某些其它的實施方案中，任何胎盤細胞，例如本文所述的胎盤干細胞或胎盤多能細胞對接受者(例如患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的個體)來說都是異源的。4. 2. I物理和形杰學特征
本文所述的分離的胎盤細胞(PDACs)，當在原代培養(yǎng)物中或在細胞培養(yǎng)物中培養(yǎng)時，貼壁于組織培養(yǎng)基底，例如組織培養(yǎng)容器表面(例如組織培養(yǎng)塑料器具)，或貼壁于用胞外基質(zhì)或配體例如層粘連蛋白、膠原蛋白(例如天然的或變性的)、明膠、纖連蛋白、鳥氨酸、玻連蛋白和胞外膜蛋白(例如N1ATRIGEL (BD DiscoveryLabware, Bedford, Mass.))包被的組織培養(yǎng)表面。培養(yǎng)物中的分離的胎盤細胞呈現(xiàn)一般成纖維細胞樣、星形外觀，具有從中心細胞小體延伸的大量胞質(zhì)突起。但是，這些細胞在形態(tài)上與在相同條件下培養(yǎng)的成纖維細胞有區(qū)別，因為該分離的胎盤細胞顯現(xiàn)比成纖維細胞更大數(shù)量的胞質(zhì)突起。從形態(tài)上看，分離的胎盤細胞也與造血干細胞有區(qū)別，造血干細胞在培養(yǎng)物中一般呈現(xiàn)更圓的形態(tài)或鵝卵石形態(tài)。在某些實施方案中，可用于本文所公開方法中的分離的胎盤細胞，當在生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，長出胚胎樣小體。胚胎樣小體是非連續(xù)的細胞團塊，其可生長在增殖中的分離的胎盤細胞貼壁層頂部。使用術語“胚胎樣(embryoid-like)”是因為細胞團塊類似于胚胎樣小體，細胞團塊可從胚胎干細胞的培養(yǎng)物中生長。胚胎樣小體可在分離的胎盤細胞的增殖培養(yǎng)物中長出的生長培養(yǎng)基包括含有例如以下成分的培養(yǎng)基=DMEM-LG(例如來自Gibco) ;2%胎牛血清(例如來自HycloneLabs.) ;Ix胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒(ITS) ;lx亞油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ； 10_9M地塞米松(例如來自Sigma) ； 10_4M抗壞血酸2-磷酸酯(例如來自Sigma) ;10ng/mL表皮生長因子(例如來自R&DSystems);和10ng/mL血小板衍生生長因子(I3DGF-BB)(例如來自R&D Systems)。4. 2. 2細胞表面標記、分子標記和遺傳標記可用于本文所公開方法(例如治療結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的方法)中的分離的胎盤細胞，例如分離的多能胎盤細胞或分離的胎盤干細胞及此類分離的胎盤細胞群體，都是組織培養(yǎng)塑料器具貼壁的人胎盤細胞，具有多能細胞或干細胞的特征，并表達多種標記，這些標記可用于鑒定和/或分離所述細胞或細胞群體(包括干細胞)。在某些實施方案中，所述PDACs是生血管的,例如在體外(in vitro)或體內(nèi)(in vivo)。本文所述的分離的胎盤細胞和胎盤細胞群體(即，兩種或更多種分離的胎盤細胞)包括直接從胎盤或其任何部分(例如絨毛膜、胎盤絨毛葉等)獲得的胎盤細胞和含胎盤細胞的細胞群體。分離的胎盤細胞群體也包括培養(yǎng)物中的分離的胎盤細胞群體(即，兩種或更多種分離的胎盤細胞)和容器(例如袋)中的群體。本文所述的分離的胎盤細胞不是骨髓衍生的間充質(zhì)細胞、月旨肪衍生的間充質(zhì)干細胞或從臍帶血、胎盤血或外周血獲得的間充質(zhì)細胞?？捎糜诒疚乃龅姆椒ê徒M合物中的胎盤細胞(例如胎盤多能細胞和胎盤細胞)在本文中有描述并且描述于例如美國專利第7, 311，904,7, 311，905和7，468，276號；和描述于例如美國專利申請公布第2007/0275362號，所述專利和專利申請的公開內(nèi)容通過引用其全部結(jié)合到本文中。在某些實施方案中，所述分離的胎盤細胞是分離的胎盤干細胞。在某些其它的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是分離的胎盤多能細胞。在一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞(例如PDACs)是通過流式細胞術檢測⑶34_、⑶10+和⑶105+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶34_、⑶10+、⑶105+胎盤細胞具有分化成神經(jīng)表型的細胞、骨生成細胞表型的細胞和/或軟骨生成細胞表型的細胞的潛力。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶34_、⑶10+、⑶105+胎盤細胞另外還是⑶200+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶34_、⑶10+、⑶105+胎盤細胞另外還是⑶45—或⑶90+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶34_、⑶10+、⑶105+胎盤細胞通過流式細胞術檢測另外還是⑶45_和⑶90+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶34—、⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盤細胞通過流式細胞術檢測另外還是CD90+或CD45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD34_、⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盤細胞通過流式細胞術檢測另外還是⑶90+和⑶45 —，也就是說，所述細胞是⑶34 -、⑶10+、⑶45 -、⑶90+、⑶105+和⑶200+。在另一個具體的實施方案中，所述CD34 ^、CD10+、CD45 ^、CD90+、CD105+、CD200.細胞另外還是 CD80 ^ 和 CD86 ^。在某些實施方案中，所述胎盤細胞通過流式細胞術檢測是⑶34 —、⑶10+、⑶105+和CD200+，以及 CD38 ^、CD45 ^、CD80 ^、CD86、CD133、HLA-DR, DP, DQ^、SSEA3 ^、SSEA4 ^、CD29+、CD44+、CD73+、CD90+、CD105+、HLA-A, B, C+、PDLI+、ABC-p+ 和 / 或 0CT-4+ 中的一種或多種。在其它的實施方案中，上述⑶34 -、⑶10+、⑶105+細胞中的任一種另外還是⑶29+、⑶38 ^、⑶44+、 ⑶54+、SH3+或SH4+中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，所述細胞另外還是⑶44+。在任何上述分離的CD34_、CD10+、CD105+胎盤細胞的另一個具體的實施方案中，所述細胞另外還是 CD117'CD133'KDIT(VEGFR2 J ,HLA-A, B, C\HLA-DP, DQ, DIT 或程序性死亡-I 配體(PDLl)+中的一種或多種，或其任何組合。在另一個實施方案中，所述⑶34'⑶10+、⑶105+細胞另外還是⑶13+、⑶29+、CD33+、CD38、CD44+、CD45、CD54+、CD62E、CD62L_、CD62P _、SH3+(CD73+)、SH4+(CD73+)、CD80 ^、CD86 ^、CD90+、SH2+ (CD 105+)、CD106/VCAM+、CDl 17、CD 144/VE-鈣粘著蛋白低、CDl 84/CXCR4、CD200+、CD133、OCT-4+、SSEA3' SSEA4、ABC-p+、KDR_ (VEGFR2_)、HLA-A, B, C+、HLA-DP, DQ, DR_、HLA_G_或程序性死亡-I配體(I3DLl) +中的一種或多種，或其任何組合。在一個其它的實施方案中，所述⑶34'⑶10+、⑶105+細胞另外還是⑶13+、⑶29+、⑶33+、CD38' CD44+、CD45' CD54/ICAM+、CD62E' CD62L' CD62P' SH3+ (CD73+)、SH4+(CD73+)、CD80'CD86' CD90+、SH2+ (CD105+)、CD106/VCAM+、CDl 17' CD144/VE-鈣粘著蛋白低、CD184/CXCR4'CD200+、CD133'0CT-4+、SSEA3'SSEA4'ABC-p+、KDIT(VEGFR20 ,HLA-A, B, C\HLA-DP, DQ, DR'HLA-G-和程序性死亡-I配體(PDLl)+。在另一個具體的實施方案中，本文所述的胎盤細胞中的任一種另外還是ABC-P+(通過流式細胞術檢測)或0CT-4+(P0U5Fl+)(通過RT-PCR測定)，其中ABC-p是胎盤特異性ABC轉(zhuǎn)運蛋白(也稱為乳癌抗性蛋白(BCRP)及稱為米托蒽醌抗性蛋白(MXR))，而0CT-4是八聚體-4(0ctamer-4)蛋白(P0U5F1)。在另一個具體的實施方案中，本文所述的胎盤細胞中的任一種另外還是SSEA3_或SSEA4_，通過流式細胞術測定，其中SSEA3是階段特異性胚胎抗原3，而SSEA4是階段特異性胚胎抗原4。在另一個具體的實施方案中，本文所述的胎盤細胞中的任一種另外還是SSEA3_和SSEA4_。在另一個具體的實施方案中，本文所述的胎盤細胞中的任一種另外還是MHC-I+ (例如 HLA-A, B, C+)、MHC-I r (例如 HLA-DP, DQ, DIT)或 HLA-G _ 中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，本文所述的胎盤細胞中的任一種另外還是MHC-I+(例如HLA-A, B, C+)、MHC-IΓ (例如 HLA-DP, DQ, DIT)和 HLA-G _ 中的一種或多種。
本文還提供的是分離的胎盤細胞群體、或包含例如富集了所述分離的胎盤細胞的細胞群體(例如胎盤細胞群體)，它們都可用于本文所公開的方法和組合物中。優(yōu)選的是包含所述分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述細胞群體包含例如，至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 98% 分離的 CD10+、CD105+和CD34-胎盤細胞；即，在所述群體中細胞的至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 98% 是分離的 CD10+、CD105+ 和 CD34-胎盤細胞。在一個具體的實施方案中，所述分離的⑶34_、⑶10+、⑶105+胎盤細胞另外還是⑶200+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶34'⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盤細胞通過流式細胞術檢測另外還是CD90+或CD45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶34-、⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盤細胞通過流式細胞術檢測另外還是⑶90+和⑶45'在另一個具體的實施方案中，任何上述分離的⑶34_、⑶10+、⑶105+胎盤細胞另外還是⑶29+、⑶38_、⑶44+、⑶54+、SH3+或SH4+中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶34'⑶10+、⑶105+胎盤細胞或分離的⑶34'⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盤細胞，另外還是⑶44+。在任何包含上述分離的⑶34_、⑶10+、⑶105+胎盤細胞的細胞群體的一個具體的 實施方案中，所述分離的胎盤細胞另外還是⑶13+、⑶29+、⑶33+、⑶38_、⑶44+、⑶45_、⑶54+、CD62E' CD62L' CD62P' SH3+(CD73+)、SH4+(CD73+)、CD8(T、CD86' CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CD117、CD144/VE-鈣粘著蛋白低、CD184/CXCR4_、CD200+、CD133、OCT-4+、SSEA3、SSEA4、ABC_p+、KDIT(VEGFR20、HLA-A, B, C+、HLA-DP, DQ, DR' HLA-G-或程序性死亡-I配體(PDLl)+中的一種或多種，或其任何組合。在另一個具體的實施方案中，所述CD34 ^、CD10+、CD105+ 細胞另外還是 CD13+、CD29+、CD33+、CD38 ^、CD44+、CD45 ^、CD54/ICAM+、CD62E、CD62I/、CD62P、SH3+(CD73+)、SH4+(CD73+)、CD8(T、CD86、CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CD117、CD144/VE-鈣粘著蛋白低、CD184/CXCR4_、CD200+、CD133、OCT-4+、SSEA3、SSEA4、ABC_p+、KDR-(VEGFR2 ^)、HLA-A, B, C+、HLA-DP, DQ, DR' HLA-G-和程序性死亡-I 配體(PDLl)+。在某些實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是CD10+、CD29+、CD34 _、CD38 _、CD44+、CD45 _、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3 _、SSEA4 _、0CT-4+和ABC-ρ+中的一種或多種或其全部，其中所述分離的胎盤細胞是通過胎盤組織的物理和/或酶促破壞獲得的。在一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+和ABC-p+0在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+和CD34_，其中所述分離的胎盤細胞具有至少一個以下特征⑶10+、⑶29+、⑶44+、⑶45 ^、⑶54+、⑶90+、SH3+、SH4+、SSEA3_和SSEA4_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是OCT-4+、CD34_、CD10+、CD29+、CD44+、CD45' CD54+、CD90+、SH3+、SH4+、SSEA3_ 和 SSEA4、在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+、CD34_、SSEA3_和SSEA4_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+和⑶34_，并且是或者SH2+或者SH3+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+、⑶34_、SH2+和SH3+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是OCT-4+、CD34—、SSEA3—和SSEA4—，并且是或者SH2+或者SH3+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+和CD34_，并且是或者SH2+或者SH3+，并且是 CD10+、CD29+、CD44+、CD45'CD54+、CD90+、SSEA3-或 SSEA4-中的至少一個。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+、⑶34_、⑶10+、⑶29+、⑶44+、⑶45_、CD54+、CD90+、SSEA3-和 SSEA4 并且是或者 SH2+ 或者 SH3+。在另一個實施方案中，可用于本文所公開的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+、CD34_、CD45_、SSEA3_ 或 SSEA4、在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3—和SSEA4—。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是 SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3 ^ 和 SSEA4一、CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+、0CT-4+、CD3[或 CD45、在另一個實施方案中，可用于本文所公開的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是CD10+、CD29+、CD34 ^、CD44+、CD45 ^、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+ 和 SH4+ ;其中所述分離的胎盤細胞另外還是0CT-4+、SSEA3_或SSEA4_中的一種或多種。在某些實施方案中，可用于本文所公開的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是⑶200+或HLA-G—。在一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶200+和HLA-G—。在
另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞另外還是CD73+和CD105+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述干細胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+和⑶105+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD200+或HLA-G—胎盤細胞促進在包含所述分離的胎盤細胞的胎盤細胞群體中在允許胚胎樣小體形成的條件下形成胚胎樣小體。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是從不是干細胞或多能細胞的胎盤細胞中分離出來的(be isolated away from)。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是從不展示這些標記的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體是包含例如富集了 CD200+、HLA-G—干細胞的細胞群體。在一個具體的實施方案中，所述群體是胎盤細胞群體。在各種不同的實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%或至少約60%是分離的⑶200+、HLA-G—胎盤細胞。優(yōu)選地，所述細胞群體中細胞的至少約70%是分離的CD200+、HLA-G_胎盤細胞。更優(yōu)選地，所述細胞的至少約90%、95%或99%是分離的⑶200+、HLA-G—胎盤細胞。在所述細胞群體的一個具體實施方案中，所述分離的⑶200+、HLA-G_胎盤細胞也是⑶73+和⑶105+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶200+、HLA-G —胎盤細胞也是⑶34'⑶38—或⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶200+、HLA-G —胎盤細胞也是⑶34 _、⑶38 _、⑶45 _、⑶73+和CD105+。在另一個實施方案中，當在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時，所述細胞群體產(chǎn)生一個或多個胚胎樣小體。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體是從不是干細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD200+、HLA-G_胎盤細胞是從不展示這些標記的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是⑶73+、⑶105+和⑶200+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是HLA-G—。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G'在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD73+、CD105+和CD200+胎盤細胞促進在包含所述分離的胎盤細胞的胎盤細胞群體中形成一個或多個胚胎樣小體，當所述群體是在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是從不是所述分離的胎盤細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是從不展示這些標記的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體是包含例如富集了分離的CD73+、CD105+、CD200+胎盤細胞的細胞群體。在各種不同的實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%或至少約60%是分離的⑶73+、⑶105+、⑶200+胎盤細胞。在另一個實施方案中，所述細胞群體中所述細胞的至少約70%是分離的⑶73+、⑶105+、⑶200+胎盤細胞。在另一個實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約90%、95%或99%是分離的⑶73+、⑶105+、⑶200+胎盤細胞。在所述群體的一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是HLA-G'在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞另外還是CD34_、CD38_或CD45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的 胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38_、⑶45—和HLA-G'在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體當在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時產(chǎn)生一個或多個胚胎樣小體。在另一個具體的實施方案中，所述胎盤細胞群體是從不是干細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述胎盤細胞群體是從不展示這些特征的胎盤細胞中分離出來的。在某些其它的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶10+、⑶29+、⑶34'⑶38'CD44+、CD45 ^、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3 ^、SSEA4 ^、OCT-4+、HLA-G ^ 或 ABC_p+ 中的一種或多種。在一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶10+、⑶29+、⑶34_、CD38' CD44+、CD45' CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3、SSEA[和 0CT-4+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶10+、⑶29+、⑶34 —、⑶38 _、⑶45 _、⑶54+、SH2+、SH3+和SH4+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶10+、⑶29+、⑶34'CD38-、CD45-、CD54+、SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是 CD10+、CD29+、CD34 ^、CD38 ^、CD44+、CD45 ^、CD54+、CD90+、HLA-G ^、SH2+、SH3+、SH4+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+和ABC-p+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+、CD34_、SSEA3_和SSEA4_。在一個具體的實施方案中，所述分離的 OCT-4+、CD34 ^、SSEA3 ^ 和 SSEA4 ^ 胎盤細胞另外還是 CD10+、CD29+、CD34 ^、CD44+、CD45 ^、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+和SH4+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+和⑶34 _，并且是或者SH3+或者SH4+。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶34_并且是或者 CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+ 或者 0CT-4+。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是⑶200+和0CT-4+。在一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是⑶73+和⑶105+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是HLA-G—。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶200+、0CT-4+胎盤細胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶200+、0CT-4+胎盤細胞是⑶34_、⑶38—和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的 CD200+、0CT-4+ 胎盤細胞是 CD34' CD38' CD45' CD73+、CD105+ 和 HLA-G-。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD200+、0CT-4+胎盤細胞促進包含所述分離的細胞的胎盤細胞群體產(chǎn)生一個或多個胚胎樣小體，當所述群體是在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD200+、0CT-4+胎盤細胞是從不是干細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD200+、0CT-4+胎盤細胞是從不展示這些特征的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體是包含例如富集了 CD200+、0CT-4+胎盤細胞的細胞群體。在各種不同的實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%或至少約60%是分離的⑶200+、0CT-4+胎盤細胞。在另一個實施方案中，所述細胞的至少約70%是所述分離的⑶200+、0CT-4+胎盤細胞。在另一個實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約80%、90%、95%或99%是所述分離的CD200+、0CT-4+胎盤細胞。在所述分離的群體的一個具體實施方案中，所述分離的⑶200+、0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶73+和⑶105+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶200+、0CT-4+胎盤細胞另外還是HLA-G'在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶200+、0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶34'⑶38—和⑶45_。在另一個具體 的實施方案中，所述分離的⑶200+、0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶34 —、⑶38 _、⑶45 _、⑶73+、CD105+和HLA-G—。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體當在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時產(chǎn)生一個或多個胚胎樣小體。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體是從不是分離的CD200+、0CT-4+胎盤細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體是從不展示這些標記的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是CD73+、CD105+和HLA-G—。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD73+、CD105+和HLA-G—胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38—和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞另外還是0CT-4+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞另外還是⑶200+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的 CD73+、CD105+、HLA-G-胎盤細胞另外還是 CD34'CD38'CD45'0CT_4+和 CD200+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD73+、CD105+、HLA_G_胎盤細胞促進在包含所述細胞的胎盤細胞群體中形成胚胎樣小體，當所述群體是在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞是從不是所述分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD73+、CD105+、HLA-G—胎盤細胞是從不展示這些標記的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體是包含例如富集了分離的CD73+、CD105+和HLA-G_胎盤細胞的細胞群體。在各種不同的實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%或至少約60%是分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞。在另一個實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約70%是分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞。在另一個實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約90%、95%或99%是分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞。在上述群體的一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38—或⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞另外還是⑶34'⑶38—和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞另外還是OCT-4+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G_胎盤細胞另外還是⑶200+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+、HLA-G—胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38_、⑶45_、OCT-4+和⑶200+。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體是從不是0073+、00105+、!11^-6_胎盤細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體是從不展示這些標記的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是⑶73+和⑶105+并且促進在包含所述⑶73+、⑶105+細胞的分離的胎盤細胞群體中形成一個或多個胚胎樣小體，當所述群體是在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞另外還是⑶34 —、⑶38 _或⑶45 -。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞另外還是⑶34'⑶38—和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞另外還是0CT-4+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞另外還是0CT-4+、⑶34'⑶38 — 和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞是從不是所述細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD73+、CD105+胎盤細胞是從不展示這些特征的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體是包含例如富集了是CD73+、CD105+的分離的胎盤細胞的細胞群體并且促進在包含所述細胞的分離的胎盤細胞群體中形成一個或多個胚胎樣小體，當所述群體是在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時。在各種不同的實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%或至少約60%是所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞。在另一個實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約70%是所述分離的CD73+、CD105+胎盤細胞。在另一個實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約90%、95%或99%是所述分離的CD73+、⑶105+胎盤細胞。在上述群體的一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞另外還是⑶34'⑶38—或⑶45—。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞另外還是0CT-4+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞另外還是⑶200+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的⑶73+、⑶105+胎盤細胞另外還是CD34—、CD38—、CD45—、0CT-4+和CD200+。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體是從不是所述分離的CD73+、CD105+胎盤細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體是從不展示這些標記的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是0CT-4+并且促進在包含所述細胞的分離的胎盤細胞群體中形成一個或多個胚胎樣小體，當在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時。在一個具體的實施方案中，所述分離的0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶73+和⑶105+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38—或⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的0CT-4+胎盤細胞另外還是CD200+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34'⑶38_和⑶45'在另一個具體的實施方案中，所述分離的OCT-4+胎盤細胞是從不是OCT-4+胎盤細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的0CT-4+胎盤細胞是從不展示這些特征的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體是包含例如富集了分離的胎盤細胞的細胞群體，所述分離的胎盤細胞是0CT-4+的并且促進在包含所述細胞的分離的胎盤細胞群體中形成一個或多個胚胎樣小體，當所述群體是在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時。在各種不同的實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%或至少約60%是所述分離的0CT-4+胎盤細胞。在另一個實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約70%是所述分離的0CT-4+胎盤細胞。在另一個實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少約80%、90%、95%或99%是所述分離的0CT-4+胎盤細胞。在上述群體的一個具體實施方案中，所述分離的0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38—或⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶34_、⑶38—和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述分離的0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶73+和⑶105+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶200+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的0CT-4+胎盤細胞另外還是⑶73+、 ⑶105+、⑶200+、⑶34'⑶38—和⑶45_。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體是從不是所述細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體是從不展示這些標記的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是分離的HLA-A，B，C+、⑶45_、⑶133_和⑶34_胎盤細胞。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體是包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述分離的細胞群體中細胞的至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%是分離的HLA-A, B, C+、⑶45_、⑶133_和⑶34_胎盤細胞。在一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體是從不是HLA-A，B, C+、⑶45_、⑶133_和⑶34_胎盤細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是非母體來源的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞群體基本上不含母體成分；例如，所述分離的胎盤細胞群體中所述細胞的至少約40%、45%、5-0%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母體來源的。 在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是分離的CD10+、CD13+、CD33+、CD45-、CD117_和CD133—胎盤細胞。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體是包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述細胞群體中細胞的至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%是分離的CD10+、CD13+、CD33+、CD45 —、CD117—和CD133—胎盤細胞。在一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體是從不是所述分離的胎盤細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的CD10+、CD13+、CD33+、CD45 —、CD117—和CD133—胎盤細胞是非母體來源的，即，具有胎兒基因型。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞群體中所述細胞的至少約40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母體來源的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體是從不展示這些特征的胎盤細胞中分離出來的。 在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是分離的CDlO-、CD33_、CD44+、CD45_和CD117—胎盤細胞。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體是包含例如富集了分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述細胞群體中細胞的至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%是分離的⑶10_、⑶33_、⑶44+、⑶45—和⑶117—胎盤細胞。在一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體是從不是所述細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是非母體來源的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體中所述細胞的至少約 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母體來源的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體是從不展示這些標記的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是分離的⑶IO -、⑶13 -、⑶33 -、⑶45 -和⑶117 -胎盤細胞。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體是包含例如富集了分離的⑶10_、⑶13_、⑶33_、⑶45_和⑶117_胎盤細胞的細胞群體，其中所述群體中細胞的至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%是CDlO' CD13、CD33、CD45_和CDl 17-胎盤細胞。在一個具 體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體是從不是所述細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是非母體來源的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體中所述細胞的至少約40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母體來源的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體是從不展示這些特征的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是HLA A，B，C+、CD45' CD3[和 CD133、并且另外還是 CD10+、CD13+、CD38+、CD44+、CD90+、⑶105+、⑶200+和/或HLA-G_和/或?qū)Β?17陰性的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法中的細胞群體是包含分離的胎盤細胞的細胞群體，其中所述群體中細胞的至少約 20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或約 99%是分離的胎盤細胞，其是HLA A，B，Cr、CD45 -、CD34 _、CD 133 -，并且另外還是對⑶10、⑶13、⑶38、⑶44、⑶90、⑶105、CD200陽性的和/或?qū)Dl 17和/或HLA-G陰性的。在一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體是從不是所述細胞的胎盤細胞中分離出來的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是非母體來源的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體中所述細胞的至少約40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母體來源的。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體是從不展示這些標記的胎盤細胞中分離出來的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是這樣的分離的胎盤細胞其是⑶200+和⑶10+(通過抗體結(jié)合測定)和⑶117_ (通過抗體結(jié)合和RT-PCR 二者測定)。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是例如胎盤干細胞或胎盤多能細胞等分離的胎盤細胞，其是CD10+、CD29_、CD54+、⑶200+、HLA-G_、MHC I+類和β_2_微球蛋白+。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是這樣的胎盤細胞，其中至少一種細胞標記的表達是比間充質(zhì)干細胞(例如骨髓衍生間充質(zhì)干細胞)高至少兩倍。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是非母體來源的。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體中所述細胞的至少約 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98% 或 99% 是非母體來源的。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是例如胎盤干細胞或胎盤多能細胞等分離的胎盤細胞，其是⑶10+、⑶29+、⑶44+、⑶45'⑶54/ICAM+、CD62E_、CD62L_、CD62P_、CD80_、CD86_、CD103_、CD104_、CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-鈣粘著蛋白低、CD184/CXCR4' β 2-微球蛋白低、MHC-I' MHC-II-、HLA-G低和 /或TOLl<￡中的一種或多種。在一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞至少是CD29+和⑶54+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞至少是⑶44+和⑶106+。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞至少是CD29+。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞群體包含分離的胎盤細胞，并且所述細胞群體中細胞的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%是這樣的分離的胎盤細胞其是0)10+、0)29+、0)44+、0)45'0)54/1041+、0)624'0)62-17、0)62- 'CD80'CD86'CD103'CD104'CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-鈣粘著蛋白 dini、CD184/CXCR 4'β 2-微球蛋白din1、HLA-Idi' HLA-ΙΓ、HLA-Gdim和/或PDLldini中的一種或多種。在另一個具體的實施方案中，所述細胞群體中細胞的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%是CD10+、CD29+、CD44+、CD45' CD54/ICAM+、CD62-E' CD62-L' CD62-P' CD80' CD86' CD103'CD104' CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-鈣粘著蛋白 diD1、CD184/CXCR4' β 2-微球蛋白 din1、MHC-Idi' MHC-IΓ、HLA-Gdim 和 PDLldim0在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞是這樣的分離的胎盤細胞其是 CD10+、CD29+、CD34' CD38' CD44+、CD45' CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3-、SSEA4-、0CT-4+和ABC_p+中的一種或多種或全部，其中ABC-p是胎盤特異性ABC轉(zhuǎn)運蛋白(也稱為乳癌抗性蛋白(BCRP)及稱為米托蒽醌抗性蛋白(MXR))，其中所述分離的胎盤細胞是通過哺乳動物(例如人)胎盤的灌注獲得的，即將胎盤的臍帶血排干后灌注以去除殘血。在任何上述特征的另一個具體實施方案中，細胞標記(例如分化簇或免疫原性標記)的表達是通過流式細胞術測定的；在另一個具體的實施方案中，所述標記的表達是通過RT-PCR測定的?；蚋艣r分析證實了分離的胎盤細胞和分離的胎盤細胞群體與其它細胞，例如間充質(zhì)干細胞，例如骨髓衍生間充質(zhì)干細胞有區(qū)別。本文所述的分離的胎盤細胞在一個或多個基因的表達基礎上與例如間充質(zhì)干細胞有區(qū)別與骨髓衍生間充質(zhì)干細胞相比，其表達明顯高于所述分離的胎盤細胞，或明顯高于某些分離的臍帶干細胞。具體地說，可用于本文提供的治療方法中的分離的胎盤細胞在一個或多個基因的表達基礎上與間充質(zhì)干細胞有區(qū)別其在所述分離的胎盤細胞中的表達明顯高于(即至少高兩倍)在同等數(shù)量的骨髓衍生間充質(zhì)干細胞中的表達，其中所述的一個或多個基因是ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-I、B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G, ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、MEST, NFE2L3、NUAKU PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNU SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN、ZC3H12A 或任何上述基因的組合，當所述細胞是在同等條件下生長時。參見例如，美國專利申請公布第2007/0275362號，所述專利申請的公開內(nèi)容通過引用其全部結(jié)合到本文中。在某些具體的實施方案中，所述一個或多個基因的所述表達是例如通過RT-PCR或微陣列分析測定的，例如使用U133-A微陣列(Affymetrix)。在另一個具體的實施方案中,所述分離的胎盤細胞當培養(yǎng)到群體倍增的數(shù)量(例如，從約3到約35個群體倍增不等)時，，在包含以下成分的培養(yǎng)基中表達所述一個或多個基因DMEM_LG(例如來自Gibco) ;2%胎牛血清(例如來自HycloneLabs. ) ;lx胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒(ITS) ;lx亞 油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ;10_9M地塞米松(例如來自Sigma) ;10_4M抗壞血酸2-磷酸酯(例如來自Sigma) ;10ng/mL表皮生長因子(例如來自R&DSystems);和10ng/mL血小板衍生生長因子(TOGF-BB)(例如來自R&D Systems)。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞特異性基因或分離的臍帶細胞特異性基因是CD200。這些基因的具體序列可以在GenBank中按下列登錄號查找到NM_001615(ACTG2)、BC065545 (ADARBl)、(匪_181847(AMIG02)、AY358590 (ARTS-I)、BC074884 (B4GALT6)、BC008396 (BCHE)、BC020196 (CllorfO)、BC031103 (CD200)、NM_001845 (C0L4A1)、麗_001846 (C0L4A2)、BC052289 (CPA4)、BC094758 (DMD)、AF293359 (DSC3)、NM_001943 (DSG2)、AF338241 (EL0VL2)、AY336105 (F2RL1)、NM_018215 (FLJ10781)、AY416799 (GATA6)、BC075798 (GPR126)、NM_016235 (GPRC5B)、AF340038(ICAMl)、BC000844(IER3)、BC066339(IGFBP7)、BC013142(ILIA)、BT019749 (IL6)、BC007461(IL18)、(BC072017)KRT18、BC075839(KRT8)、BC060825(LIPG)、BC065240(LRAP)、BC010444 (MATN2)、BCO11908 (MEST)、BC068455 (NFE2L3)、NM_014840 (NUAKl)、AB006755 (PCDH7)、麗_014476 (PDLIM3)、BC126199 (PKP-2)、BC090862 (RTNl)、BC002538 (SERPINB9)、BC023312 (ST3GAL6)、BC001201 (ST6GALNAC5)、BC126160或 BC065328 (SLC12A8)、BC025697 (TCF21)、BC096235 (TGFB2)、BC005046 (VTN)和BC005001(ZC3H12A)(至 2008 年 3 月)。在某些具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞表達ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-I、B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ1078U GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G, ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKI、PCDH7、PDUM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A 中的每一個，其可檢測水平高于同等數(shù)量的骨髓衍生間充質(zhì)干細胞，當所述細胞是在同等條件下生長時。在多個具體的實施方案中，所述胎盤細胞表達⑶200和ARTSl (I型腫瘤壞死因子的氨肽酶調(diào)節(jié)物)；ARTS-1和LRAP(白細胞衍生精氨酸氨肽酶)；IL6(白介素_6)和TGFB2(轉(zhuǎn)化生長因子，β2) ;IL6和KRT18(角蛋白18) ;IER3 (立即早期應答3)、MEST (中胚層特異性轉(zhuǎn)錄物同系物)和TGFB2 KD200和IER3 <0200和IL6 KD200和KRT18 KD200和LRAP ;CD200 和 MEST ;CD200 和 NFE2L3 (核因子(類紅細胞衍生 2)樣 3);或 CD200 和 TGFB2，其可檢測水平高于同等數(shù)量的骨髓衍生間充質(zhì)干細胞(BM-MSCs)，其中，所述骨髓衍生間充質(zhì)干細胞在培養(yǎng)物中經(jīng)歷了同所述分離的胎盤細胞已經(jīng)歷的傳代數(shù)相等的傳代數(shù)。在其它具體的實施方案中、所述胎盤細胞表達ARTS-1、CD200、IL6和LRAP ;ARTS_1、IL6、TGFB2、IER3、KRT18 和 MEST ;CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3，和 TGFB2 ;ARTS_1、CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP, MEST, NFE2L3，和 TGFB2 ;或 IER3、MEST 和 TGFB2，其可檢測水平高于同等數(shù)量的骨髓衍生間充質(zhì)干細胞BM-MSCs，其中所述骨髓衍生間充質(zhì)干細胞在培養(yǎng)物中經(jīng)歷了同所述分離的胎盤細胞已經(jīng)歷的傳代數(shù)相等的傳代數(shù)。上述基因的表達可以通過標準技術來評價。例如，可以通過常規(guī)技術單獨地選擇和構(gòu)建基于基因序列的探針?；虻谋磉_可以例如在包含針對一個或多個基因的探針的微陣列上進行評價，例如Affymetrix GENECHIP Human Genome U133A 2· O陣列或Affymetrix GENECHIP Human Genome U133 Plus 2. 0 (Santa Clara, California) 即使特殊GenBank登錄號的序列被修改，這些基因的表達也可以進行評價，因為對修改序列有特異性的探針可以很容易地使用眾所周知的標準技術來產(chǎn)生。這些基因的表達水平可用于證實分離的胎盤細胞群體的身份，鑒定細胞群體為包含至少多個分離的胎盤細胞，等等。其身份被證實的分離的胎盤細胞群體可以是克隆的，例如從單個分離的胎盤細胞擴充的分離的胎盤細胞群體，或是混合干細胞群體，例如只包含從多種分離的胎盤細胞擴充的分離的胎盤細胞的細胞群體，或是包含如本文所述的分離的胎盤細胞和至少一種其它細胞類型的細胞群體。
這些基因的表達水平可用于選擇分離的胎盤細胞群體。舉例來說，如果以上所列的一個或多個基因的表達在來自所述細胞群體的樣品中比在同等的間充質(zhì)干細胞群體中明顯高一些，那么可以對細胞(例如克隆擴充細胞)的群體進行選擇。這樣的選擇可以屬于來自多個分離的胎盤細胞群體，即來自其身份不是已知的多個細胞群體的群體，等等。分離的胎盤細胞可以基于一個或多個這樣的基因的表達水平，通過與所述一個或多個基因在例如間充質(zhì)干細胞對照中的表達水平，例如所述一個或多個基因在同等數(shù)量的骨髓衍生間充質(zhì)干細胞中的表達水平相比進行選擇。在一個實施方案中，使用所述一個或多個基因在包含同等數(shù)量的間充質(zhì)干細胞的樣品中的表達水平作為對照。在另一個實施方案中，用于在某些條件下測試的分離的胎盤細胞的對照，是代表所述一個或多個基因在間充質(zhì)干細胞中在所述條件下的表達水平的某個數(shù)值。本文所述的分離的胎盤細胞在原代培養(yǎng)物中或在包含例如以下成分的培養(yǎng)基中在增殖期間展示上述特征(例如細胞表面標記和/或基因表達概況的組合)DMEM-LG(Gibco)、2% 胎牛血清(FCS) (Hyclone Laboratories)、lx 膜島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒(ITS)、lx 亞油酸(lenolenic-acid)-牛血清-白蛋白(LA-BSA)、10_9M 地塞米松(Sigma)、1(Γ4Μ 抗壞血酸 2-磷酸酯(Sigma)、10ng/ml 表皮生長因子(EGF) (R&DSystems)、10ng/ml 血小板衍生的生長因子(I3DGF-BB) (R&D Systems)和IOOU青霉素/1000U鏈霉素。在本文所公開的任何胎盤細胞的某些實施方案中，所述細胞是人的。在本文所公開的任何胎盤細胞的某些實施方案中，所述細胞標記特征或基因表達特征是人標記或人基因。在所述分離的胎盤細胞或包含所述分離的胎盤細胞的細胞群體的另一個具體的實施方案中，所述細胞或群體已進行了擴充，例如已傳代至少、約或不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 次，或增殖至少、約或不超過 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38 或 40 個群體倍增。在所述分離的胎盤細胞或包含所述分離的胎盤細胞的細胞群體的另一個具體的實施方案中，所述細胞或群體是原代分離物。在本文所公開的分離的胎盤細胞或包含分離的胎盤細胞的細胞群體的另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞是來源于胎兒的(即具有胎兒基因型)。
在某些實施方案中，所述分離的胎盤細胞在培養(yǎng)期間在生長培養(yǎng)基即配制促進增殖的培養(yǎng)基中不分化，例如在增殖期間在生長培養(yǎng)基中不分化。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞不需要飼養(yǎng)層(feeder layer)以便增殖。在另一個具體的實施方案中，所述分離的胎盤細胞在培養(yǎng)物中在飼養(yǎng)層不存在時不分化，唯獨因為缺少飼養(yǎng)細胞層。在另一個實施方案中，可用于本文所述的方法和組合物中的細胞是分離的胎盤細胞，其中所述分離的胎盤細胞的多數(shù)對醛脫氫酶(ALDH)是陽性的(通過醛脫氫酶活性測定評價)。這樣的測定是本領域已知的(參見例如，Bostian和Betts, Biochem.J.，173, 787，(1978))。在一個具體的實施方案中，所述ALDH測定使用ALDEFLUOR (Aldagen, Inc. , Ashland, Oregon)作為醒脫氫酶活性的標記。在一個具體的實施方案中，所述多數(shù)是介于所述細胞群體中細胞的約3%和約25%之間。在另一個實施方案中，本文提供的是分離的臍帶細胞群體，例如多能分離的臍帶細胞，其中所述分離的臍帶細胞的多數(shù)對醛脫氫酶是陽性的，通過醛脫氫酶活性測定評價，使用ALDEFLUOR 作為醛脫氫酶
活性的指標。在一個具體的實施方案中，所述多數(shù)是介于所述細胞群體中細胞的約3%和約25%之間。在另一個實施方案中，所述分離的胎盤細胞群體或分離的臍帶細胞顯示，其ALDH活性比具有大致相同的細胞數(shù)量并在相同的條件下培養(yǎng)的骨髓衍生間充質(zhì)干細胞群體高至少三倍或至少五倍。在任何包含本文所述的分離的胎盤細胞的細胞群體的某些實施方案中，所述細胞群體中的胎盤細胞基本上不含具有母體基因型的細胞；例如，在所述群體中胎盤細胞的至少 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99% 具有胎兒基因型。在任何包含本文所述的分離的胎盤細胞的細胞群體的某些其它實施方案中，包含所述胎盤細胞的細胞群體基本上不含具有母體基因型的細胞；例如，在所述群體中的細胞的至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99% 具有胎兒基因型。在任何上述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞的細胞群體的一個具體的實施方案中，細胞的染色體組型或所述群體中細胞的至少約95%或約99%是正常的。在任何上述胎盤細胞或細胞群體的另一個具體的實施方案中，所述細胞或所述細胞群體中的細胞是非母體來源的。帶有標記的任何上述組合的分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體可以按任何比率進行組合。上述分離的胎盤細胞群體的任意兩種或更多種可以組合形成分離的胎盤細胞群體。例如，一個分離的胎盤細胞群體可包含由一種上述標記組合限定的第一個分離的胎盤細胞群體，及由另一種上述標記組合限定的第二個分離的胎盤細胞群體，其中所述的第一個和第二個群體是按約 1:99、2:98、3:97、4:96、5:95、10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、95:5、96:4、97:3、98:2或約99:1 的比率進行組合的。以同樣的方式，任意三種(個)、四種(個)、五種(個)或更多種(個)上述分離的胎盤細胞或分離的胎盤細胞群體可以進行組合。可用于本文所述的方法和組合物中的分離的胎盤細胞可以例如通過用或不用酶促消化(參見第4. 3. 3節(jié))或灌注(參見第4. 3. 4節(jié))破壞胎盤組織來獲得。例如，分離的胎盤細胞群體可以按照包括下述方法在內(nèi)的方法產(chǎn)生灌注已排干臍帶血并經(jīng)灌注去掉殘留血液的哺乳動物胎盤；用灌注溶液灌注所述胎盤；和收集所述灌注溶液，其中在灌注之后，所述灌注溶液包含胎盤細胞群體，包含分離的胎盤細胞；和分離來自所述細胞群體的多種所述分離的胎盤細胞。在一個具體的實施方案中，所述灌注溶液既通過了臍靜脈又通過了臍動脈并在從胎盤流出之后收集起來。在另一個具體的實施方案中，使所述灌注溶液通過臍靜脈并從臍動脈中收集起來或通過臍動脈并從臍靜脈中收集起來。在各種不同的實施方案中，從胎盤灌注中獲得的、在所述細胞群體所含的分離的胎盤細胞是所述胎盤細胞群體的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99. 5%。在另一個具體的實施方案中，經(jīng)由灌注收集的分離的胎盤細胞包含胎兒細胞和母體細胞。在另一個具體的實施方案中，經(jīng)由灌注收集的分離的胎盤細胞是至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99. 5%胎兒細胞。在另一個具體的實施方案中，本文提供的是包含經(jīng)由灌注收集的如本文所述的分離的胎盤細胞群體的組合物，其中所述組合物包含至少一部分用于收集所述分離的胎盤細胞的灌注溶液。
本文所述的分離的胎盤細胞的分離群體可以如下產(chǎn)生用破壞組織的酶消化胎盤組織以獲得包含所述細胞的胎盤細胞群體，和從所述胎盤細胞的剩余物中分離或基本上分離所述胎盤細胞的多數(shù)。整個胎盤或其任何部分可以經(jīng)過消化以獲得本文所述的分離的胎盤細胞。在多個具體的實施方案中，例如，所述胎盤組織可以是整個胎盤、羊膜、絨毛膜、羊膜和絨毛膜的組合、或任何上述物質(zhì)的組合。在其它具體的實施方案中，所述破壞組織的酶是胰蛋白酶或膠原蛋白酶。在各種不同的實施方案中，在從消化胎盤獲得的細胞群體中所含有的分離的胎盤細胞是所述胎盤細胞群體的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少 99. 5%。上述胎盤細胞的分離群體和分離的胎盤細胞的群體一般可包含約、至少或不超過1x105、5x105、1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、5x108、1x109、5x109、1x1010、5x1010、IxlO11 或以上的分離的胎盤細胞。可用于本文所述的治療方法中的分離的胎盤細胞群體包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99% 活的分離的胎盤細胞，例如，如通過例如錐蟲藍排除法測定的。 4. 2. 3培養(yǎng)物中的牛長就任何哺乳動物細胞來說，本文第4. 4. 2節(jié)描述的分離的胎盤細胞的生長部分地取決于為生長選擇的特殊培養(yǎng)基。在最佳條件下，所述分離的胎盤細胞典型地在約I天以內(nèi)數(shù)量翻倍。在培養(yǎng)期間，本文所述的分離的胎盤細胞貼壁于培養(yǎng)物中的基底，例如組織培養(yǎng)容器的表面(例如組織培養(yǎng)皿塑料器具，纖連蛋白包被的塑料器具等)并形成單層。包含本文所述的分離的胎盤細胞的胎盤細胞群體，當在適宜條件下培養(yǎng)時，可形成胚胎樣小體，即在貼壁細胞層頂上長出的三維細胞簇。胚胎樣小體里面的細胞可表達與極早期干細胞相關的標記，例如OCT-4、Nanog, SSEA3和SSEA4。胚胎樣小體里面的細胞典型地不貼壁于培養(yǎng)基底上，而貼壁于培養(yǎng)基底的是本文所述的分離的胎盤細胞，但是在培養(yǎng)期間往往保留吸附在貼壁細胞上。對于活力，胚胎樣小體細胞依賴于貼壁的分離的胎盤細胞，因為在貼壁的分離的胎盤細胞不存在時，胚胎樣小體不形成。因此，貼壁的分離的胎盤細胞促進在包含貼壁的分離的胎盤細胞的胎盤細胞群體中生長一個或多個胚胎樣小體。雖然不希望受理論的束縛，但是胚胎樣小體的細胞被認為在貼壁的分離的胎盤細胞上生長很像胚胎干細胞在細胞的飼養(yǎng)層上生長。
4. 3獲得分離的胎盤細胞的方法4. 3. I干細朐收集纟目合物本文進一步提供的是收集和分離胎盤細胞，例如在以上第4. 2. 2節(jié)中描述的分離的胎盤細胞的方法。一般而言，這樣的細胞是使用生理上可接受的溶液(例如細胞收集組合物)從哺乳動物胎盤獲得的。一種示例性的細胞收集組合物詳細描述于有關的美國專利申請公布第 2007/0190042 號，題目為 “Improved Medium for Collecting PlacentalStemCells and Preserving Organs (用于收集胎盤干細胞和保存器官的改良培養(yǎng)基)”,所述專利申請的公開內(nèi)容通過引用其全部結(jié)合到本文中。所述細胞收集組合物可包含適合于收集和/或培養(yǎng)細胞(例如本文所述的分離的胎盤細胞)的任何生理上可接受的溶液，例如鹽水溶液(例如磷酸緩沖鹽溶液、Kreb氏溶液、改良的Kreb氏溶液、Eagle氏溶液、O. 9%NaCl等)、培養(yǎng)基(例如DMEM，H. DMEM等)等。所述細胞收集組合物可包含傾向于保存分離的胎盤細胞的一種或多種組分，即防 止所述分離的胎盤細胞死亡或延遲所述分離的胎盤細胞的死亡，減少細胞群體中分離的胎盤細胞從收集時間到培養(yǎng)時間期間的死亡數(shù)量，等。這樣的組分可以是例如細胞凋亡抑制劑(例如半胱天冬酶(caspase)抑制劑或JNK抑制劑)；血管擴張藥(例如硫酸鎂、抗高血壓藥、心房鈉尿肽(ANP)、促腎上腺皮質(zhì)激素、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素、硝普鈉(sodiumnitroprusside)、肼屈嗪(hydralazine)、三磷酸腺苷、腺苷、卩引哚美辛(indomethacin)或硫酸鎂、磷酸二酯酶抑制劑等)；壞死抑制劑(例如2-(1H-吲哚-3-基)-3-戊基氨基-馬來酰亞胺、吡咯烷二硫代氨基甲酸酯或氯硝西泮(clonazepam)) ；TNF-α抑制劑；和/或攜氧的全氟化碳(例如全氟辛基溴化物(perfluorooctyl bromide)、全氟癸基溴化物(perfluorodecyl bromide)等)。所述細胞收集組合物可包含一種或多種降解組織的酶，例如金屬蛋白酶、絲氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、RNase或DNase等。這樣的酶包括但不限于膠原蛋白酶(例如膠原蛋白酶I、II、III或IV,來自溶組織梭菌(Clostridium histolyticum)的膠原蛋白酶等)；分散酶(dispase)、嗜熱菌蛋白酶(thermolysin)、彈性蛋白酶、胰蛋白酶、釋放酶(LIBERASE)、透明質(zhì)酸酶等。所述細胞收集組合物可包含殺細菌或抑細菌有效量的抗生素。在某些非限制性實施方案中，所述抗生素是大環(huán)內(nèi)酯類(例如妥布霉素(tobramycin))、頭孢菌素類(例如頭孢氨節(jié)(cephalexin)、頭孢拉定(cephradine)、頭孢呋辛(cefuroxime)、頭孢齊爾(cefprozil)、頭孢克洛(cefaclor)、頭孢克廂(cefixime)或頭孢輕氨節(jié)(cefadroxil))、克拉霉素(clarithromycin)、紅霉素(erythromycin)、青霉素(例如青霉素V)或喹諾酮類(例如氧氟沙星(ofloxacin)、環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)或諾氟沙星(norfloxacin))、四環(huán)素(tetracycline)、鏈霉素等。在一個具體的實施方案中，所述抗生素是針對革蘭氏陽性菌(+)和/或革蘭氏陰性菌(-)(例如銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等)的活性劑。在一個實施方案中,所述抗生素是慶大霉素，例如在培養(yǎng)基中約O. 005%至約O. 01%(w/v)。所述細胞收集組合物也可包含下列化合物中的一種或多種腺苷(約ImM至約50mM) ；D-葡萄糖(約20mM至約IOOmM);鎂離子(約ImM至約50mM);分子量大于20，000道爾頓的大分子，在一個實施方案中，以足以維持內(nèi)皮完整性和細胞活力的量存在的大分子(例如以約25g/L至約100g/L或約40g/L至約60g/L存在的合成的或天然存在的膠體、多糖(例如葡聚糖)或聚乙二醇)；抗氧化劑(例如以約25 μ M至約100 μ M存在的丁羥茴醚、丁羥甲苯、谷胱甘肽、維生素C或維生素Ε);還原劑(例如以約O. ImM至約5mM存在的N-乙酰半胱氨酸)；防止鈣進入細胞的藥劑(例如以約2μ M至約25μ M存在的維拉帕米(verapamil));硝酸甘油(例如約O. 05g/L至約O. 2g/L);抗凝劑,在一個實施方案中，以足以有助于防止殘留血液凝固的量存在的抗凝劑(例如以約1000單位/L至約100,000單位/L的濃度存在的肝素或水蛭素(hirudin);或含有阿米洛利(amiloride)的化合物(例如以約I. O μ M至約5 μ M存在的阿米洛利、乙基異丙基阿米洛利、六亞甲基阿米洛利、二甲基阿米洛利或異丁基阿米洛利)。4. 3. 2胎盤的收集和處理一般而言，人胎盤是在分娩后在其娩出后立即回收的。在一個優(yōu)選的實施方案中，胎盤是在患者知情同意之后并在獲取患者的完全醫(yī)學病史并與胎盤相關之后回收的。優(yōu)選地，醫(yī)學病史在生產(chǎn)后持續(xù)。這樣的醫(yī)學病史可用于協(xié)調(diào)胎盤或從其收獲的分離的胎盤細胞的后續(xù)應用。例如，根據(jù)醫(yī)學病史，分離的人胎盤細胞可用于與胎盤相關的嬰兒的個性化醫(yī)療，或用于嬰兒的父母、兄弟姐妹或其它親屬的個性化醫(yī)療。在分離的胎盤細胞的回收之前，優(yōu)選去掉臍帶血和胎盤血。在某些實施方案中，在分娩后，回收胎盤中的臍帶血。胎盤可以經(jīng)受住常規(guī)的臍帶血回收過程。典型地，使用針或套管，借助重力，來放掉胎盤的血(參見例如，Anderson，美國專利第5，372，581號Vessel等人，美國專利第5，415，665號)。針或套管通常置于臍靜脈內(nèi)并且可對胎盤輕輕地按摩以有助于從胎盤中排干臍帶血。這樣的臍帶血回收可以在商業(yè)上進行，例如LifeBankUSA, Cedar Knolls，N.J.。優(yōu)選地，胎盤借助重力排干而不需要進一步操作，以便在臍帶血回收期間使組織破壞減到最小。典型地，把胎盤從產(chǎn)房運到另一地點(例如實驗室)用于通過例如灌注或組織分·離進行臍帶血的回收和干細胞的收集。胎盤優(yōu)選放在無菌的熱絕緣的運輸裝置(維持胎盤的溫度在20-28° C之間)中運輸，例如將帶有被鉗住近端臍帶的胎盤放在無菌的自封(zip-lock)塑料袋里面，然后放入絕緣容器中。在另一個實施方案中，胎盤放在大致如待審的美國專利第7，147，626號中描述的臍帶血收集試劑盒中運輸，所述待審專利的公開內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。優(yōu)選地，胎盤在娩出后4-24小時送到實驗室。在某些實施方案中，近端臍帶被鉗住，優(yōu)選在臍帶血回收之前在插進胎盤托盤中4-5cm(厘米)以內(nèi)。在其它的實施方案中，近端臍帶是在臍帶血回收之后但在胎盤進一步加工處理之前被鉗住的。在細胞收集之前，胎盤可以保存在無菌條件下和在室溫或在5° (T25° C的溫度下。在進行胎盤灌注以去掉任何殘留的臍帶血之前，胎盤可保存4-24小時、長達48小時或長于48小時的時期。在一個實施方案中，在娩出后從約零小時到約2小時之間收獲胎盤。胎盤優(yōu)選保存在抗凝劑溶液中，溫度為5° (Γ25° C。合適的抗凝劑溶液是本領域眾所周知的。例如，可以使用肝素或華法林鈉(warfarin sodium)的溶液。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述抗凝劑溶液包含肝素溶液(例如l%w/w的1:1000溶液)。在收集胎盤細胞之前，放血后的胎盤優(yōu)選保存不超過36小時。哺乳動物胎盤或其部分一旦一般如上所述收集和準備后，就可以按任何本領域已知的方式進行處理，例如可以進行灌注或破壞，例如用一種或多種破壞組織的酶進行消化以獲得分離的胎盤細胞。4. 3. 3胎盤組織的物理破壞和酶促消化在一個實施方案中，干細胞是從哺乳動物胎盤中通過物理破壞該器官的一部分或其全部而收集的。例如，胎盤或其部分可以經(jīng)過壓碎、剪碎、絞碎、切碎、斬碎、浸潰等處理。然后，可以對組織進行培養(yǎng)以獲得分離的胎盤細胞群體。典型地，胎盤組織用例如培養(yǎng)基、鹽水溶液或干細胞收集組合物進行破壞(參見第4. 5. I節(jié)和下文)。胎盤可以在物理破壞和/或酶促消化和干細胞回收之前進行解剖成為各組分。分離的胎盤細胞可以從羊膜、絨毛膜、臍帶、胎盤絨毛葉、或其任何組合中的全部或其中的一部分獲得，包括從整個胎盤獲得。優(yōu)選地，分離的胎盤細胞是從包含羊膜和絨毛膜的胎盤組織中獲得的，典型地，分離的胎盤細胞可以通過破壞一小塊胎盤組織來獲得，例如，一塊胎盤組織的體積約為 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或約1000立方毫米?？梢允褂萌魏挝锢砥茐姆椒ǎ灰撈茐姆椒?留下所述器官中細胞的多數(shù)、更優(yōu)選絕大多數(shù)和更優(yōu)選至少60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%是活的，如通過例如錐蟲藍排除法測定的。分離的貼壁胎盤細胞一般可以在娩出后前約3天內(nèi)的任何時間，但優(yōu)選在娩出后約8小時和約18小時之間從胎盤或其部分中收集。在一個具體的實施方案中，將經(jīng)破壞的組織在適合于分離的胎盤細胞增殖的組織培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)(參見例如，下文第4. 6節(jié)，描述了胎盤細胞例如PDACs的培養(yǎng))。在另一個具體的實施方案中，通過物理破壞胎盤組織來收集分離的胎盤細胞，其中物理破壞包括酶促消化，酶促消化可通過使用一種或多種消化組織的酶來完成。胎盤或其部分也可以通過物理破壞和用一種或多種酶消化，然后將所得材料浸入或混入細胞收集組合物中。優(yōu)選的細胞收集組合物包含一種或多種破壞組織的酶?？捎糜谄茐奶ケP的酶包括木瓜蛋白酶、脫氧核糖核酸酶、絲氨酸蛋白酶例如胰蛋白酶、糜蛋白酶、膠原蛋白酶、分散酶或彈性蛋白酶。絲氨酸蛋白酶可以被血清中的α 2微球蛋白抑制，因此用于消化的培養(yǎng)基通常是無血清的。EDTA和DNase常用于酶消化程序以增加細胞回收的效率。消化物(digestate)優(yōu)選進行稀釋以避免捕獲粘稠消化物里面的細胞?？梢允褂媒M織消化酶的任何組合。使用胰蛋白酶進行消化的典型濃度包括O. 1%至約2%胰蛋白酶，例如約O. 25%胰蛋白酶。蛋白酶可以組合使用，即在同一消化反應中有兩種或更多種蛋白酶，或者可以依次使用以便釋放胎盤細胞，例如胎盤干細胞和胎盤多能細胞。例如，在一個實施方案中，胎盤或其部分首先用適量的膠原蛋白酶K約I至約2mg/ml)消化例如30分鐘，然后用濃度為約O. 25%的胰蛋白酶于37° C消化例如10分鐘。在使用其它酶后，優(yōu)選連續(xù)使用絲氨酸蛋白酶。在另一個實施方案中，通過加入螯合劑來進一步破壞組織，例如，將乙二醇雙(2-氨基乙基醚)-N，N，N’N’ -四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA)加入到包含干細胞的干細胞收集組合物中，或者加入到其中在分離干細胞之前用該干細胞收集組合物破壞和/或消化組織的溶液中。消化后，洗滌消化物，例如用培養(yǎng)基洗滌三次，把洗滌后的細胞接種到培養(yǎng)瓶。細胞通過差別粘附進行分離，并表征例如活力、細胞表面標記、分化等。
人們將會認識到，若完整胎盤或胎盤部分既包含胎兒細胞又包含母體細胞(例如，其中胎盤部分包含絨毛膜或絨毛葉)，那么所分離的胎盤細胞可包含從胎兒和母體二者來源獲得的混合胎盤細胞。若胎盤部分沒有包含或包含可忽略的母體細胞(例如羊膜)，從中分離的胎盤細胞將幾乎只包括胎兒胎盤細胞(即具有胎兒基因型的胎盤細胞)。胎盤細胞，例如在以上第4. 2. 2節(jié)中描述的胎盤細胞可以通過下述方法從經(jīng)破壞的胎盤組織中分離出來進行差別胰蛋白酶消化(參見下文第4. 3. 5節(jié))，然后放在一個或多個新的培養(yǎng)容器中的新鮮增殖培養(yǎng)基里面培養(yǎng)，然后任選進行第二個差別胰蛋白酶消化步驟。4. 3. 4胎盤灌注胎盤細胞，例如在以上第4. 2. 2節(jié)中描述的胎盤細胞也可通過灌注哺乳動物胎盤來獲得。灌注哺乳動物胎盤以獲得胎盤細胞的方法公開于例如Hariri的美國專利第7，045，148和7，255，729號、美國專利申請公布第2007/0275362和2007/0190042號，所述 專利和專利申請中的每一個都通過引用其全部結(jié)合到本文中。胎盤細胞可以通過灌注來收集，例如通過胎盤血管系統(tǒng)，使用例如細胞收集組合物作為灌注溶液。在一個實施方案中，通過將灌注溶液灌注到臍動脈和臍靜脈中的任何一個或它們兩者來進行哺乳動物胎盤灌注。使用例如重力流入胎盤中，可以完成灌注溶液通過胎盤的流入。優(yōu)選地，使用泵，例如蠕動泵，迫使灌注溶液通過胎盤。臍靜脈可例如用套管(例如TEFLON"'或塑料套管)進行插管，即連上無菌的連接器，例如無菌的管子。無菌的連接器與灌注歧管相連。在準備灌注時，胎盤優(yōu)選以臍動脈和臍靜脈位于胎盤的最高點的方式定向(例如懸浮)。可以通過使灌注液通過胎盤血管系統(tǒng)和周圍組織來對胎盤進行灌注。也可以使灌注液流進臍靜脈并從臍動脈收集或使灌注液流進臍靜脈并從臍動脈收集，來對胎盤進行灌注。在一個實施方案中，例如，將臍動脈和臍靜脈同時連接例如移液器，移液器通過柔性連接器與灌注溶液貯庫相連。使灌注溶液通過臍靜脈和臍動脈。使灌注溶液通過血管壁流進胎盤的周圍組織來流出和/或灌入，然后從在妊娠期間與母親子宮相連的胎盤表面收集在合適的開口容器中。灌注溶液可通過臍帶開口處引入并讓其流動或在與母親子宮壁交界的胎盤壁中的開口處滲濾出來。通過此方法收集的胎盤細胞，其可稱為“盤(pan)”方法，典型地是胎兒細胞和母體細胞的混合物。在另一個實施方案中，所述灌注溶液通過了臍靜脈灌入并從臍動脈收集起來，或者通過臍動脈灌入并從臍靜脈收集起來。通過此方法(其可稱為“閉路(closed circuit)”方法)收集的胎盤細胞典型地幾乎完全是胎兒的。人們將會認識到，使用“盤”方法的灌注，即其灌注流出液(perfusate)是在其從胎盤的母體一側(cè)流出后收集的，導致產(chǎn)生胎兒細胞和母體細胞的混合物。結(jié)果，通過此方法收集的細胞可包含混合的胎盤細胞群體，例如胎兒和母體二者來源的胎盤干細胞或胎盤多能細胞。相比之下，在閉路方法中僅通過胎盤血管系統(tǒng)的灌注，若灌注液通過一個或兩個胎盤血管灌入并只通過剩下的血管收集，導致收集到幾乎完全是胎兒來源的胎盤細胞群體。在一個實施方案中，所述閉路灌注方法可以如下進行。在分娩后約48小時以內(nèi)獲得產(chǎn)后胎盤。鉗住臍帶并在鉗子上方切斷。臍帶可以棄去或可處理后回收例如臍帶干細胞，和/或加工臍帶膜以生產(chǎn)生物材料。羊膜可以在灌注期間留下來或可與絨毛膜分離開，例如用手指進行鈍法解剖。如果在灌注之前將羊膜與絨毛膜分離開，那可以將其棄去或可處理后例如獲得通過酶促消化的干細胞或生產(chǎn)羊膜生物材料，例如美國申請公布第2004/0048796號中描述的生物材料，所述申請的公開內(nèi)容通過引用其全部結(jié)合到本文中。例如在用無菌紗布清潔所有的可見血塊和殘留血液的胎盤之后，暴露出臍帶血管，例如通過部分切割臍帶膜以暴露臍帶的橫截面。通過各血管的切割末端，例如用閉合的鱷魚鉗進行確認和開口。然后將該連接器，例如與灌注裝置或蠕動泵相連的塑料管插入胎盤動脈的每一個中。泵可以是適合于此目的的任何泵，例如蠕動泵。然后可以將連接無菌收集貯庫(例如血袋，例如250mL收集袋)的塑料管插入胎盤靜脈?；蛘?，可以將連接該泵的管子插入胎盤靜脈，而將連接收集貯庫的管子插入胎盤動脈的一條或兩條中。然后用一定體積的灌注溶液(例如約750ml的灌注溶液)灌注胎盤。然后,例如通過離心收集灌注流出液中的細胞。在某些實施方案中，胎盤用灌注溶液(例如100-300mL灌注溶液)進行灌注以去掉殘留血液，然后灌注以收集胎盤細胞，例如胎盤干細胞和/或胎盤多能細胞。在另一個實施方案中，胎盤不用灌注溶液進行灌注去掉殘留血液，然后灌注以收集胎盤細胞。在一個實施方案中，在灌注期間將近端臍帶鉗住，且更優(yōu)選在臍帶插入胎盤的盤 里面4-5cm(厘米)以內(nèi)鉗住。在放血過程期間首先從哺乳動物胎盤中收集的灌注液一般用臍帶血和/或胎盤血的殘留紅血細胞顯色。隨著灌注進行，灌注液變成更接近無色，殘留臍帶血細胞被從胎盤中洗出來。一般來說，3(Tl00ml (毫升)的灌注液對于初步放出胎盤血已足夠，但根據(jù)所觀察的結(jié)果，可以采用更多或更少的灌注液。用于分離胎盤細胞的灌注液體積可以變化，取決于待收集的細胞數(shù)量、胎盤的大小、從單個胎盤制備的收集物數(shù)量，等等。在各種不同的實施方案中，灌注液的體積可以是50mL 5000mL、50mL 4000mL、50mL 3000mL、100mL 2000mL、250mL 2000mL、500mL 2000mL 或750mL 2000mL。典型地，在放血后，胎盤用700-800mL的灌注液進行灌注。在幾小時或幾天的時程內(nèi)，胎盤可進行多次灌注。在胎盤要進行多次灌注的情況下，胎盤可放在容器或其它合適管中在無菌條件下維持或培養(yǎng)，并用細胞收集組合物或標準灌注溶液(例如正常的鹽水溶液，例如磷緩沖鹽溶液(“PBS”))加或不加抗凝劑(例如肝素、華法林鈉、香豆素、雙羥基香豆素)和/或加或不加抗微生物劑(例如巰基乙醇(O. ImM);抗生素,例如鏈霉素(例如在40-100 μ g/ml)、青霉素(例如在40U/ml)、兩性霉素B(例如在O. 5μ g/ml)進行灌注。在一個實施方案中，將分離的胎盤維持或培養(yǎng)一段時間而不收集灌注流出液，使得在灌注和灌注流出液收集之前，胎盤維持或培養(yǎng)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23 或 24 小時，或 2 天或 3 天或更多天。經(jīng)灌注的胎盤可維持一個或多個額外時間，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24小時或更長時間，再用例如700-800mL灌注液進行第二次灌注。胎盤可以進行1、2、3、4、5次或更多次灌注，例如每1、2、3、4、5或6小時一次。在一個優(yōu)選的實施方案中，重復進行胎盤的灌注和灌注溶液(例如細胞收集組合物)的收集直到所回收的有核細胞數(shù)量下降到100個細胞/ml以下。在不同時間點的灌注流出液可以單獨地進一步加工以回收時間依賴性細胞群體，例如干細胞?？梢詫碜圆煌瑫r間點的灌注流出液進行合并。在一個優(yōu)選的實施方案中，胎盤細胞是在娩出后在約8小時和約18小時之間一次或多次收集的。與不用所述溶液灌注或不另外處理以獲得胎盤細胞(例如通過組織破壞，例如酶促消化)的哺乳動物胎盤獲得的胎盤細胞數(shù)量相比，灌注優(yōu)選導致收集到明顯更多的胎盤細胞。在本文中，“明顯更多的”是指至少多10%。與例如從胎盤或其部分在其中培養(yǎng)的培養(yǎng)基中分離的胎盤細胞數(shù)量相比，灌注得到明顯更多的胎盤細胞。通過用包含一種或多種蛋白酶或其它破壞組織的酶的溶液進行灌注，可從胎盤中分離出胎盤細胞。在一個具體的實施方案中，胎盤或其部分(例如羊膜的膜、羊膜和絨毛膜、胎盤小葉或子葉、臍帶或上述任何部分的組合)置于25-37° C，并與一種或多種破壞組織的酶一起在200mL的培養(yǎng)基中孵育30分鐘。從灌注流出液中收集細胞，置于4° C，并用冷的包含5mM EDTA、2mM二硫蘇糖醇和2mM β -巰基乙醇的抑制劑混合物洗滌。在幾分鐘后，胎盤細胞用冷的(例如4° C)干細胞收集組合物洗滌。4. 3. 5胎盤細胞的分離、分選和表征分離的胎盤細胞，例如在以上第4. 2. 2節(jié)中描述的細胞，無論是通過灌注還是物理破壞(例如通過酶促消化)獲得的，最初都可以通過Ficoll梯度離心從其它細胞中純化出來(即分離出來)。這樣的離心可以遵循離心速度等的任何標準方案。在一個實施方案中，例如，通過在室溫下，以5000x g離心15分鐘，從灌注流出液中回收自胎盤收集的細胞，離心可使細胞與例如污染碎片和血小板分離開。在另一個實施方案中，胎盤灌注流出液被濃縮至約200ml，在Ficoll上輕輕分層，并在22° C以約IlOOx g離心20分鐘，然后收集低密度界面層用于進一步加工處理?？蓪⒓毎恋砦镏匦聭腋∮谛迈r的干細胞收集組合物或適合于細胞維持(例如干細胞維持)的培養(yǎng)基(例如含有2U/ml肝素和2mMEDTA的MDM無血清培養(yǎng)基(GibcoBRL, NY))中?？梢岳?Lymphoprep (Nycomed Pharma, Oslo, Norway),按照生產(chǎn)商推薦的程序，分離出總的單核細胞級分。使用例如O. 05%胰蛋白酶與O. 2%EDTA(Sigma, St. Louis MO)的溶液，通過差別胰蛋白酶消化，可以例如進一步或初步分離通過灌注或消化獲得的胎盤細胞。差別胰蛋白酶消化是可行的，因為分離的胎盤細胞，其是組織培養(yǎng)塑料器具貼壁的，通常在約五分鐘以內(nèi)從塑料表面脫落，而其它的貼壁群體通常需要超過20-30分鐘孵育。脫落的胎盤細胞可以在胰蛋白酶消化和胰蛋白酶中和(使用例如胰蛋白酶中和溶液(TNS，Cambrex))后收獲。在貼壁細胞分離的一個實施方案中，將例如約5-lOxlO6個細胞的等分試樣置于幾個T-75瓶、優(yōu)選纖連蛋白包被的T75瓶的每一個中。在這樣一個實施方案中，該細胞可以用市售的間充質(zhì)干細胞生長培養(yǎng)基(MSCGM) (Cambrex)進行培養(yǎng)，并置于組織培養(yǎng)箱(37° C，5%C02)中。10-15天后，用PBS洗滌來除去瓶中的非貼壁細胞。然后將PBS更換為MSCGM。優(yōu)選每天檢查各瓶中各種貼壁細胞類型的存在情況和特別是成纖維細胞樣細胞簇的鑒定和擴充情況。從哺乳動物胎盤中收集的細胞數(shù)量和類型可以用下述方法進行監(jiān)測例如，通過利用標準細胞檢測技術，例如流式細胞術、細胞分選術、免疫細胞化學(例如用組織特異性或細胞標記特異性抗體染色)熒光激活細胞分選術(FACS)、磁活化的細胞分選術(MACS)來測量形態(tài)和細胞表面標記的變化，通過使用光學或共聚焦顯微鏡術來檢查細胞的形態(tài)，和/或通過使用本領域眾所周知的技術(例如PCR和基因表達概況分析)來測量基因表達的變化。這些技術也可用于鑒定對一種或多種特定標記呈陽性的細胞。例如，使用抗CD34的抗體，人們可以使用上述技術來確定細胞是否包含可檢測量的CD34 ;如果有的話，則這種細胞就是⑶34+。同樣，如果細胞產(chǎn)生足夠的OCT-4 RNA可被RT-PCR檢測，或者明顯比成體細胞更多的OCT-4 RNA,則這種細胞就是0CT-4+?？辜毎砻鏄擞?例如⑶標記，例如⑶34)的抗體和干細胞特異性基因(例如0CT-4)的序列是本領域眾所周知的。胎盤細胞、特別是已通過Ficoll分離、差別粘附或二者的組合分離的細胞，可以使用熒光激活細胞分選儀(FACS)進行分選。熒光激活細胞分選術(FACS)是基于顆粒的突光特性來分離顆粒(包括細胞)的眾所周知的方法(Kamarch, 1987，MethodsEnzymol, 151:150-165)。個體顆粒中熒光部分的激光激發(fā)導致產(chǎn)生小電荷，允許來自混合物的陽性和陰性顆粒的電磁分離。在一個實施方案中，細胞表面標記特異性抗體或配體用不同的熒光標記進行標記。細胞通過細胞分選儀進行處理，允許細胞基于其結(jié)合所用抗體的能力進行分離。經(jīng)FACS分選的顆粒可以直接沉積在96孔板或384孔板的各孔中以促進分離和克隆。 在一個分選方案中，來自胎盤的細胞，例如H)ACs，可基于標記⑶34、⑶38、⑶44、⑶45、⑶73、⑶105、0CT-4和/或HLA-G中的一種或多種的表達進行分選。這可以結(jié)合基于此類細胞在培養(yǎng)物中的粘附特性選擇它們的程序來完成。例如，組織培養(yǎng)塑料器具粘附選擇可以在基于標記表達進行分選之前或之后完成。在一個實施方案中，例如，細胞首先基于其表達⑶34進行分選KD34_細胞留下，而另外還是⑶200+和HLA_G_的⑶34_細胞與所有的其它CD34_細胞分離開。在另一個實施方案中，來自胎盤的細胞基于其表達標記CD200和/或HLA-G進行分選；例如分離出展示⑶200和缺乏HLA-G的細胞供進一步使用。表達例如⑶200和/或缺乏例如HLA-G的細胞可以在一個具體的實施方案中基于其表達⑶73和/或⑶105、或由抗體SH2、SH3或SH4識別的表位、或缺乏表達⑶34、⑶38或⑶45進行進一步分選。例如，在另一個實施方案中，胎盤細胞通過表達或缺乏⑶200、HLA-G,⑶73、⑶105、⑶34、⑶38和⑶45進行分選，并從其它胎盤細胞中分離出是⑶200+、HLA-G'⑶73+、⑶105+、⑶34'⑶38—和⑶45—的胎盤細胞供進一步使用。在分選的胎盤細胞的任何上述實施方案的多個具體實施方案中，在分選之后剩下的細胞群體中細胞的至少50%、60%、70%、80%、90%或95%是所述分離的胎盤細胞。胎盤細胞可以通過在以上第4. 2. 2節(jié)中描述的任何標記的一種或多種進行分選。在一個具體的實施方案中，例如，(I)附著在上組織培養(yǎng)塑料器具上和(2)是⑶10+、⑶34_和^105+的胎盤細胞從其它胎盤細胞中分選(即分離)出來。在另一個具體的實施方案中，(I)附著在上組織培養(yǎng)塑料器具和(2)是⑶10+、⑶34—、⑶105+和⑶200+的其它胎盤細胞從其它胎盤細胞中分選(即分離)出來。在另一個具體的實施方案中，(I)附著在上組織培養(yǎng)塑料器具和(2)是CD10+、CD34-、CD45-、CD90+、CD105+和CD200+的胎盤細胞從其它胎盤細胞中分選(即分離)出來。關于胎盤細胞的基于核苷酸序列的檢測，本文所列標記的序列是很容易在公共數(shù)據(jù)庫(例如GenBank或EMBL)中獲取的。關于胎盤細胞(例如胎盤干細胞或胎盤多能細胞)的抗體介導的檢測和分選，可以使用對特定標記有特異性的任何抗體，并結(jié)合適合于細胞檢測和分選(例如熒光激活細胞分選術)的任何熒光團或其它標記?？固禺愋詷擞浀目贵w/熒光團組合包括但不限于異硫氰酸熒光素(FITC)綴合的單克隆抗體，其針對HLA-G的(可得自 Serotec, Raleigh, North Carolina)、CDlO (可得自 BD 免疫 cytometry Systems, SanJose, California)、CD44(可得自 BD Biosciences Pharmingen, San Jose, California)和 CD105(可得自 R&D Systems Inc. , Minneapolis, Minnesota);藻紅蛋白(PE)綴合的單克隆抗體，其針對 CD44、CD 200、CD117 和 CD13(BD Biosciences Pharmingen);藻紅蛋白-Cy7(PE Cy7)綴合的單克隆抗體，其針對 CD33 和 CD10(BD BiosciencesPharmingen)；別藻藍蛋白(APC)綴合的鏈霉親和素和單克隆抗體，其針對⑶38 (BD BiosciencesPharmingen);和生物素化⑶90 (BDBiosciences Pharmingen)?？墒褂玫钠渌贵w包括但不限于 CD133-APC(Miltenyi)、KDR-生物素(CD309, Abeam)、細胞角蛋白 K-Fitc (Sigma 或Dako)、HLA ABC-Fitc (BD)、HLA DR, DQ, DP-PE (BD)、β -2-微球蛋白-PE (BD)、CD80-PE (BD)和CD86-APC(BD)?？墒褂玫钠渌贵w/標記組合包括但不限于CD45_PerCP (peridin葉綠素蛋白)；CD44-PE ;CD19-PE ;CD10-F(熒光素)；HLA-G_F和 7-氨基-放線菌素-D (7-AAD)；HLA-ABC-F ;等等。該一覽表并不是窮舉的，來自其它供應商的其它抗體也是市售的。使用例如針對⑶117或⑶133的藻紅蛋白_Cy5 (PE Cy5)綴合的鏈霉親和素和生物素綴合的單克隆抗體，對本文提供的分離的胎盤細胞可以測定其CD117或CD133 ;然而，使用該系統(tǒng)，所述細胞分別對CD117或CD133可能似乎呈陽性，這是因為相對高的背景。所述分離的胎盤細胞可以用抗單個標記的抗體進行標記并進行檢測和/分選。胎盤細胞也可同時用抗不同標記的多個抗體進行標記。在另一個實施方案中，可用磁珠分離細胞。使用磁激活細胞分選(MACS)技術，SP一種基于顆粒結(jié)合磁珠(直徑O. 5-100 μ m)的能力分離顆粒的方法，對細胞進行分選?？梢詫Υ判晕⑶蜻M行各式各樣的有用的修飾，包括以共價鍵添加特異性識別特定細胞表面分子或半抗原的抗體。然后將磁珠與細胞混合以允許結(jié)合。然后使細胞通過磁場以分離出具有特異性細胞表面標記的細胞。在一個實施方案中，這些細胞可以分離后與偶聯(lián)有抗另外細胞表面標記的磁珠重新混合。然后使細胞再次通過磁場，從而分離出結(jié)合有兩種抗體的細胞。然后，這樣的細胞稀釋到獨立的培養(yǎng)皿(例如微量滴定培養(yǎng)皿)中供克隆分離用。分離的胎盤細胞也可以基于細胞形態(tài)和生長特征進行表征和/或分選。例如，分離的胎盤細胞可以表征為在培養(yǎng)物中具有例如成纖維細胞樣外觀和/或基于該外觀進行選擇。分離的胎盤細胞也可以表征為具有形成胚胎樣小體的能力和/或基于該能力進行選擇。在一個實施方案中，例如，將形狀為成纖維細胞樣、表達CD73和CD105并在培養(yǎng)物中產(chǎn)生一個或多個胚胎樣小體的胎盤細胞從其它胎盤細胞中分離出來。在另一個實施方案中，將在培養(yǎng)物中產(chǎn)生一個或多個胚胎樣小體的0CT-4+胎盤細胞從其它胎盤細胞中分離出來。在另一個實施方案中，分離的胎盤細胞可通過集落形成單位測定來鑒定和表征。集落形成單位測定是本領域公知的，例如MESENCULT 培養(yǎng)基(Stem Cell Technologies, Inc.,VancouverBritish Columbia)。使用本領域已知的標準技術，例如錐蟲藍排除法測定法、二乙酸熒光素攝取測定法、碘化丙錠攝取測定法(以評價活力)和胸苷攝取測定法、MTT (溴化3-(4，5- 二甲基噻唑-2-基)-2，5_ 二苯基四唑鎗)細胞增殖測定法(以評價增殖)，可評價分離的胎盤細胞的活力、增殖潛力和壽命。壽命可以通過本領域眾所周知的方法來確定，例如通過測定在延長的培養(yǎng)物中的最大群體倍增數(shù)。
使用本領域已知的其它技術，例如所需細胞的選擇性生長(正選擇)、不需要細胞的選擇性破壞(負選擇)；基于混合群體中差別細胞凝集能力例如用大豆凝集素進行分離；凍融法；過濾；常規(guī)和區(qū)帶離心；離心淘析法(逆流離心)；單位重力分離；逆流分布法；電泳；等等，分離的胎盤細胞，例如在以上第4. 2. 2節(jié)中描述的分離的胎盤細胞，也可以從其它胎盤細胞中分離出來。4. 4分離的胎盤細胞的培養(yǎng)4. 4. I 培養(yǎng)某分離的胎盤細胞、或分離的胎盤細胞群體、或從胎盤細胞長出的細胞或胎盤組織，都可以用于啟動或接種細胞培養(yǎng)物。一般將細胞轉(zhuǎn)移到或不用或用胞外基質(zhì)或配體例如層粘連蛋白、膠原蛋白(例如天然的或變性的)、明膠、纖連蛋白、鳥氨酸、玻連蛋白和胞外膜蛋白(例如MATRiGEL (BD Discovery Labware, Bedford, Mass.))包被的無菌組織培
養(yǎng)容器中。 分離的胎盤細胞可以在任何培養(yǎng)基中和在任何條件下進行培養(yǎng)，這些都是被本領域認為對于培養(yǎng)細胞(例如干細胞)是可接受的。優(yōu)選地，培養(yǎng)基包含血清。分離的胎盤細胞可以在諸如以下的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)DMEM-LG(Dulbecco氏改良的必需培養(yǎng)基，低葡萄糖)/MCDB 201 (雞成纖維細胞基礎培養(yǎng)基)，含有ITS (胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒)、LA+BSA (亞油酸-牛血清白蛋白)、地塞米松L-抗壞血酸、PDGF, EGF、IGF-I和青霉素/鏈霉素；DMEM-HG (高葡萄糖)，包含 10% 胎牛血清(FBS) ;DMEM_HG，包含 15%FBS ；IMDM(Iscove 氏改良的Dulbecco氏培養(yǎng)基)，包含10%FBS、10%馬血清和氫化可的松；M199，包含1% 20%FBS、EGF和肝素；a -MEM(最小必需培養(yǎng)基)，包含10%FBS、GLUTAMAX 和慶大霉素；DMEM，包含10%FBS、GLUTAMAX 和慶大霉素，等等?？捎糜谂囵B(yǎng)胎盤細胞的其它培養(yǎng)基包括DMEM (高或低葡萄糖)、Eagle氏基礎培養(yǎng)基、Ham氏FlO培養(yǎng)基(FlO)、Ham氏F-12培養(yǎng)基(F12)、Iscove氏改良的Dulbecco氏培養(yǎng)基、間充質(zhì)干細胞生長培養(yǎng)基(MSCGM)、Liebovitz氏L-15培養(yǎng)基、]\ 1^、01^]\0712、1^]\01640、高級 DMEM(Gibco)、DMEM/MCDB201 (Sigma)和 CELL-GRO FREE。培養(yǎng)基中可以補充一種或多種組分，包括例如血清(例如胎牛血清(FBS)，優(yōu)選約2-15% (v/v);馬的(馬)血清(ES);人血清(HS)) 巰基乙醇(BME)，優(yōu)選約O. 001% (ν/V);一種或多種生長因子，例如血小板衍生生長因子(TOGF)、表皮生長因子(EGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、胰島素樣生長因子-I (IGF-I)、白血病抑制因子(LIF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和紅細胞生成素(EPO);氨基酸，包括L-纈氨酸；和一種或多種抗生素和/或抗真菌劑以控制微生物的污染，例如青霉素G、硫酸鏈霉素、兩性霉素B、慶大霉素和制霉菌素，或者單獨的或它們的組合。分離的胎盤細胞可以在標準組織培養(yǎng)條件下，例如在組織培養(yǎng)皿或多孔板中進行培養(yǎng)。分離的胎盤細胞也可以使用懸滴法進行培養(yǎng)。在該方法中，將分離的胎盤細胞以約IxlO4細胞/mL懸浮于約5mL培養(yǎng)基中，再將一滴或多滴培養(yǎng)基置于組織培養(yǎng)容器(例如IOOmL培養(yǎng)皿)的蓋子里面，懸滴可以是來自例如多道移液器的例如單懸滴或多懸滴。蓋子小心地翻過來并置于培養(yǎng)皿底部的頂部，該培養(yǎng)皿裝有一定體積的液體，例如足以維持培養(yǎng)皿氣氛中的含水量的無菌PBS,并培養(yǎng)干細胞。在一個實施方案中，分離的胎盤細胞是在其作用是維持分離的胎盤細胞中的未分化表型的化合物存在下進行培養(yǎng)。在一個具體的實施方案中，所述化合物是取代的3，4-二氫嘧啶并[4，5-d]嘧啶。在另一個具體的實施方案中，所述化合物是具有下列化學結(jié)構(gòu)的化合物
權利要求
1.治療患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的個體的方法，包括給予所述個體治療有效量的胎盤干細胞或胎盤干細胞條件化培養(yǎng)基，其中所述治療有效量是足以引起所述結(jié)節(jié)病或所述疾病或障礙的一個或多個癥狀的可檢測改善的量。
2.權利要求I的方法，其中所述胎盤干細胞是⑶10+、⑶34—、⑶105+、⑶200+胎盤干細胞。
3.權利要求2的方法，其中所述胎盤干細胞另外還是⑶45_或⑶90+。
4.權利要求2的方法，其中所述胎盤干細胞另外還是⑶38'⑶45'⑶80'⑶86'CD133、HLA-DR, DP, DQ-、SSEA3、SSEA4、CD29+、CD44+、CD73+、CD90+、CD105+、HLA-A, B, C+、PDL1\ ABC-P+或0CT-4+中的一種或多種。
5.權利要求2的方法，其中所述胎盤干細胞另外還是⑶29+、⑶38—、⑶44+、⑶54+、SH3+或SH4+中的一種或多種。
6.權利要求2的方法，其中所述胎盤干細胞另外還是CD44+。
7.權利要求I的方法，其中所述胎盤干細胞表達⑶200但不表達HLA-G，或表達⑶73、CD105和CD200，或表達CD200和0CT-4，或表達CD73和CD105但不表達HLA-G，或表達CD73和CD105并且當包含所述干細胞的胎盤細胞群體是在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時促進在所述群體中形成一個或多個胚胎樣小體，或表達0CT-4并且當包含所述干細胞的胎盤細胞群體是在允許胚胎樣小體形成的條件下培養(yǎng)時促進在所述群體中形成一個或多個胚胎樣小體。
8.權利要求I的方法，其中所述結(jié)節(jié)病是系統(tǒng)性結(jié)節(jié)病。
9.權利要求8的方法，其中所述癥狀是肉芽腫的形成、疲勞、體重減輕、發(fā)熱、酸痛、疼痛、關節(jié)炎、干眼癥、膝關節(jié)腫脹、視力模糊、呼吸短促、咳嗽和皮膚病損中的一種或多種。
10.權利要求I的方法，其中所述結(jié)節(jié)病是皮膚結(jié)節(jié)病。
11.權利要求10的方法，其中所述皮膚結(jié)節(jié)病包括環(huán)形結(jié)節(jié)病、紅皮病型結(jié)節(jié)病、魚鱗癬狀結(jié)節(jié)病、色素沉著不足結(jié)節(jié)病、硬斑病狀結(jié)節(jié)病、粘膜結(jié)節(jié)病、丘疹性結(jié)節(jié)病、瘢痕結(jié)節(jié)病、皮下結(jié)節(jié)病或潰瘍性結(jié)節(jié)病。
12.權利要求11的方法，其中所述癥狀是皮膚病損。
13.權利要求12的方法，其中所述皮膚病損是結(jié)節(jié)性紅斑、錢幣狀濕疹、多形性紅斑、皮膚鈣質(zhì)沉著癥和瘙癢癥、凍瘡樣狼瘡、皮膚斑、斑丘疹、皮膚中更深部的結(jié)節(jié)性病損或舊疤痕的浸潤中的一種或多種。
14.權利要求I的方法，其中所述結(jié)節(jié)病是Uifgren氏綜合征。
15.權利要求14的方法，其中所述癥狀是結(jié)節(jié)性紅斑、雙側(cè)肺門淋巴結(jié)腫大、關節(jié)炎、關節(jié)疼痛或發(fā)熱中的一種或多種。
16.權利要求I的方法，其中所述結(jié)節(jié)病是神經(jīng)結(jié)節(jié)病。
17.權利要求16的方法，其中所述癥狀是神經(jīng)系統(tǒng)中肉芽腫的形成、頭痛、精神混亂、不適或面部麻痹中的一種或多種。
18.權利要求I的方法，其中所述結(jié)節(jié)病是肺結(jié)節(jié)病。
19.權利要求18的方法，其中所述癥狀是咳嗽、呼吸短促、胸痛、胸悶感、聲音撕啞、鼻塞和反復或持久的鼻竇炎中的一種或多種。
20.權利要求I的方法，其中所述結(jié)節(jié)病是心臟結(jié)節(jié)病。
21.權利要求20的方法，其中所述癥狀是胸痛、心悸、充血性心力衰竭、心包炎或乳頭肌功能紊亂、呼吸短促、踝關節(jié)腫脹、不規(guī)則心跳或猝死中的一種或多種。
22.權利要求I的方法，其中所述結(jié)節(jié)病是眼結(jié)節(jié)病。
23.權利要求22的方法，其中所述癥狀是紅眼或淚眼、肉芽腫性眼色素層炎、虹膜小結(jié)、視網(wǎng)膜脈絡膜炎、結(jié)膜炎、淚腺受累或突眼中的一種或多種。
24.權利要求1-23中任一項的方法，該方法包括給予所述個體第二種治療劑。
25.權利要求24的方法，其中所述的第二種治療劑是抗炎藥、類固醇藥、免疫抑制化合物或抗生素。
全文摘要
本發(fā)明提供的是使用胎盤細胞，例如本發(fā)明所述的胎盤干細胞和胎盤多能細胞(PDACs)，來治療患有結(jié)節(jié)病或結(jié)節(jié)病相關疾病或障礙的個體的組合物和方法。本發(fā)明還提供的是包含所述細胞或其組合物的試劑盒。
文檔編號A61K35/50GK102933221SQ201180027566
公開日2013年2月13日 申請日期2011年4月6日 優(yōu)先權日2010年4月8日
發(fā)明者詹姆士·愛丁格, 史蒂芬·菲施科夫, 亞歷山大·弗蘭茨基, 弗拉基米爾·揚科維奇, 畢濤·梁, 菲利普·馬丁, 辛西婭·雷, 張小葵 申請人:人類起源公司