1.一種抗體修飾的親水石墨烯薄膜材料的制備方法,其特征在于,首先,將石墨烯薄膜利用粘附性均勻固定于雙面膠基底;然后,通過偶聯(lián)反應(yīng)包覆一層殼聚糖;再將樹枝狀分子PAMAM通過戊二醛交聯(lián)法與殼聚糖枝接;最后,將抗體通過碳二亞胺共價偶聯(lián)的方法修飾于石墨烯薄膜材料表面,形成具有免疫識別和捕獲功能的薄膜材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,具體操作步驟如下:
(1)石墨烯薄膜基底合成:裁切1.2*1.2 cm2的雙面膠,平鋪粘貼于24孔板的一孔中,向每孔加入400-600 μL的0.5-2.0 mg/mL石墨烯乙醇溶液,置于搖床中,30-40℃,反應(yīng)16-24 h后用乙醇和水交替清洗材料,得到均勻分散的石墨烯薄膜基底材料;
(2)殼聚糖包覆的石墨烯薄膜材料的合成:向步驟(1)制備的石墨烯薄膜材料中加入含1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS)的混合溶液300-500 μL,于30-37℃活化羧基0.3-1.0 h,EDC與NHS用量比為1:1-1:2,然后向活化后的材料加入50-150 μL殼聚糖的醋酸溶液,醋酸濃度為1%-3%,殼聚糖濃度為5-10 mg/mL,反應(yīng)12-16 h后,用PBS將材料洗凈,得到殼聚糖包覆的石墨烯薄膜材料;
(3)樹枝狀分子修飾的親水石墨烯薄膜的合成:采用戊二醛交聯(lián)法將樹枝狀分子修飾在殼聚糖包覆的石墨烯薄膜上,即:先用5%-25%戊二醛的PBS溶液,活化步驟(2)得到的殼聚糖包覆的石墨烯薄膜1-3 h,用PBS清洗后,加入0.5-4.0 μL的樹枝狀分子(PAMAM dendrimer 5.0)溶液,30-37℃偶聯(lián)3-6 h,然后用含1%-2% 氰基硼氫化鈉的PBS溶液封端0.5-2 h,最后用PBS洗凈,即得到樹枝狀分子修飾的親水石墨烯薄膜;
(4)抗體的修飾:采用碳二亞胺共價偶聯(lián)的方法將上皮細胞粘附分子抗體(anti-EpCAM)修飾于表面為樹枝狀分子修飾的親水石墨烯薄膜上,即:首先配制得到濃度在5-20 μg/mL的抗體溶液,并加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS),再將上述混合溶液加入步驟(3)得到的樹枝狀分子修飾的親水薄膜材料中,25-37℃偶聯(lián)12-20 h,即可得到抗體修飾的樹枝狀分子親水石墨烯薄膜,其作為細胞捕獲的基底;其中:1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS)的用量比為1:1-1:2。
3.一種如權(quán)利要求1或2所述制備方法得到的抗體修飾的親水石墨烯薄膜材料。
4.如權(quán)利要求3所述的抗體修飾的親水石墨烯薄膜材料,在捕獲前列腺癌細胞DU145、人宮頸癌細胞Hela中的應(yīng)用。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用,其特征在于,具體操作步驟為:向含抗體修飾的親水石墨烯薄膜材料的24孔板的每孔中加入0.5 mL 腫瘤細胞DU145的懸浮液,細胞密度為105-106,在培養(yǎng)箱孵育5-90 min后,吸取上清液并用PBS浸洗3次,計算細胞的捕獲效率;對捕獲后的細胞進行戊二醛固定,并經(jīng)乙醇梯度脫水后,冷凍干燥,拍攝掃描電子顯微鏡觀察。
6.如權(quán)利要求3所述的抗體修飾的親水石墨烯薄膜材料,在捕獲細胞膜含抗體所對應(yīng)抗原的腫瘤細胞中的應(yīng)用。