本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取技術領域，具體涉及一種從米糠中提取活性蛋白的方法。
背景技術：
米糠是稻谷加工中最重要的一類副產(chǎn)品。米糠不僅含有豐富的脂質（16~22%）、粗蛋白（12~16%），還含有多種天然活性物質，如植酸、谷維素、γ- 氨基丁酸、脂多糖、生育酚等。目前我國米糠年產(chǎn)量已達到1800萬噸，但利用率只有10%，大部分作為低價值飼料使用，造成了極大浪費。
米糠蛋白是一種營養(yǎng)價值很高的植物蛋白質，其中可溶性蛋白約占70%，必需氨基酸組成接近人體需要模式，且賴氨酸和蛋氨酸含量高于大米及其它谷物含量，可彌補谷物蛋白某些氨酸酸不足的缺陷。
現(xiàn)有技術如，中國發(fā)明授權專利，授權公告號CN 103351422 B，該發(fā)明公開了一種從糙米或/和米糠中提取天然生物活性蛋白的方法，包括：將糙米或/和米糠經(jīng)脫脂處理得到脫脂米粉；將脫脂米粉與氯化鈉水溶液混合，然后經(jīng)振蕩提取、第一分離收集上清液，即為總鹽溶性蛋白溶液；向總鹽溶性蛋白溶液加入乙醇，混合均勻，經(jīng)靜置、第二分離后除去沉淀部分，得到生物活性蛋白溶液；將生物活性蛋白溶液經(jīng)后處理除乙醇、除鹽分以及干燥后得到天然生物活性蛋白。該發(fā)明方法采用氯化鈉和乙醇兩種食品級原料，能夠從糙米或/和米糠中提取天然生物活性蛋白，低成本，無污染。該發(fā)明方法制備的天然生物活性蛋白，可以用作制備保健食品、作為食品添加劑和應用到化妝品中，具有廣闊的應用前景，但該提取方法略為簡單，提取到的提取物中活性蛋白可能不太高，含有雜質。
現(xiàn)有技術如，中國發(fā)明授權專利，授權公告號CN 103833786 B，該發(fā)明提供一種米糠營養(yǎng)和活性物質的高效提取方法。該方法包括（1）全脂米糠篩分除雜；（2）酸浸泡提取植酸；（3）高速剪切輔助復配溶劑浸提米糠毛油；（4）酶法提取米糠蛋白。該發(fā)明方法可從全脂米糠中先后高效的提取出植酸、脂肪和蛋白質，實現(xiàn)了全脂米糠的高值化全利用，提高其附加值，避免資源浪費，但該發(fā)明提取米糠活性蛋白的純度不高，在提取率上還具有提升空間。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對上述技術問題提供一種從米糠中提取活性蛋白的方法，對米糠進行脫脂、酶解、分離純化，提高得到提取物的活性蛋白含量，得到的活性蛋白純度高，提高了米糠的利用價值，避免資源浪費。
本發(fā)明針對上述技術問題所采取的方案為：一種從米糠中提取活性蛋白的方法，方法包括以下步驟：
1）預處理：在米糠中加入異丙醇，攪拌，加入正己烷浸提，調漿，倒入膠體磨，離心，取米糠粕真空脫溶，得脫脂米糠粕；
2）酶解和提?。涸诿卓菲芍屑诱麴s水，微波提取，調pH，加入米糠粨1~2%重量份的復合酶，攪拌，滅酶，離心取上清液；
3）分離純化：超濾，凝膠層析，冷凍干燥，得活性蛋白；本發(fā)明對米糠進行脫脂、微波提取，酶解、分離純化，提高得到提取物的活性蛋白含量，得到的活性蛋白純度高。
步驟2）中蒸餾水中含有0.1~0.1%的苯氧基乙醇和0.01~0.1%的對氨基苯甲酸鹽。
作為優(yōu)選，步驟1中的米糠與異丙醇的體積比為1：2.5~6.3，米糠與正己烷的體積比為1：2.7~6.2，通過高速剪切輔助復配溶劑浸提的方法，對米糠中的脂肪進行分離。
作為優(yōu)選，步驟1中調漿后倒入膠體磨8~22min，于3200~4800r/min離心8~25min，得米糠粕和混合油，取米糠粕，真空脫溶的真空度為0.05~0.2MPa，溫度為40~60℃， 脫除米糠中的脂肪和雜質。
作為優(yōu)選，步驟2中加入米糠重量30~45倍的蒸餾水，微波提取的微波功率為350~450w，在45~55℃下微波提取2~3次，每次30~50min，使細胞內部的溫度將迅速上升，從而使細胞內部的壓力超過細胞壁膨脹所能承受的能力，結果細胞破裂，其內的有效成分自由流出。
作為優(yōu)選，步驟2中調pH至5.8~6.3，復合酶由纖維素酶2~5份、糖化酶2~5份、木瓜蛋白酶2~5份、乙醛脫氫酶0.2~0.7份、單寧酶0.6~1份、單甘脂 0.1~0.3份，攪拌酶解時間為50~80min，利用復合酶可降解多種蛋白質，提高蛋白質的提取率和純度，復合酶的酶解效率高而且酶解時間快，效果好。
作為優(yōu)選，步驟3超濾的濾膜截留分子量為8000~14000Da，超濾壓力為4×104Pa，去除多肽、多糖和鹽以獲得高純度的活性蛋白。
作為優(yōu)選，步驟3中凝膠層析的凝膠懸液由凝膠、磷酸氫二鈉和減鹽緩沖液組成，凝膠與減鹽緩沖液的質量比為1：0.3：1~3，堿鹽緩沖液為體積比例為1：0.8~3.6混合的0.02~0.4mol/L NaOH溶液和含有0.05~0.8mol/L NaCl的PBS磷酸鹽緩沖溶液，用NaCl 進行柱效檢測與丙酮進行柱效檢測效果一樣，凝膠層析后的洗脫液中的活性蛋白純度高。
作為優(yōu)選，步驟3中凝膠層析后在洗脫液中加入碘顏色反應和茚三酮反應，收集有顯色反應的洗脫液，獲得高含量的活性蛋白的溶液。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果：通過高速剪切輔助復配溶劑浸提的方法，對米糠中的脂肪進行分離、加入苯氧基乙醇和對氨基苯甲酸鹽，再通過微波提取使細胞內部的溫度將迅速上升，從而使細胞內部的壓力超過細胞壁膨脹所能承受的能力，結果細胞破裂其內的有效成分自由流出，苯氧基乙醇和對氨基苯甲酸鹽具有促進細胞壁破裂的作用，從而酶解可降解多種蛋白質，提高蛋白質的提取率和純度、分離純化，提高得到提取物的活性蛋白含量，得到的活性蛋白純度高。
具體實施例
以下結合實施例作進一步詳細描述：
實施例1
一種從米糠中提取活性蛋白的方法，方法包括以下步驟：
1）預處理：在米糠中加入異丙醇，攪拌，加入正己烷浸提，調漿，倒入膠體磨，離心，取米糠粕真空脫溶，得脫脂米糠粕；
2）酶解和提?。涸诿卓菲芍屑诱麴s水，微波提取，調pH，加入米糠粨1~2%重量份的復合酶，攪拌，滅酶，離心取上清液；
3）分離純化：超濾，凝膠層析，冷凍干燥，得活性蛋白；本發(fā)明對米糠進行脫脂、微波提取，酶解、分離純化，提高得到提取物的活性蛋白含量，得到的活性蛋白純度高。
步驟2）中蒸餾水中含有0.1~0.1%的苯氧基乙醇和0.01~0.1%的對氨基苯甲酸鹽。
步驟1中的米糠與異丙醇的體積比為1：2.5~6.3，米糠與正己烷的體積比為1：2.7~6.2，通過高速剪切輔助復配溶劑浸提的方法，對米糠中的脂肪進行分離。
步驟1中調漿后倒入膠體磨8~22min，于3200~4800r/min離心8~25min，得米糠粕和混合油，取米糠粕，真空脫溶的真空度為0.05~0.2MPa，溫度為40~60℃， 脫除米糠中的脂肪和雜質。
步驟2中加入米糠重量30~45倍的蒸餾水，微波提取的微波功率為350~450w，在45~55℃下微波提取2~3次，每次30~50min，使細胞內部的溫度將迅速上升，從而使細胞內部的壓力超過細胞壁膨脹所能承受的能力，結果細胞破裂，其內的有效成分自由流出。
步驟2中調pH至5.8~6.3，復合酶由纖維素酶2~5份、糖化酶2~5份、木瓜蛋白酶2~5份、乙醛脫氫酶0.2~0.7份、單寧酶0.6~1份、單甘脂 0.1~0.3份，攪拌酶解時間為50~80min，利用復合酶可降解多種蛋白質，提高蛋白質的提取率和純度，復合酶的酶解效率高而且酶解時間快，效果好。
步驟3超濾的濾膜截留分子量為8000~14000Da，超濾壓力為4×104Pa，去除多肽、多糖和鹽以獲得高純度的活性蛋白。
步驟3中凝膠層析的凝膠懸液由凝膠、磷酸氫二鈉和減鹽緩沖液組成，凝膠與減鹽緩沖液的質量比為1：0.3：1~3，堿鹽緩沖液為體積比例為1：0.8~3.6混合的0.02~0.4mol/L NaOH溶液和含有0.05~0.8mol/L NaCl的PBS磷酸鹽緩沖溶液，用NaCl 進行柱效檢測與丙酮進行柱效檢測效果一樣，凝膠層析后的洗脫液中的活性蛋白純度高。
步驟3中凝膠層析后在洗脫液中加入碘顏色反應和茚三酮反應，收集有顯色反應的洗脫液，獲得高含量的活性蛋白的溶液。
實施例2
一種從米糠中提取活性蛋白的方法，方法包括以下優(yōu)選步驟：
1）預處理：在米糠中加入異丙醇，米糠與異丙醇的體積比優(yōu)選為1：3，攪拌，加入正己烷浸提，米糠與正己烷的體積比優(yōu)選為1：3，調漿，倒入膠體磨中膠磨9min，于3500r/min離心8min，得米糠粕和混合油，取米糠粕，真空脫溶的真空度優(yōu)選為0.1MPa，溫度優(yōu)選為52℃，得脫脂米糠粕；
2）酶解和提?。杭尤雰?yōu)選的米糠重量38倍的蒸餾水，微波提取，微波功率優(yōu)選為380w，在52℃下微波提取3次，每次優(yōu)選40min，調pH至6.1，加入優(yōu)選的米糠粨1.2%重量份的復合酶，攪拌酶解55min，酶解溫度優(yōu)選為42℃，沸水滅酶，離心取上清液；
3）分離純化：超濾，濾膜截留分子量優(yōu)選為12000Da，超濾壓力為4×104Pa，凝膠層析，在洗脫液中加入碘顏色反應和茚三酮反應，收集有顯色反應的洗脫液，冷凍干燥，得活性蛋白。
步驟2）中蒸餾水中含有0.1%的苯氧基乙醇和0.01%的對氨基苯甲酸鹽。
上述步驟1~3中的超濾、凝膠層析等常規(guī)技術為本領域技術人員所知曉的現(xiàn)有技術，具體操作步驟在此不作詳細描述，參考國標GB/T 5009.5-2010 中凱式定氮法（N×5.95）測定上述米糠活性蛋白提取率為47.4%以上，純度在57.8%以上。
步驟2中復合酶由優(yōu)選的纖維素酶4份、糖化酶3.5份、木瓜蛋白酶4份、乙醛脫氫酶0.6份、單寧酶0.7份、單甘脂 0.18份，利用復合酶可降解多種蛋白質，提高蛋白質的提取率和純度，復合酶的酶解效率高而且酶解時間快，效果好。
步驟3中凝膠層析的凝膠懸液由凝膠、磷酸氫二鈉和減鹽緩沖液組成，凝膠與減鹽緩沖液的質量比優(yōu)選為1：0.3：2，堿鹽緩沖液為體積比例為1：3混合的0.4mol/L NaOH溶液和含有0.2mol/L NaCl的PBS磷酸鹽緩沖溶液，用NaCl 進行柱效檢測與丙酮進行柱效檢測效果一樣，凝膠層析后的洗脫液中的活性蛋白純度高，凝膠與減鹽緩沖液的質量比不僅限于1：0.3：1~3，還應包括1：0.3：1、1：0.3：1.1、1：0.3：1.2、1：0.3：1.3……1：0.3：2.99、1：0.3：3。
步驟1中的米糠與異丙醇的體積比不僅限于1：2.5~6.3，還應包括1：2.5、1：2.51、1：2.52、1：2.53……1：6.29、1：6.3，米糠與正己烷的體積比不僅限于1：2.7~6.2，還應包括1：2.7、1：2.71、1：2.72、1.2.73……1：6.19、1：6.2。
以上實施方式僅用于說明本發(fā)明，而并非對本發(fā)明的限制，本領域的普通技術人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，還可以做出各種變化和變型。因此，所有等同的技術方案也屬于本發(fā)明的范疇，本發(fā)明的專利保護范圍應由權利要求限定。