本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一類結(jié)構(gòu)新穎的D-氨基酸氧化酶抑制劑3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物及其衍生物，該類化合物的制備方法以及針對(duì)D-氨基酸氧化酶的體外抑制活性。

背景技術(shù)：

D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase：DAAO，EC1.4.3.3)是一種以黃素腺嘌呤(FAD)為輔基的黃素蛋白酶，機(jī)體內(nèi)代謝D-氨基酸生成相應(yīng)的酮酸、氨和過(guò)氧化氫。D-絲氨酸可以激活中樞神經(jīng)系統(tǒng)中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體的甘氨酸位點(diǎn)，使后者的鈣離子通道開(kāi)放，實(shí)現(xiàn)神經(jīng)興奮的傳遞[H Wolosker,et al,Proc Natl Acad Sci,1999,96,13409-13414；H Wolosker,et al,Proc Natl Acad Sci,1999,96,721-725]，同時(shí)，D-絲氨酸可以在腎臟中被DAAO代謝。因此，抑制DAAO可使D-絲氨酸選擇性地轉(zhuǎn)運(yùn)到腦部，上調(diào)中樞內(nèi)的D-絲氨酸水平，興奮NMDA受體，進(jìn)而起到調(diào)節(jié)興奮傳導(dǎo)的功能。臨床前研究已經(jīng)證實(shí)，D-絲氨酸或DAAO抑制劑與傳統(tǒng)的多巴胺受體(DA受體)拮抗劑聯(lián)合給藥能夠顯著提高后者的療效，明顯改善精神分裂患者陽(yáng)性、陰性及認(rèn)知癥狀[T Adage,et al,Eur Neuropsychopharmacol,2008,18,200-214]，同時(shí)使用DAAO抑制劑還可以減緩D-絲氨酸引起的腎毒性和神經(jīng)毒性。DAAO與疼痛也有一定的關(guān)系。2007年Yoshikawa等人報(bào)道了D-絲氨酸增強(qiáng)了嗎啡的鎮(zhèn)痛作用[M Yoshikawa,et al,Eur J Pharmacol,2007,565,1-3,89-97]。此后數(shù)年，國(guó)內(nèi)外多家研究單位相繼報(bào)道了DAAO與疼痛關(guān)聯(lián)的證據(jù)[LS Miraucourt,et al,Pain,2011,152,1340-1348；K Wake,Neurosci Lett,2001,5,25-28；B Ying,Biochem Biophys Res Commun,2006,340,1264-1272；R Sethuraman,et al,Mini-Rev Med Chem,2009,9,7,813-819]。

本發(fā)明所示化合物3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮是結(jié)構(gòu)全新的DAAO抑制劑，其合成路線易于操作，重現(xiàn)性好，產(chǎn)率高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目在于提供一種新型D-氨基酸氧化酶抑制劑及其制備方法和用途。

本發(fā)明的第一方面提供了一種如式A所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，

其中：

X＝C，或X與R₄共同構(gòu)成N；

當(dāng)X為C時(shí)，

R₁、R₂、R₃和R₄各自獨(dú)立地選自下組：H、鹵素、三氟甲基、氰基、硝基、氨基、C1～C6脂肪烴基、C1～C6脂肪烴氧基、C1～C6脂肪烴基酰基、(雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴基、(雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴氧基、(雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴基酰基；

R₅為H、C1～C8脂肪烴基、(雜)芳基取代的C1～C8烴基、C1～C8脂肪烴基?；?、(雜)芳基取代的C1～C8脂肪烴基?；?；

當(dāng)X與R₄共同構(gòu)成N時(shí)，

R₁、R₂和R₃為H；

R₅為H、C1～C8脂肪烴基、(雜)芳基取代的C1～C8烴基。

本發(fā)明的第二方面提供了一種式A化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，

其中：

X＝C，或X與R₄共同構(gòu)成N；

當(dāng)X為C時(shí)，

R₁、R₂、R₃和R₄各自獨(dú)立地選自下組：H、鹵素、三氟甲基、氰基、硝基、氨基、C1～C6脂肪烴基、C1～C6脂肪烴氧基、C1～C6脂肪烴基?；?雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴基、(雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴氧基、(雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴基?；?/p>

R₅為H、C1～C8脂肪烴基、(雜)芳基取代的C1～C8烴基、C1～C8脂肪烴基?；?雜)芳基取代的C1～C8脂肪烴基?；?/p>

當(dāng)X與R₄共同構(gòu)成N時(shí)，

R₁、R₂和R₃為H；

R₅為H、C1～C8脂肪烴基、(雜)芳基取代的C1～C8烴基；

所述式A化合物用于選自下組的用途：

(i)用于制備DAAO酶活抑制劑；

(ii)用于制備鎮(zhèn)痛藥物組合物；

(iii)用于制備預(yù)防阿片類藥物鎮(zhèn)痛耐受作用的藥物組合物；

(iv)用于制備逆轉(zhuǎn)阿片類藥物鎮(zhèn)痛耐受作用的藥物組合物；

(v)用于制備調(diào)節(jié)中樞體內(nèi)D-絲氨酸水平的藥物組合物；

(vi)用于制備治療或緩解動(dòng)物的精神病癥狀的藥物組合物；或

(vii)用于體外非治療性抑制DAAO酶活性。

在另一優(yōu)選例中，所述式A化合物抑制DAAO酶活性的IC₅₀≤300μM，較佳地IC₅₀≤46.27μM，更佳地IC₅₀≤20.58μM，最佳地IC₅₀≤11.56μM。

在另一優(yōu)選例中，所述DAAO酶選自下組：人DAAO酶、豬DAAO酶、大鼠DAAO酶，或其組合。

在另一優(yōu)選例中，所述阿片類藥物為嗎啡。

本發(fā)明的第三方面提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物包括(a)藥物有效量的式A化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥作為活性成分以及(b)藥學(xué)上可接受的載體。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還包括阿片類藥物和/或D-絲氨酸。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中式A化合物的重量百分比為0.1～99％，較佳地為10％～80％，更佳地為30％～75％。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物是口服制劑或注射劑。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還包括阿片類藥物和/或D-絲氨酸。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中式A化合物與阿片類藥物的質(zhì)量比為1：0.001-1000，較佳地為1：0.01-100，更佳地為1：0.1-10。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中式A化合物與D-絲氨酸的摩爾比為1：0.1-100000，較佳地為1:1-10000，最佳地為1:1-1000。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物用于選自下組的用途：

(i)抑制DAAO酶活性；

(ii)緩解生物體疼痛；

(iii)用于預(yù)防阿片類藥物鎮(zhèn)痛耐受作用；

(iv)用于逆轉(zhuǎn)阿片類藥物鎮(zhèn)痛耐受作用；

(v)用于調(diào)節(jié)中樞體內(nèi)D-絲氨酸水平；

(vi)用于治療或緩解動(dòng)物的精神病癥狀。

在另一優(yōu)選例中，所述的疼痛是福爾馬林誘導(dǎo)的疼痛或神經(jīng)源性疼痛。

本發(fā)明的第四方面提供了一種制備如本發(fā)明第三方面所述的藥物組合物的方法，所述的藥物組合物的制備方法包括步驟：

將藥物有效量的式A化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥與藥學(xué)上可接受的載體混合，形成藥物組合物。

在另一優(yōu)選例中，所述式A化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽占藥物組合物的重量百分比為0.1～99％。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥學(xué)上可接受的載體選自下組：鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、二甲基亞砜及其組合。

本發(fā)明的第五方面提供了一種體外非治療性抑制DAAO酶活性的方法，所述方法包括：對(duì)抑制對(duì)象施用抑制有效量的如本發(fā)明第一方面所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，和/或本發(fā)明第三方面所述的藥物組合物。

在另一優(yōu)選例中，所述方法對(duì)DAAO酶活性的最大抑制率為100％。

在另一優(yōu)選例中，所述抑制對(duì)象是含DAAO酶的溶液或細(xì)胞。

本發(fā)明的第六方面提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的式A化合物的制備方法，所述方法(a)包括步驟：

(1)在還原試劑存在下，式III化合物的硝基被還原成氨基，從而得到式IV化合物；和

(2)在堿性條件下，式IV化合物與甲酰化試劑反應(yīng)，從而得到式V化合物；

或所述方法(b)包括步驟：

(i)在堿存在下，式X化合物與胺化試劑反應(yīng)，從而得到式XI化合物；

(ii)在酸存在下，式XI化合物氨基脫去保護(hù)基，得到式IV化合物；

(iii)在堿性條件下，式IV化合物與甲?；噭┓磻?yīng)，從而得到式V化合物；

或所述方法(c)包括步驟：

(一)在堿存在下，式III化合物的芐胺與碳酰氯發(fā)生縮合反應(yīng)，從而得到式XII化合物；

(二)在還原試劑存在下，式XII化合物的硝基被還原成氨基，從而得到式V化合物；

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄和X的定義如本發(fā)明第一方面中所述；G為甲基，芐基，或苯甲?；籝為叔丁基，或芐基。

在另一優(yōu)選例中，所述的還原試劑選自下組：鈀碳/氫氣、氫氧化鈀碳/氫氣、活潑金屬/酸或酸性溶液、保險(xiǎn)粉、三氯硅烷、或其組合。

在另一優(yōu)選例中，所述的甲?；噭┻x自下組：三光氣、氯甲酸酯、碳酸二酯、羰基二咪唑、或其組合。

所述的胺化試劑選自下組：甲氧基胺、芐氧基胺、O-苯甲?；u胺、或其組合。

在另一優(yōu)選例中，所述的堿包括無(wú)機(jī)堿和有機(jī)胺類化合物。

在另一優(yōu)選例中，所述的堿選自下組：三乙胺、吡啶、N,N-二甲基吡啶、或其組合。

在另一優(yōu)選例中，所述的酸包括無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸。

在另一優(yōu)選例中，所述碳酰氯選自下組：叔丁氧酰氯、芐氧酰氯、或其組合。

在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括步驟：

在催化氫化條件、水解條件或路易斯酸存在下，式V化合物脫去保護(hù)基，從而得到式VI化合物；和

在堿或縮合劑存在下，式VI化合物進(jìn)一步與鹵代烴或?；噭┳饔蒙墒絍II化合物；

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、和X的定義如本發(fā)明第一方面中所述；G為甲基，芐基。

在另一優(yōu)選例中，所述的催化氫化條件包括鈀碳/氫氣、或氫氧化鈀碳/氫氣。

在另一優(yōu)選例中，所述的水解條件包括碳酸鹽水溶液條件、氫氧化物水溶液條件、或醇/水體系條件。

在另一優(yōu)選例中，所述的路易斯酸選自下組：無(wú)水三氯化鋁、四氯化錫、四氯化鈦、或其組合。

在另一優(yōu)選例中，所述的堿包括氫氧化物和碳酸鹽。

在另一優(yōu)選例中，所述的縮合劑選自下組：DCC、EDCI、HBTU、或其組合。

應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明人經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期而深入地研究發(fā)現(xiàn)，3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮及其衍生物可用作DAAO抑制劑，可以用作以D-氨基酸氧化酶為靶標(biāo)的疾病治療藥物?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，發(fā)明人完成了本發(fā)明。

術(shù)語(yǔ)

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物”指3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮或氮雜3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮的芳環(huán)上的氫原子被取代基取代得到的化合物。在本發(fā)明中，一類優(yōu)選的3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物具有如式A所示的結(jié)構(gòu)：

其中：

X＝C，或X與R₄共同構(gòu)成N；

當(dāng)X為C時(shí)，

R₁、R₂、R₃、R₄各自獨(dú)立地選自下組：H、鹵素、三氟甲基、氰基、硝基、氨基、C1～C6脂肪烴基、C1～C6脂肪烴氧基、C1～C6脂肪烴基?；?雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴基、(雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴氧基、(雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴基?；?；

R₅為H、C1～C8脂肪烴基、(雜)芳基取代的C1～C8烴基、C1～C8脂肪烴基酰基、(雜)芳基取代的C1～C8脂肪烴基?；?；

當(dāng)X與R₄共同構(gòu)成N時(shí)，

R₁、R₂、R₃為H。

如本文所用，

術(shù)語(yǔ)“鹵素”指F、Cl、Br和I。

術(shù)語(yǔ)“C1～C6脂肪烴基”和“C1～C8脂肪烴基”分別指具有1～6和1～8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、烯丙基等類似基團(tuán)。

術(shù)語(yǔ)“C1～C6脂肪烴氧基”指具有1～6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、烯丙氧基等類似基團(tuán)。

術(shù)語(yǔ)“C1～C6脂肪烴基?；焙汀癈1～C8脂肪烴基?；狈謩e指具有“-CO-(C1～C6烴基)”和“-CO-(C1～C8烴基)”結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，例如甲基?；?、乙基酰基、丙基?；?、異丙基?；⒈；阮愃苹鶊F(tuán)。

術(shù)語(yǔ)“(雜)芳基”指苯基、吡啶基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、噻唑基。

術(shù)語(yǔ)“胺化試劑”指甲氧基胺、芐氧基胺、O-苯甲?；u胺等。

術(shù)語(yǔ)“甲?；噭敝溉鈿狻⒙燃姿狨?、碳酸二酯、羰基二咪唑等。

DAAO抑制劑

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“DAAO抑制劑”指能夠用于抑制D-氨基酸氧化酶的酶活性的化合物或組合物。

D-氨基酸氧化酶的酶活性與多類疾病具有關(guān)聯(lián)，如福爾馬林誘導(dǎo)產(chǎn)生的疼痛、精神分裂癥等一系列與中樞神經(jīng)相關(guān)的疾病。對(duì)患有上述疾病的對(duì)象施用DAAO抑制劑，能夠有效地治療或改善其疾病。

其中，上述的“治療”指指疾病或病癥或其至少一種可辨的癥狀的減輕、預(yù)防或逆轉(zhuǎn)，與所治療疾病或病癥相關(guān)的至少一個(gè)可測(cè)量身體參數(shù)的改善、預(yù)防或逆轉(zhuǎn)，抑制或減緩疾病或病癥的進(jìn)展，或延遲疾病或病癥的發(fā)作。

上述的“改善”某一特定疾病的癥狀是指任何減輕，無(wú)論是永久的，臨時(shí)的，長(zhǎng)期的，短暫的疾病或病癥或其至少一種可辨的癥狀的減輕、預(yù)防或逆轉(zhuǎn)。

式A化合物

本發(fā)明提供了一種3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類衍生物，具體地，本發(fā)明提供了一種如式A所示的化合物：

其中：

X＝C，或X與R₄共同構(gòu)成N；

當(dāng)X為C時(shí)，

R₁、R₂、R₃、R₄各自獨(dú)立地選自下組：H、鹵素、三氟甲基、氰基、硝基、氨基、C1～C6脂肪烴基、C1～C6脂肪烴氧基、C1～C6脂肪烴基?；?、(雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴基、(雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴氧基、(雜)芳基取代的C1～C4脂肪烴基酰基；

R₅為H、C1～C8脂肪烴基、(雜)芳基取代的C1～C8烴基、C1～C8脂肪烴基?；?雜)芳基取代的C1～C8脂肪烴基?；?；

當(dāng)X與R₄共同構(gòu)成N時(shí)，R₁、R₂、R₃為H。

本發(fā)明部分優(yōu)選的式A化合物如下表所示。

式A化合物的制法

本發(fā)明還提供了所述式A化合物的制法，所述方法含有或部分含有以下步驟：

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、X的定義如本發(fā)明第一方面中所述。

(a)在鹵化試劑存在下加熱或加入自由基引發(fā)劑，式I化合物芐位發(fā)生自由基取代反應(yīng)，得到式II化合物；

所述鹵化試劑包括N-氯代丁二酰亞胺、N-溴代丁二酰亞胺、N-碘代丁二酰亞胺；自由基引發(fā)劑包括過(guò)氧化苯甲酰、偶氮二異丁腈。

(b)在堿存在下，式II化合物與胺化試劑反應(yīng)，得到式III化合物；

所述的胺化試劑包括甲氧基胺、芐氧基胺、O-苯甲?；u胺；所述的堿包括無(wú)機(jī)堿(氫氧化物、碳酸鹽)和有機(jī)胺類化合物。

(c)在還原試劑存在下，式III化合物的硝基被還原成氨基，得到式IV化合物；

所述的還原試劑包括催化氫化試劑(鈀碳、氫氧化鈀碳等)、氯化亞錫、活潑金屬(鋅、鐵、錫等)與酸或酸性溶液、保險(xiǎn)粉、三氯硅烷的組合。

(d)在堿性條件下，式IV化合物與甲?；噭┓磻?yīng)，得到式V化合物；

所述的甲酰化試劑包括三光氣、氯甲酸酯、碳酸二酯、羰基二咪唑；所述的堿包括三乙胺、吡啶、N,N-二甲基吡啶等。

(e)在催化氫化條件、水解條件或路易斯酸存在下，式V化合物脫去保護(hù)基，得到式VI化合物；

所述催化氫化條件包括鈀碳/氫氣、氫氧化鈀碳/氫氣；所述水解條件包括碳酸鹽、氫氧化物的水溶液或醇/水體系；所述路易斯酸包括無(wú)水三氯化鋁、四氯化錫、四氯化鈦等。

(f)在堿或縮合劑存在下，式VI化合物進(jìn)一步與鹵代烴或?；噭┳饔蒙墒絍II化合物。

所述堿包括氫氧化物和碳酸鹽；所述縮合劑包括DCC、EDCI、HBTU等；

所述鹵代烴包括本發(fā)明第一方面中所述各種烴基的氯或溴或碘代物；所述酰化試劑包括本發(fā)明第一方面中所述各種?；鶎?duì)應(yīng)的羧酸或酰氯。

在另一優(yōu)選例中，式A化合物還包括另一制法，所述方法含有或部分含有以下步驟：

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、X的定義如本發(fā)明第一方面中所述。

(g)在堿存在下，式VIII化合物的伯胺上保護(hù)基，得到式IX化合物；所述保護(hù)基包括Boc、乙?；?；所述的堿包括三乙胺、吡啶、N,N-二甲基吡啶等。

(h)在鹵化試劑存在下加熱或加入自由基引發(fā)劑，式IX化合物芐位發(fā)生自由基取代反應(yīng)，得到式X化合物；

所述鹵化試劑包括N-氯代丁二酰亞胺、N-溴代丁二酰亞胺、N-碘代丁二酰亞胺；自由基引發(fā)劑包括過(guò)氧化苯甲酰、偶氮二異丁腈。

(i)在堿存在下，式X化合物與胺化試劑反應(yīng)，得到式XI化合物；

所述的胺化試劑包括甲氧基胺、芐氧基胺、O-苯甲?；u胺；所述的堿包括無(wú)機(jī)堿(氫氧化物、碳酸鹽)和有機(jī)胺類化合物。

(j)在酸存在下，式XI化合物脫去保護(hù)基，得到式IV化合物；

所述的酸包括鹽酸等無(wú)機(jī)酸和三氟乙酸等有機(jī)酸。

(d)、(e)、(f)如上文所述。

在另一優(yōu)選例中，式A化合物還包括另一制法，所述方法含有或部分含有以下步驟：

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、X的定義如本發(fā)明第一方面中所述。

(k)在堿存在下，式III化合物的芐胺與碳酰氯發(fā)生縮合反應(yīng)，得到式XII化合物；

所述碳酰氯包括叔丁氧酰氯、芐氧酰氯等；所述的堿包括三乙胺、吡啶、N,N-二甲基吡啶等。

(a)、(b)、(c)、(e)、(f)如上文所述。

式A化合物(3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物)的用途

本發(fā)明還提供了如式A所示的3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物對(duì)D-氨基酸氧化酶的體外抑制活性，表明該類化合物可以作為以D-氨基酸氧化酶為靶標(biāo)的疾病治療藥物。

本發(fā)明的式A化合物可以用于包括(但并不限于)以下用途：

(i)用于制備DAAO酶抑制劑；

(ii)用于制備鎮(zhèn)痛藥物組合物；

(iii)用于制備預(yù)防阿片類藥物鎮(zhèn)痛耐受作用的藥物組合物；

(iv)用于制備逆轉(zhuǎn)阿片類藥物鎮(zhèn)痛耐受作用的藥物組合物；

(v)用于制備調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)D-絲氨酸水平的藥物組合物；

(vi)用于制備治療或緩解動(dòng)物的精神病癥狀的藥物組合物；

(vii)用于體外非治療性抑制DAAO酶活性。

式A化合物(3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物)的藥物組合物

本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物包括藥物有效量的式A化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。

具體地，在本發(fā)明所述的藥物組合物中，式A化合物的質(zhì)量百分比沒(méi)有特別的限制，可根據(jù)藥物組合物的用途、用法、施用對(duì)象和劑型而有所區(qū)別，可以由本領(lǐng)域的技術(shù)人員結(jié)合本領(lǐng)域的公知常識(shí)和本發(fā)明的內(nèi)容而決定。在另一優(yōu)選例中，上述式A化合物在所述藥物組合物中的質(zhì)量百分比為0.1～99％，較佳地為10％～80％，更佳地為30％～75％。

通常，可將本發(fā)明的有效部位配制于無(wú)毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的載體介質(zhì)，如其他藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括(但并不限于)：鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、二甲基亞砜及其組合。

配制好的藥物組合物可以通過(guò)常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括(但并不限于)：口服、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、局部給藥、蛛網(wǎng)膜下腔給藥。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。

在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明的藥物組合物可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。本發(fā)明的藥物組合物也可以制成諸如片劑和膠囊之類的口服制劑形式，上述制劑均可通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。

藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無(wú)菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量，例如每天約30毫克/千克體重。

本發(fā)明的藥物組合物可以制成口服和非口服制劑?？诜o藥可制成片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等常用劑型，所用的賦型劑可以為淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羥甲基纖維素等中的一種或幾種。崩解劑可以為馬鈴薯淀粉、羥甲基纖維素等中的一種或幾種。粘合劑可以為阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠、糊精等中的一種或幾種?？诜苿┏鲜鰟┬屯猓€可以制成乳劑、糖漿劑等。

非口服制劑可以制成注射劑，可以與注射用水、生理鹽水、葡萄糖水制成注射劑，也可以在其中加入一定比例的乙醇、丙醇、乙二醇等。

此外，本發(fā)明的藥物組合物還可以與其他組分聯(lián)用，以達(dá)到更佳的治療效果。例如，當(dāng)本發(fā)明的藥物組合物用于調(diào)節(jié)中樞體內(nèi)D-絲氨酸水平時(shí)，所述的藥物組合物還可以包括有效量的D-絲氨酸；當(dāng)本發(fā)明的藥物組合物用于緩解生物體疼痛時(shí)，上述的藥物組合物還包括阿片類藥物。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中式A化合物與阿片類藥物的質(zhì)量比為1：0.001-1000，較佳地為1：0.01-100，更佳地為1：0.1-10。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中式A化合物與D-絲氨酸的摩爾比為1：0.1-100000，較佳地為1:1-10000，最佳地為1:1-1000。

本發(fā)明所述的藥物組合物可以用于DAAO酶活性相關(guān)的病癥，包括(但并不限于)用于選自下組的用途：

(i)抑制DAAO酶活性；

(ii)緩解生物體疼痛；

(iii)用于預(yù)防阿片類藥物鎮(zhèn)痛耐受作用；

(iv)用于逆轉(zhuǎn)阿片類藥物鎮(zhèn)痛耐受作用；

(v)用于調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)D-絲氨酸水平；

(vi)用于治療或緩解動(dòng)物的精神病癥狀。

在另一優(yōu)選例中，所述的疼痛是福爾馬林誘導(dǎo)的疼痛或神經(jīng)源性疼痛。

在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述的3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物用于預(yù)防和/或治療因阿片耐受使得其治療功效降低的病癥，這些病癥能夠通過(guò)抑制D-氨基酸氧化酶達(dá)到預(yù)防和/或治療阿片耐受從而得到預(yù)防和/治療。具體來(lái)說(shuō)，所述病癥可以是疼痛，包括但不限于急性和/或慢性疼痛，尤其是慢性疼痛。

在一個(gè)實(shí)施例中，在施用引起慢性疼痛物質(zhì)和阿片類物質(zhì)之前、同時(shí)或之后施用所述D-氨基酸氧化酶抑制劑。

在另一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)口服或胃腸外途徑施用所述D-氨基酸氧化酶抑制劑，例如包括皮下注射，脊髓施用。

本發(fā)明所述的藥物組合物可以通過(guò)本領(lǐng)域的任何常規(guī)技術(shù)制備，如通過(guò)以下方法制備：

將藥物有效量的式A化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥與藥學(xué)上可接受的載體混合，形成藥物組合物。

本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)

(1)本發(fā)明提供的式A化合物可以作為新型的D-氨基酸氧化酶抑制劑以及以D-氨基酸氧化酶為靶標(biāo)的疾病治療藥物。

(2)本發(fā)明提供了一類結(jié)構(gòu)全新的3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物及其衍生物，且合成路線易于操作，重現(xiàn)性好，產(chǎn)率高。

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。

實(shí)施例1 3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(19)的制備

將2-硝基甲苯(5.0g,36.50mmol)溶于100mL四氯化碳中，加入N-溴代丁二酰亞胺(6.5g,36.50mmol)，加入催化劑量的光引發(fā)劑過(guò)氧化二苯甲酰，升溫到100℃，回流攪拌48h。待反應(yīng)液恢復(fù)到室溫，減壓蒸餾去除溶劑，加50mL冰水，以乙酸乙酯萃取(40mL×3)，萃取液經(jīng)飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚)得2-硝基芐溴(3.5g，44.81％)。

將2-硝基芐溴(3.5g,16.36mmol)溶于30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺(4.96g,49.08mmol)，室溫?cái)嚢?min。將芐氧胺鹽酸鹽(3.9g，24.54mmol)溶于30mL N,N’-二甲基甲酰胺中，逐滴滴入到上述混合物中，滴加結(jié)束后升溫到45℃，并在此溫度下反應(yīng)12h。加50mL冰水，以乙酸乙酯萃取(40mL×3)，萃取液經(jīng)飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1:100)得1-(2-硝基苯)-N-芐氧基-甲胺(3.5g，83.33％)。

將鐵粉(8.8g，135.7mmol)加入到25mL的飽和氯化銨水溶液中，50℃下攪拌10min，將1-(2-硝基苯)-N-芐氧基-甲胺(3.5g，13.57mmol)溶于10mL乙醇中，逐滴滴入到上述反應(yīng)物中，50℃下反應(yīng)1h。反應(yīng)恢復(fù)到室溫，過(guò)濾除去鋅粉及其氧化物，減壓蒸餾去除大部分的乙醇，加30mL水，以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液經(jīng)飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1:15)得1-(2-氨基苯基)-N-芐氧基-甲胺(2.5g，80.65％)。

將三光氣(1.08g，3.65mmol)溶解在4mL四氫呋喃中，冷卻到0℃。將1-(2-氨基苯基)-N-芐氧基-甲胺(2.5g，10.96mmol)溶解在6mL四氫呋喃中，加入三乙胺(0.1g，1.46mmol)，逐滴滴入到上述混合物中，攪拌10min，有白色固體析出。加入10mL冰水淬滅反應(yīng)，靜置，過(guò)濾，濾餅為粗品。粗品用乙酸乙酯/石油醚重結(jié)晶得3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(2.4g，85.71％，白色固體，16)。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:4.46(s,2H),5.01(s,2H),6.77-6.79(m,1H),6.90-6.97(m,2H),7.15-7.17(m,1H),7.35-7.36(m,3H),7.46-7.48(m,2H),8.14(s,1H)ppm.

實(shí)施例2 5-溴-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(20)的制備

操作同實(shí)施例1，以2-溴-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:4.53(s,2H),5.03(s,2H),6.70(d,J＝8Hz,1H),7.01-7.04(m,1H),7.11-7.13(m,1H),7.36(s,3H),7.48(s,2H),8.06(s,1H)ppm.

實(shí)施例3 5-氯-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(21)的制備

操作同實(shí)施例1，以2-氯-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:4.56(s,2H),5.02(s,2H),6.69(d,J＝8Hz,1H),6.935(d,J＝4Hz,1H),7.09(t,J＝8Hz,1H),7.34-7.39(m,3H),7.47-7.49(m,2H)ppm.

實(shí)施例4 5-氟-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(22)的制備

操作同實(shí)施例1，以2-氟-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:4.54(s,2H),5.02(s,2H),6.57-6.66(m,2H),7.10-7.15(m,1H),7.36-7.37(m,3H),7.47-7.49(m,2H),8.52-8.60(m,1H)ppm.

實(shí)施例5 6-氯-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(23)的制備

操作同實(shí)施例1，以3-氯-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:4.39(s,2H),4.98(s,2H),6.685(d,J＝12Hz,1H),6.93(s,1H),7.13(d,J＝8Hz,1H),7.35-7.37(m,3H),7.44-7.46(m,2H),7.86(s,1H)ppm.

實(shí)施例6 7-氯-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(24)的制備

操作同實(shí)施例1，以4-氯-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:4.40(s,2H),5.00(s,2H),6.81(s,2H),6.85-6.90(m,2H),7.35-7.37(m,3H),7.46-7.47(m,2H),8.34(s,1H)ppm.

實(shí)施例7 8-氯-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(25)的制備

操作同實(shí)施例1，以5-氯-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:4.42(s,2H),4.98(s,2H),6.85-6.86(m,2H),7.02-7.21(m,1H),7.34-7.35(m,3H),7.44-7.45(m,2H)ppm.

實(shí)施例8 5-三氟甲基-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(26)的制備

操作同實(shí)施例1，以2-三氟甲基-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:4.56(s,2H),4.99(s,2H),6.94(d,J＝8Hz,1H),7.21-7.23(m,1H),7.26-7.28(m,1H),7.34-7.35(m,3H),7.44-7.46(m,2H),8.21(s,1H)ppm.

實(shí)施例9 5-甲氧基-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(27)的制備

操作同實(shí)施例1，以2-甲氧基-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:3.77(s,3H),4.52(s,2H),4.99(s,2H),6.30-6.44(dd,J＝64,8Hz,2H),7.01-7.12(m,1H),7.32-7.37(m,3H),7.46-7.48(m,2H)ppm.

實(shí)施例10 6-正丙基-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(28)的制備

操作同實(shí)施例1，以3-正丙基-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:0.85(t,J＝8Hz,3H),1.64-1.66(m,2H),2.61-2.63(m,2H),4.53(s,2H),4.99(s,2H),7.07-7.09(m,1H),7.14(s,1H),7.27-7.29(m,1H),7.31-7.35(m,3H),7.43-7.46(m,2H)ppm.

實(shí)施例11 6-丙?；?3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(29)的制備

操作同實(shí)施例1，以3-丙?；?6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:1.18(t,J＝8Hz,3H),3.54(dd,J＝8,14Hz,2H),4.53(s,2H),4.99(s,2H),7.66(s,1H),7.75-7.76(m,1H),7.77-7.78(m,1H),7.31-7.35(m,3H),7.43-7.46(m,2H)ppm.

實(shí)施例12 6-乙氧基-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(30)的制備

操作同實(shí)施例1，以3-乙氧基-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:1.22(t,J＝8Hz,3H),4.22(dd,J＝8,14Hz,2H),4.53(s,2H),4.99(s,2H),6.77-6.79(m,1H),6.99(s,1H),7.57-7.59(m,1H),7.33-7.35(m,3H),7.44-7.48(m,2H)ppm.

實(shí)施例13 6-芐氧基-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(31)的制備

操作同實(shí)施例1，以3-芐氧基-6-硝基甲苯作為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:4.53(s,2H),4.99(s,2H),5.16(s,2H),6.77-6.79(m,1H),6.99(s,1H),7.57-7.59(m,1H),7.35-7.38(m,6H),7.44-7.48(m,4H)ppm.

實(shí)施例14 3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(1)的制備

操作同實(shí)施例1，得到3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(19)，以其為起始原料。

將3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(100mg,0.39mmol)溶于6mL甲醇中，氮?dú)夥障录尤?0％Pd(OH)₂-C(10mg)，反應(yīng)體系以氫氣置換三次，置于室溫下攪拌3小時(shí)。過(guò)濾去除Pd(OH)₂-C，濾液濃縮得3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(55mg,85.14％，白色固體，1)。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:4.47(s,2H),6.73-6.75(m,1H),6.84(t,J＝8Hz,1H),7.10-7.12(m,2H),9.30(s,1H),9.39(s,1H)ppm.

實(shí)施例15 5-溴-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(2)的制備

操作同實(shí)施例1，得到5-溴-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(20)，以其為起始原料。

將5-溴-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(100mg,0.30mmol)溶于6mL無(wú)水二氯甲烷中，冰浴下滴加四氯化鈦，直到反應(yīng)液變成深棕色，冰浴下攪拌20min。加入甲醇淬滅反應(yīng)，濃縮后得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱層析(甲醇：二氯甲烷＝1:30)，得5-溴-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(35mg,48.61％，白色固體，2)。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:4.50(s,2H),6.54(d,J＝8Hz,1H),6.70(t,J＝8Hz,1H),7.13-7.17(m,1H),9.45(s,1H),9.60(s,1H)ppm.

實(shí)施例16 5-氯-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(3)的制備

操作同實(shí)施例15，以5-氯-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(21)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:4.48(s,1H),4.53(s,1H),6.69-6.74(m,1H),6.83-6.97(m,1H),7.10-7.17(m,1H),9.30(s,1H),9.50(s,1H)ppm.

實(shí)施例17 5-氟-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(4)的制備

操作同實(shí)施例15，以5-氟-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(22)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:4.51(s,2H),6.58(d,J＝8Hz,1H),6.71(t,J＝8Hz,1H),7.13-7.17(m,1H),9.46(s,1H),9.61(s,1H)ppm.

實(shí)施例18 6-氯-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(5)的制備

操作同實(shí)施例15，以6-氯-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(23)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:4.46(s,2H),6.73(d,J＝8Hz,1H),7.16-7.17(dd,J＝8,4Hz,1H),7.23(s,1H),9.38(s,1H),9.53(s,1H)ppm.

實(shí)施例19 7-氯-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(6)的制備

操作同實(shí)施例15，以7-氯-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(24)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:4.47(s,2H),6.74-6.78(m,1H),6.86-6.92(m,1H),7.12-7.17(m,1H),9.40(s,1H),9.54(s,1H)ppm.

實(shí)施例20 8-氯-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(7)的制備

操作同實(shí)施例15，以8-氯-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(25)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:4.51(s,2H),6.89(t,J＝8Hz,1H),7.12(d,J＝8Hz,1H),7.25(d,J＝8Hz,1H),8.93(s,1H),9.48(s,1H)ppm.

實(shí)施例21 5-三氟甲基-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(8)的制備

操作同實(shí)施例15，以5-三氟甲基-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(26)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:4.56(s,2H),7.05(d,J＝8Hz,1H),7.23(d,J＝8Hz,1H),7.35(d,J＝8Hz,1H),9.54(s,1H),9.81(s,1H)ppm.

實(shí)施例22 5-甲氧基-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(9)的制備

操作同實(shí)施例15，以5-甲氧基-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(27)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:3.72(s,3H),4.38(s,2H),6.34(d,J＝8Hz,1H),6.50(d,J＝8Hz,1H),7.06(t,J＝8Hz,1H),9.31(s,1H),9.34(s,1H)ppm.

實(shí)施例23 6-正丙基-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(10)的制備

操作同實(shí)施例15，以6-正丙基-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(28)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:0.80(t,J＝8Hz,3H),1.60-1.63(m,2H),2.56-2.58(m,2H),4.49(s,2H),7.07-7.09(m,1H),7.14(s,1H),7.27-7.29(m,1H),8.01(s,1H)ppm.

實(shí)施例24 6-丙?；?3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(11)的制備

操作同實(shí)施例15，以6-丙?；?3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(29)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:1.14(t,J＝8Hz,3H),3.50(dd,J＝7.0,14Hz,2H),4.48(s,2H),7.66(s,1H),7.74-7.75(m,1H),7.78-7.79(m,1H),8.10(s,1H)ppm.

實(shí)施例25 6-乙氧基-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(12)的制備

操作同實(shí)施例15，以6-乙氧基-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(30)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:1.22(t,J＝8Hz,3H),4.08(dd,J＝8,14Hz,2H),4.48(s,2H),6.76-6.78(m,1H),6.99(s,1H),7.55-7.57(m,1H),7.99(s,1H)ppm.

實(shí)施例26 6-芐氧基-3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(13)的制備

操作同實(shí)施例15，以6-芐氧基-3-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(31)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:4.48(s,2H),4.99(s,2H),6.77-6.79(m,1H),6.99(s,1H),7.56-7.58(m,1H),7.35-7.38(m,3H),7.44-7.48(m,2H)ppm.

實(shí)施例27 3-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮基乙酸酯(14)的制備

將3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(1)(100mg,0.61mmol)懸浮于3mL二氯甲烷中，20℃下加入乙酸酐(68mg,0.67mmol)，攪拌形成均相后，加入三乙胺(80mg,0.79mmol)。保持在此溫度下攪拌30min，加50mL冰水，以二氯甲烷萃取(40mL×3)，萃取液經(jīng)飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得粗品，粗品經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1:5)得3-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮基乙酸酯(92mg，73.60％，白色固體，14)。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:2.24(s,3H),4.73(s,2H),6.70(d,J＝8Hz,1H),6.97(t,J＝8Hz,1H),7.07(d,J＝8Hz,1H),7.19(t,J＝8Hz,1H),7.29(s,1H)ppm.

實(shí)施例28 3-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮基苯甲酸酯(15)的制備

將3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(1)(30mg,0.18mmol)溶于2mL N,N’-二甲基甲酰胺中，加入苯甲酸(23mg,0.18mmol)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(76mg,0.20mmol)、三乙胺(37mg,0.36mmol)。室溫?cái)嚢?2h，加30mL冰水，以二氯甲烷萃取(30mL×3)，萃取液經(jīng)飽和碳酸氫鈉、飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得粗品，粗品經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1:5)得3-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮基苯甲酸酯(20mg，40.81％，白色固體，15)。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:4.80(s,2H),6.84(d,J＝8Hz,1H),6.95(s,1H),7.19(s,1H),7.57(s,2H),7.73(s,1H),8.01(d,J＝4Hz,2H),10.04(s,1H)ppm.

實(shí)施例29 3-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮基-4-甲基苯甲酸酯(16)的制備

操作同實(shí)施例28，以3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(1)為起始原料，與4-甲基苯甲酸反應(yīng)。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,DMSO:3.01(s,3H),4.80(s,2H),6.75(d,J＝8Hz,1H),6.95(t,J＝8Hz,1H),7.09(d,J＝8Hz,1H),7.21(t,J＝8Hz,1H),7.55(s,1H),7.73-7.74(m,2H),8.07-8.09(m,2H)ppm.

實(shí)施例30 3-異丙基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(17)的制備

將3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(1)(43mg,0.26mmol)溶于3mL N,N’-二甲基甲酰胺中，加入碳酸鉀(109mg,0.78mmol)、溴代異丙基(97mg,0.78mmol)。50℃下攪拌5h，加30mL冰水，以二氯甲烷萃取(30mL×3)，萃取液經(jīng)飽和碳酸氫鈉、飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得粗品，粗品經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1:5)得3-異丙基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(15mg，27.78％，白色固體，17)。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:1.28(s,6H),4.23-4.26(m,1H),4.56(s,2H),6.72(d,J＝8Hz,1H),6.95(t,J＝8Hz,1H),7.08(d,J＝8Hz,1H),7.18(t,J＝8Hz,1H),7.55(s,1H)ppm.

實(shí)施例31 3-(4-甲基芐氧基)-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(18)的制備

操作同實(shí)施例30，以3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮(1)為起始原料，與4-甲基溴芐反應(yīng)。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:3.01(s,3H),4.46(s,2H),5.04(s,2H),6.77-6.79(m,1H),7.01-7.02(m,1H),7.15-7.17(m,2H),7.23-7.25(m,1H),7.29-7.30(m,1H),7.35-7.36(m,2H),8.14(s,1H)ppm.

實(shí)施例32 3-芐氧基-3,4-二氫吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(33)的制備

將過(guò)氧化氫(187.5g,1.72mol)溶于390mL發(fā)煙硫酸中，冰浴下攪拌，將2-氨基-3-甲基吡啶(25g,0.23mol)溶于80mL濃硫酸中，并在冰浴條件下逐滴滴入到上述溶液中，在冰浴條件下攪拌5h，恢復(fù)到室溫反應(yīng)24h。用40％氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值到中性，以乙酸乙酯(700mL×3)萃取，萃取液經(jīng)飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得粗品，粗品經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1:10)得2-硝基-2-甲基吡啶(4.2g,13.13％)。

將2-硝基2-甲基吡啶(4.2g,30.66mmol)溶于100mL四氯化碳中，加入N-溴代丁二酰亞胺(5.5g,30.66mmol)，加入催化劑量的光引發(fā)劑過(guò)氧化二苯甲酰，升溫到100℃，回流攪拌48h。待反應(yīng)液恢復(fù)到室溫，減壓蒸餾去除溶劑，加50mL冰水，以乙酸乙酯萃取(40mL×3)，萃取液經(jīng)飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1:10)得3-溴乙基-2-硝基吡啶(2.9g，44.14％)。

將3-溴乙基-2-硝基吡啶(2.9g,15.56mmol)溶于30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺(4.11g,40.67mmol)，室溫?cái)嚢?min。將芐氧胺鹽酸鹽(3.23g，20.33mmol)溶于30mL N,N-二甲基甲酰胺中，逐滴滴入到上述混合物中，滴加結(jié)束后升溫到45℃，并在此溫度下反應(yīng)12h。加50mL冰水，以乙酸乙酯萃取(40mL×3)，萃取液經(jīng)飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1:8)得1-(2-硝基吡啶)-N-芐氧基-甲胺(3.0g，86.21％)。

將1-(2-硝基吡啶)-N-芐氧基-甲胺(100mg,0.39mmol)溶于7mL無(wú)水乙腈，加入N,N’-二異丙基乙胺(249mg,1.95mmol)，冰浴條件下向該混合物中逐滴滴入三氯硅烷(183mg,1.35mmol)，反應(yīng)混合物恢復(fù)到室溫，攪拌18h。加入10mL飽和碳酸氫鈉攪拌30min，以乙酸乙酯萃取(20mL×3)，萃取液經(jīng)飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1:10)得1-(2-氨基吡啶)-N-芐氧基-甲胺(40mg，45.45％)。

將1-(2-氨基吡啶)-N-芐氧基-甲胺(40mg,0.17mmol)和N,N’-羰基二咪唑(85mg,0.52mmol)溶于5mL四氫呋喃中，50℃條件下攪拌16h，濃縮得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1:30)得3-芐氧基-3,4-二氫吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(33)(21mg，46.67％，白色固體，33)。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:5.22(s,2H),5.32(s,2H),7.22(d,J＝8Hz,1H),7.33-7.40(m,5H),8.175(dd,J＝4,8Hz,1H),8.365(d,J＝4Hz,1H),8.45(s,1H)ppm.

實(shí)施例33 3-羥基-3,4-二氫吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(32)的制備

操作同實(shí)施例15，以3-芐氧基-3,4-二氫吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(33)為起始原料。

核磁共振氫譜：¹HNMR,400MHz,CDCl₃:5.32(s,2H),7.33(d,J＝8Hz,1H),7.77(d,J＝8Hz,1H),8.15(d,J＝8Hz,1H),8.39(s,1H),8.46(s,1H)ppm.

生物活性研究

實(shí)施例34 體外測(cè)定3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物對(duì)豬DAAO酶活性抑制作用

按8.2UI/ml的濃度配制豬DAAO酶儲(chǔ)備液，使用時(shí)稀釋10倍作為工作液使用。對(duì)照管、空白管加入25μL Tris-HCl緩沖液，抑制劑管加入25μL多種濃度的3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物。空白管加入50μL Tirs-HCl緩沖液，其他管加入50μl 2.5mM D型丙氨酸底物。各組加入50μL 0.82UI/mL豬DAAO酶工作液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)，反應(yīng)置于37℃恒溫?fù)u床上進(jìn)行，搖動(dòng)頻率為700rpm。5分鐘后加入50μL 25％三氯乙酸終止反應(yīng)，并置于冰上。

上述反應(yīng)液震蕩混勻后4℃14000rpm離心5分鐘。取50μL離心上清液，加入50μL 1mM 2,4-二硝基苯肼顯色液，震蕩混勻，置于37℃恒溫?fù)u床反應(yīng)10分鐘，搖動(dòng)頻率為700rpm。加入100μL 1.5M氫氧化鈉溶液，置于37℃恒溫?fù)u床反應(yīng)10分鐘，搖動(dòng)頻率為700rpm。取出100μL反應(yīng)液，加入96孔板中，在酶標(biāo)儀上于450nm波長(zhǎng)讀數(shù)。按抑制率％＝(對(duì)照管吸光率-抑制管吸光率)/(對(duì)照管吸光率-空白管吸光率)*100計(jì)算抑制率。計(jì)算半數(shù)抑制劑量IC₅₀。

結(jié)果表明，化合物3對(duì)豬DAAO酶抑制作用呈濃度依賴式，最大抑制達(dá)100％。其抑制豬DAAO酶活性IC₅₀為11.56μM。其他13個(gè)化合物對(duì)人、豬和大鼠DAAO酶抑制作用均亦呈濃度依賴式，最大抑制率達(dá)100％，相應(yīng)IC₅₀值見(jiàn)表1。

表1 3-羥基-3,4-二氫喹唑啉-2(1H)-酮類化合物對(duì)豬DAAO酶活性抑制作用

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