一種雞黃色羽相關(guān)的分子標記及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種雞黃色羽相關(guān)的分子標記及其應(yīng)用。所述分子標記為SEQIDNO:1所示序列中的第883位處的A/G堿基突變。利用引物SEQIDNO:2和SEQIDNO:3對其進行擴增，將所得擴增產(chǎn)物進行直接測序。本方法操作簡便，結(jié)果可靠。通過對上述A/G突變位點的檢測，可以確定目標雞群黃色羽這一性狀的基因型，也可以通過基因型判別某一個體的羽色是純合子黃色羽還是雜合子黃色羽，為有目的地對雞群羽色性狀進行選擇提供依據(jù)，提高后代雞黃色羽的一致性。
【專利說明】—種雞黃色羽相關(guān)的分子標記及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種雞黃色羽相關(guān)的分子標記及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]雞的羽色是品種的重要特征之一，也是影響其經(jīng)濟價值的一個重要指標。影響雞羽色的主要色素為黑色素，黑色素又可分為兩類，一類是真黑素，呈現(xiàn)褐色或黑色；另一類是嗜黑素，呈黃色或紅色。雞羽毛色素沉著取決于其所含真黑色素與嗜黑素的相對數(shù)量。雞的黑色素起始于胚胎的軀干神經(jīng)脊細胞，在胚胎形成期間就開始分散遷移至真皮中定居，漸布于全身，多數(shù)黑色素細胞聚集于毛囊內(nèi)(Kerje et al.，2003)。
[0003]羽色是一個由眾多基因控制的極其復(fù)雜的性狀，許多位點在黑色素的生成和羽色表達過程中發(fā)揮重要作用，其中一個非常重要的位點是擴展位點(Extension)，該位點影響黑色色素(真黑素)和紅色色素(嗜黑素)的相對分布。在幾種哺乳動物中以及雞上的研究顯示E位點編碼黑素皮質(zhì)激素受體I基因(MClR) (Robbins et al., 1993; Jackson etal., 1994; Kerje et al.，2003)，MClR在兩種類型的黑色素生成中起著關(guān)鍵的作用。
[0004]黑色素的生成過程中MClR基因需要與兩個配體α -促黑素細胞激素(a -MSH)和促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)共同作用，它們與黑色素細胞膜上的MClR基因結(jié)合后，使與受體偶聯(lián)的G蛋白由無活性的二磷酸鳥苷(CDP)型轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘娜姿狲B苷(GTP)型，激活膜上的腺苷酸環(huán)化酶系統(tǒng)，三磷酸腺苷(ATP)轉(zhuǎn)變?yōu)榄h(huán)腺苷酸(cAMP)，cAMP進一步激活酪氨酸激酶，活化酪氨酸酶TYR。TYR催化黑色素細胞內(nèi)的酪氨酸生成多巴，多巴在黑素體內(nèi)聚積到一定的量后，釋放黑色素，如果細胞中的TYR過量，多巴及多巴醌將通過各自的通道合成真黑色素；如果黑素細胞中的TYR過少，酪氨酸則轉(zhuǎn)化為半胱氨酰多巴，從而導(dǎo)致嗜黑素的廣泛表達(于云柱等，2010)。如果MClR基因發(fā)生變異可能導(dǎo)致機體不能合成真黑色素，使雞的羽毛顏色表現(xiàn)為黃色或紅色。
[0005]廣東、廣西及港澳地區(qū)偏好具有“三黃”特征的優(yōu)質(zhì)肉雞，其中一個特征就是黃羽。在優(yōu)質(zhì)黃羽肉雞的選育中，傳統(tǒng)的育種方法是根據(jù)雜交后代雞的表型性狀留種，進行測交檢測，繁殖擴群等步驟，但由于羽色是一個多基因控制的性狀，在此過程中容易出現(xiàn)性狀分離，且選擇進程緩慢。因此，建立一種快速鑒別雞黃色羽相關(guān)基因型的分子方法，可大大縮短育種時間，加速黃色羽肉雞的選育進程，節(jié)約生產(chǎn)成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中缺乏快速鑒別雞黃色羽相關(guān)基因型的方法的缺陷，提供一種雞黃色羽相關(guān)的分子標記。
[0007]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種利用雞黃色羽相關(guān)分子標記快速鑒別雞黃色羽相關(guān)基因型的方法。
[0008]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn):
一種雞黃色羽相關(guān)的分子標記， 所述分子標記為SEQ ID NO:1所示序列中的第883處的Α/G堿基突變。
[0009]一種利用雞黃色羽相關(guān)分子標記快速鑒別雞黃色羽相關(guān)基因型的方法，包括如下步驟:
S1.以雞MClR基因的DNA序列為參考，設(shè)計如下引物并進行PCR擴增:
正向引物 F:5’ —ATCCCAAGGTACACAGTGAC— 3’，
反向引物 R:5’ — GGGCACCCAGGGGACACC— 3’。
[0010]S2.將所得擴增產(chǎn)物直接測序，
若基因型為GG型，則該個體為黃色羽純合子；
若基因型為AG型，則該個體為黃色羽雜合子；
若基因型為AA型，則該個體為野生型，即非黃色羽純合子。[0011 ] 上述分子標記在雞黃色羽性狀輔助選擇中的應(yīng)用。
[0012]本發(fā)明的有益效果是:可以準確的判定個體為黃色羽是純合子還是雜合子。提高雞群羽色的一致性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1是通過PCR獲得的10個品種雞MClR基因上的部分DNA序列，用來尋找分子標記的片段的電泳圖片，瓊脂糖凝膠濃度為1.5%。
[0014]圖2是對上述10個品種黃羽和非黃羽雞MClR基因部分DNA序列進行對比的結(jié)果?！揪唧w實施方式】
[0015]下面結(jié)合說明書附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但本發(fā)明保護的范圍并不局限于此。
[0016]實施例1
51.引物設(shè)計
以NCBI數(shù)據(jù)庫中雞MClR基因⑶S序列(GenBank登錄號:D78272.1)為參考，利用GeneTool軟件設(shè)計一對引物，該引物擴增得到的DNA序列如SEQ ID NO:1所示，全長1538bp ο引物由上海捷瑞生物科技有限公司合成。引物序列如下:
MClR-F:5’ —ATCCCAAGGTACACAGTGAC— 3’
MClR-R:5，— GGGCACCCAGGGGACACC— 3，
52.篩選分子標記
S21.實驗材料如表1所示。
[0017]表1實驗材料
【權(quán)利要求】
1.一種雞黃色羽相關(guān)的分子標記，其特征在于，所述分子標記為SEQ ID NO:1所示序列中的第883處的Α/G堿基突變。
2.權(quán)利要求1所述的分子標記在雞黃色羽性狀輔助選擇中的應(yīng)用。
3.一種利用雞黃色羽相關(guān)分子標記快速鑒別雞黃色羽相關(guān)基因型的方法，其特征在于，包括如下步驟: S1.以雞MClR基因的DNA序列為參考，設(shè)計引物F和R，并進行PCR擴增:所述引物F和R的序列如SEQ ID NO:2~3所示； S2.將所得擴增產(chǎn)物直接測序，若基因型為GG型，則該個體為黃色羽純合子；若基因型為AG型，則該個體為黃色羽雜合子；若基因型為AA型，則該個體為野生型，即非黃色羽純合子。
【文檔編號】C12N15/11GK103898102SQ201410050813
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年2月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月14日
【發(fā)明者】張細權(quán), 許繼國, 聶慶華, 吳海清 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)