一種從脫脂米糠中提取抗氧化肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從脫脂米糠中提取抗氧化肽的方法，屬于抗氧化肽制備技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]稻谷是我國第1大糧食品種.目前年產(chǎn)2.06億t左右。占全國糧食總產(chǎn)量的42%。世界上稻谷產(chǎn)量占糧食總產(chǎn)量的37%。稻谷在加工成精米的過程中要去掉外殼和占總重10%左右的果皮、種皮、外胚乳、糊糊層和胚，傳統(tǒng)的米糠也就是現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)米糠主要是由果皮、種皮、外胚乳、糊粉層和胚加工制成的，因此在加工過程中會混進少量的稻殼和一定量的灰塵和微生物，所以只能用于飼料，是稻谷加工的主要副產(chǎn)品。國內(nèi)外的研究結(jié)果和資料表明，米糠中富含各種營養(yǎng)素和生理活性物質(zhì)?，F(xiàn)在美國等發(fā)達(dá)國家已經(jīng)有食用米糠問世，我國也有類似產(chǎn)品被發(fā)明，即應(yīng)用現(xiàn)代食品加工精準(zhǔn)碾制技術(shù)將米糠中的不益食物質(zhì)(稻殼、果皮、種皮、灰塵、微生物等)與益食營養(yǎng)物質(zhì)(胚、糊粉層等外層胚乳)在潔凈的生產(chǎn)車間里進行精準(zhǔn)碾磨分離，此分離技術(shù)可將米糠分級為飼料級米糠和食品級米糠兩部分，其中食品級米糠約占米糠總重量的80%，營養(yǎng)的90%以上。因為食品級米糠雖然只占稻谷重量的6%，且占稻谷營養(yǎng)的約60%，是大米碾白過程中的碾下物。米糠蛋白獨特的抗癌特性，抗血脂，抗氧化等功能，通過蛋白質(zhì)水解成含有多種生理活性的活性肽。隨著人們對抗氧化劑的日益關(guān)注，利用米糠蛋白酶解制備具有抗氧化活性肽有著重要的意義。我國的米糠加工利用率低，除了極少部分作為提取米糠油的原料外，多數(shù)用作飼料，還有很多被廢棄，造成資源的巨大浪費。現(xiàn)如今使用的抗氧化劑通常以化學(xué)抗氧化劑為主，因安全性問題被限制；一些天然的抗氧化劑，因成本高等受到限制。因此從米糠中尋找抗氧化肽或其他具有抗氧化特性的活性物質(zhì)具有明顯的開發(fā)和前景和現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題:針對目前米糠利用率低、多數(shù)用作飼料或丟棄，造成資源的浪費，且由于現(xiàn)今生產(chǎn)的天然抗氧化劑成本高的弊端，提供了一種以脫脂米糠為原料，將其先與水蒸煮，于細(xì)紗布中過濾得米糠液，再加入一定量的脫脂米糠和蒸餾水混合保溫后，放入恒溫水浴中，加入蛋白酶和纖維素酶水解反應(yīng)，進行滅酶處理后，經(jīng)鹽酸浸泡，去離子水洗滌，氫氧化鈉溶液浸泡，去離子再次洗滌，再進行水解反應(yīng)，高速離心分離得抗氧化肽粗提液，與無水乙醇等混合后，加入纖維素酶水解后，滅酶處理，經(jīng)離心分離后制得抗氧化肽的方法。本發(fā)明制備方法簡單，不僅解決了米糠利用率低的問題，也減少了抗氧化肽的生產(chǎn)成本，實現(xiàn)了資源的可持續(xù)循環(huán)利用。
[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下所述的技術(shù)方案是:
(1)取50?60mL水放入橢圓底鍋中，同時加入20?30g脫脂米糠，以5°C /min的速度程序升溫至100?105°C，蒸煮30?40min，直至將水燒開至沸騰，待水沸騰后，敞開鍋蓋，使鍋中混合物溫度自然冷卻至35?40°C，取出放入孔徑為0.1?0.3 μ m的細(xì)紗布中過濾，得米糖液；
(2)將上述所得的米糠液放入三口燒瓶中，分別向其中加入30?50g脫脂米糠和80?100mL蒸饋水，控制溫度為40?45°C，在轉(zhuǎn)速為500?700r/min的條件下，攪拌20?30min混合均勻，再保溫30?40min ；
(3)待上述保溫完成后，將其放入恒溫水浴中，調(diào)節(jié)溫度為48?50°C，加入1.5?
1.8%的蛋白酶和3?5%的纖維素酶，控制轉(zhuǎn)速為800?900r/min，磁力攪拌混合均勾，然后保持溫度不變，水解反應(yīng)5?6h ;
(4)待水解完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理50?60min，滅酶處理后，加入20?30mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30?40%的鹽酸浸泡7?lOmin，用去離子水洗滌至中性，再加入20?30mL質(zhì)量濃度為0.1?0.3mol/L的氫氧化鈉溶液中浸泡7?lOmin，再用去離子水洗滌至中性；
(5)向上述再次洗滌為中性的酶解物中加入10?12g過硫酸鉀，同時加入1.5?1.8%的蛋白酶混合均勻，水解反應(yīng)3?4h，水解反應(yīng)完成后，放入轉(zhuǎn)速為8000?12000r/min的離心機中離心12?14min，分離得上清液，即抗氧化肽粗提液；
(6)將上述所得的抗氧化肽粗提液放入反應(yīng)容器中，向其中加入5?7mL無水乙醇溶液，同時向其中加入5?7g磷酸氫二鈉，在溫度為45?50°C，轉(zhuǎn)速為500?700r/min條件下，攪拌30?40min，邊攪拌邊以1?2g/min的速度向其中添加10?12g纖維素酶，添加完畢后，水解反應(yīng)2?3h ;
(7)待水解反應(yīng)完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理50?60min，滅酶處理后，放入轉(zhuǎn)速為8000?12000r/min的離心機中離心12?14min，分離得上清液，即精品抗氧化肽。
[0005]本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是:
(1)本發(fā)明制備方法簡單，制備成本低于其他方法5%；
(2)不僅解決了米糠利用率低的問題，也減少了抗氧化肽的生產(chǎn)成本，實現(xiàn)了資源的可持續(xù)循環(huán)利用。
【具體實施方式】
[0006]首先取50?60mL水放入橢圓底鍋中，同時加入20?30g脫脂米糠，以5°C /min的速度程序升溫至100?105°C，蒸煮30?40min，直至將水燒開至沸騰，待水沸騰后，敞開鍋蓋，使鍋中混合物溫度自然冷卻至35?40°C，取出放入孔徑為0.1?0.3 μ m的細(xì)紗布中過濾，得米糠液；然后將上述所得的米糠液放入三口燒瓶中，分別向其中加入30?50g脫脂米糠和80?lOOmL蒸餾水，控制溫度為40?45°C，在轉(zhuǎn)速為500?700r/min的條件下，攪拌20?30min混合均勻，再保溫30?40min ;待上述保溫完成后，將其放入恒溫水浴中，調(diào)節(jié)溫度為48?50°C，加入1.5?1.8 %的蛋白酶和3?5 %的纖維素酶，控制轉(zhuǎn)速為800?900r/min,磁力攪拌混合均勻，然后保持溫度不變，水解反應(yīng)5?6h ;再待水解完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理50?60min，滅酶處理后，加入20?30mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30?40%的鹽酸浸泡7?lOmin，用去離子水洗滌至中性，再加入20?30mL質(zhì)量濃度為0.1?
0.3mol/L的氫氧化鈉溶液中浸泡7?lOmin，再用去離子水洗滌至中性；向上述再次洗滌為中性的酶解物中加入10?12g過硫酸鉀，同時加入1.5?1.8%的蛋白酶混合均勻，水解反應(yīng)3?4h，水解反應(yīng)完成后，放入轉(zhuǎn)速為8000?12000r/min的離心機中離心12?14min，分離得上清液，即抗氧化肽粗提液；將上述所得的抗氧化肽粗提液放入反應(yīng)容器中，向其中加入5?7mL無水乙醇溶液，同時向其中加入5?7g磷酸氫二鈉，在溫度為45?50°C，轉(zhuǎn)速為500?700r/min條件下，攪拌30?40min，邊攪拌邊以1?2g/min的速度向其中添加10?12g纖維素酶，添加完畢后，水解反應(yīng)2?3h ;最后待水解反應(yīng)完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理50?60min，滅酶處理后，放入轉(zhuǎn)速為8000?12000r/min的離心機中離心12?14min，分離得上清液，即精品抗氧化肽。
[0007]實例1
首先取50mL水放入橢圓底鍋中，同時加入20g脫脂米糠，以5°C /min的速度程序升溫至100°C，蒸煮30min，直至將水燒開至沸騰，待水沸騰后，敞開鍋蓋，使鍋中混合物溫度自然冷卻至35°C，取出放入孔徑為0.1 ym的細(xì)紗布中過濾，得米糠液；然后將上述所得的米糠液放入三口燒瓶中，分別向其中加入30g脫脂米糠和80mL蒸餾水，控制溫度為40°C，在轉(zhuǎn)速為500r/min的條件下，攪拌20min混合均勻，再保溫30min ;待上述保溫完成后，將其放入恒溫水浴中，調(diào)節(jié)溫度為48°C，加入1.5 %的蛋白酶和3 %的纖維素酶，控制轉(zhuǎn)速為800r/min,磁力攪拌混合均勻，然后保持溫度不變，水解反應(yīng)5h ;再待水解完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理50min，滅酶處理后，加入20mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的鹽酸浸泡7min，用去離子水洗