1.一種鑒定嘎拉蘋果后代植株的SSR分子標(biāo)記IV,其特征是在檢測(cè)過程中同時(shí)使用,所述分子標(biāo)記為具有如下所示核苷酸序列的2對(duì)SSR引物:
LG5 標(biāo)記Hi04d02:
上游:5,- TTCGTGGCTGAGAAAGGAGT -3,
下游:5,- GTTTGTACGGTGCATTGTGAAAG -3,
LG10 標(biāo)記Hi05b02:
上游:5,- GATGCGGTTTGACTTGCTTC -3,
下游:5,- GTTTCTCCAGCTCCCATAGATTGC -3,。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鑒定嘎拉蘋果后代植株的SSR分子標(biāo)記IV的應(yīng)用,其特征是包括以下步驟:
(1)以蘋果基因組DNA為PCR擴(kuò)增模板,分別以上述SSR分子標(biāo)記為引物對(duì),進(jìn)行PCR擴(kuò)增,反應(yīng)體系為15μL,其中含10×PCR Buffer 1.5 μL、2.5 mM dNTPs mixture 1.2μL、10ng/μL Primers F 1.5μL、10ng/μL Primers R 1.5μL、5U Taq 聚合酶0.15μL、100ng/μL DNA模板0.75 μL,去離子水補(bǔ)足至15μL;
(2)擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性2 min 30 s,94℃變性30 s,60℃退火30 s,72℃延伸40 s,35個(gè)循環(huán),72℃10 min,4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
(3)PCR產(chǎn)物檢測(cè),用8%非變性聚丙烯酰胺電泳,將PCR的每個(gè)反應(yīng)產(chǎn)物加入1/2的非變性Loading Buffer,混勻,150V恒定電壓150min,冰醋酸固定,AgNO3 染色拍照;
(4)用于遺傳連鎖鑒定時(shí),如能擴(kuò)增出上述2對(duì)SSR引物相對(duì)應(yīng)的任意一條特異性條帶,說明待測(cè)蘋果種質(zhì)中含有的遺傳物質(zhì)位于相應(yīng)的遺傳連鎖群,反之,則待測(cè)蘋果種質(zhì)含有的遺傳物質(zhì)不存在相應(yīng)的遺傳連鎖群;
(5)用于花藥培養(yǎng)植株鑒定時(shí),待測(cè)蘋果能擴(kuò)增出上述2對(duì)SSR引物相對(duì)應(yīng)的單獨(dú)的一條特異性條帶,說明待測(cè)蘋果植株為純合材料,如出現(xiàn)兩條條帶,則待測(cè)蘋果植株不是純合材料;
(6)用于品種來源鑒定時(shí),待測(cè)蘋果能擴(kuò)增出上述2對(duì)SSR引物相對(duì)應(yīng)的任意一條特異性條帶,說明待測(cè)蘋果植株來源于嘎拉蘋果,如無特異性條帶擴(kuò)增出來,則待測(cè)蘋果植株不是嘎拉蘋果培育的后代品種。