1.一種埃博霉素B的發(fā)酵方法,其特征在于,包括以下步驟:
1)固體平板培養(yǎng):菌種涂布于固體平板培養(yǎng)基上,30℃培養(yǎng)6-7天;
2)搖瓶擴(kuò)培:平板接種于搖瓶中,30℃,200rpm培養(yǎng)4-5天;
3)種子罐培養(yǎng):將搖瓶接種于種子罐中,30℃培養(yǎng),轉(zhuǎn)速為200rpm,通氣量為0.5vvm,罐壓為0.04kg/cm2,并流加酸堿調(diào)節(jié)劑使pH維持在7.2,當(dāng)溶氧下降緩慢時(shí),進(jìn)行移種;
4)發(fā)酵罐培養(yǎng):利用壓差法將種子液接入到發(fā)酵罐中,接種量為10%的體積比,30℃,200rpm培養(yǎng),空氣流量為0.5vvm,維持在50%附近;發(fā)酵過(guò)程中加入酸堿調(diào)節(jié)劑維持pH值在7.2,在發(fā)酵48小時(shí)加入大孔樹(shù)脂XAD-16N,發(fā)酵96小時(shí)開(kāi)始測(cè)定效價(jià)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述的埃博霉素B生產(chǎn)菌為纖維堆囊菌ATCC25532。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,種子罐酸堿調(diào)節(jié)劑為氨水。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,發(fā)酵罐酸堿調(diào)節(jié)劑為氨水和丙酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,種子罐和發(fā)酵罐酸堿調(diào)節(jié)劑的配置濃度為20%-30%,121℃滅菌20min使用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,發(fā)酵罐采用流加方式進(jìn)行pH自動(dòng)控制,前期補(bǔ)入氨水,后期補(bǔ)入丙酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,固體平板培養(yǎng)的培養(yǎng)基成份為:葡萄糖0.1%、蛋白胨0.2%、硫酸鎂0.1%、氯化鈣0.2%、磷酸氫二鉀0.2%、酵母提取物0.3%;調(diào)節(jié)pH值至7.2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,搖瓶擴(kuò)培和種子罐培養(yǎng)的培養(yǎng)基的組份為:葡萄糖0.1%、可溶性淀粉2%、硫酸鎂0.1%、氯化鈣0.2%、磷酸氫二鉀0.2%、酵母提取物0.3%;調(diào)節(jié)pH值至7.2。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,發(fā)酵罐培養(yǎng)的培養(yǎng)基組份為:可溶性淀粉0.3%、硫酸鎂0.2%、氯化鈣0.3%、磷酸氫二鉀0.2%、酵母提取物0.3%,花生粉0.5%。