本發(fā)明屬于食品學檢驗領域。具體涉及抗氧化肽制備的方法。

背景技術(shù)：

二氧化鈦（化學式：TiO），白色固體或粉末狀的兩性氧化物，分子量：79.87，是一種白色無機顏料，具有無毒、最佳的不透明性、最佳白度和光亮度，被認為是目前世界上性能最好的一種白色顏料。鈦白的粘附力強，不易起化學變化，永遠是雪白的。廣泛應用于涂料、塑料、造紙、印刷油墨、化纖、橡膠、化妝品等工業(yè)。它的熔點很高，也被用來制造耐火玻璃，釉料，琺瑯、陶土、耐高溫的實驗器皿等。同時，二氧化鈦有較好的紫外線掩蔽作用，常作為防曬劑摻入紡織纖維中，超細的二氧化鈦粉末也被加入進防曬霜膏中制成防曬化妝品。二氧化鈦可由金紅石用酸分解提取，或由四氯化鈦分解得到。二氧化鈦性質(zhì)穩(wěn)定，大量用作油漆中的白色顏料，它具有良好的遮蓋能力，和鉛白相似，但不像鉛白會變黑；它又具有鋅白一樣的持久性。二氧化鈦還用作搪瓷的消光劑，可以產(chǎn)生一種很光亮的、硬而耐酸的搪瓷釉罩面。

食品應用 ：美國食品藥品管理局規(guī)定二氧化鈦可以作為所有的食品白色素，最大的使用量為1g/kg Sec. 73.575二氧化鈦。色素添加劑二氧化鈦可以安全用于一般著色食品中，服從下列規(guī)定：

（1） 二氧化鈦的數(shù)量不超過食物重量的1%；

（2） 按照法令的401條所公布的特殊標準，不得使用的著色食品，除非有類似的標準允許添加色素；

（3） 對于著色食品，食用的色素添加劑二氧化鈦可以含有適當?shù)南♂寗鳛榘踩纳靥砑觿?，如下：二氧化硅，作為分散助劑，含量不超過2%。

產(chǎn)品適應：涼果類、果凍、油炸食品、可可制品、巧克力、巧克力制品、硬制糖果、拋光糖果、膠基糖果、膨化食品、糖果巧克力制品包衣、蛋黃醬、沙拉醬、果醬、固體飲料、魔芋凝膠食品等。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種靈敏度高，速度快，結(jié)果準確。

為實現(xiàn)上述步驟目的，本發(fā)明提供了一種酶解玉米蛋白粉制備抗氧化肽的方法

，其特征在于，步驟為，

制備玉米抗氧化肽的工藝流程

玉米蛋白粉→粉碎→80目過篩→3%(w/v)懸浮液→熱變性處理(90℃,10min) →調(diào)PH→加酶水解→滅酶（沸水溶5min）→離心（12000r/min）→取上清→分析測定。

測定方法

水解度的測定 pH-stat法；清除O^2-·能力測定 NBT法；清除·OH能力測定 脫氧核糖法。

附圖說明

圖1為時間與玉米肽消除自由基活性的關(guān)系。

圖2為溫度與玉米肽消除自由基活性的關(guān)系。

具體實施方式

下面將詳細說明本發(fā)明的具體實施方式：

1.儀器與試劑：

玉米蛋白粉 由禾豐牧業(yè)飼料公司提供，蛋白含量為65.84%；2709堿性蛋白酶 北京房山酶制劑總廠，經(jīng)測定酶活為88433U/g；其它試劑 均為國產(chǎn)分析純。

pHS-25 數(shù)顯pH儀 上海精密儀器廠；

高速冷凍離心機 日本立牌SCR20BC型；

721型分光光度計 上海第三分析儀器廠；

光照箱（光照度達,4500LUX） 自制hh-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋。

2.方法與結(jié)果

時間對酶解反應的影響

時間影響酶的催化反應。隨著反應時間的延長，水解度逐漸增大，玉米肽對自由基清除率也隨之增大，當?shù)孜锏乃舛瘸^了玉米肽清除自由基能力的最適水解度時，玉米肽對自由基的清除率下降，如圖1。從圖1可以看出，在[E]/[S]=9%，pH10.0溫度50℃的條件下，以水解4h效果最佳。

溫度對酶解反應的影響

各種催化反應都有最適的溫度。在E]/[S]=9%，pH10.0，選擇不同的溫度水解4h，見圖2。由圖2可知，溫度為45℃時清除率

開始上升，50℃達到較高水平，55℃以后開始下降，故50℃為該酶解反應最適作用溫度

制備玉米抗氧化肽最佳酶解工藝條件的確定

在上述單因素實驗中，每組實驗只考察一個因素，而酶解反應的最佳條件并不是簡單的將所有這些單因素實驗的最佳結(jié)果疊加在一起，還必須通過正交實驗考察多因素的疊加效果，故借助以上的單因素實驗結(jié)果設計正交實驗，結(jié)果表1。

從表1可以看出，對水解度而言，極差值反映出影響水解度的各因素排列順序為：A>B>D>C，最佳酶解條件為A₁B₃C₃D₃，即pH9.5，[E]/[S]=12%時間5h，

溫度60℃，在此條件下水解度可達35.31%；對清除自由基能力而言，極差值反映出影響對自由基清除能力的各因素的排列順序為：A>B>C>D，最佳酶解條件為A₁B₂C₂D₂，即 pH9.5，[E]/[S]=10%時間4h，溫度55℃，在此條件下玉米肽對 O^2-·和·OH的清除率分別為52.17%和80.26%。本實驗的目的是制備抗氧化肽，故最佳的酶解條件應為：A₁B₂C₂D₂。

對表1的數(shù)據(jù)作進一步分析可以看出，底物的水解度與玉米肽對自由基的清除能力間并不存在線性關(guān)系，只有在特定的水解度（DH=34.92%）時，清除能力最強，超過或者低于這個水解度，清除能力下降。此外，玉米肽清除O^2-·能力與清除·OH能力間存在著顯著的相關(guān)性關(guān)系（r=0.9531,p<0.01），說明在本實驗中水解度對二者的影響是一致的。

表1