1.一種利用狹旋毛殼菌發(fā)酵生產(chǎn)可皆霉素的方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)菌種活化:將狹旋毛殼菌種接種平板培養(yǎng)基上,培養(yǎng),獲得活化菌種;
(2)發(fā)酵培養(yǎng):將步驟(1)制備的活化菌種接種于培養(yǎng)基B中,溫度為24~26℃條件下靜置培養(yǎng)38~42天,獲得發(fā)酵物;培養(yǎng)基B的配方為:50~70 g大米,100 ml水;
(3)乙酸乙酯提取物的制備:將步驟(2)制備的發(fā)酵物用乙酸乙酯浸取,得提取液,減壓回收乙酸乙酯后得到乙酸乙酯提取物;
(4)可皆霉素的制備:將步驟(3)制備的乙酸乙酯提取物上柱分離,得可皆霉素。
2.如權(quán)利要求1所述利用狹旋毛殼菌發(fā)酵生產(chǎn)可皆霉素的方法,其特征在于,步驟(1)所用的狹旋毛殼菌種保藏的分類(lèi)學(xué)名稱(chēng)為狹旋毛殼CLC001,保藏號(hào)為CCTCC NO:M 2016231,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。
3.如權(quán)利要求1所述利用狹旋毛殼菌發(fā)酵生產(chǎn)可皆霉素的方法,其特征在于,所述步驟(2)中培養(yǎng)基B的制備方法如下:將大米和水按比例混合,121℃下高壓滅菌40分鐘。
4.如權(quán)利要求1所述利用狹旋毛殼菌發(fā)酵生產(chǎn)可皆霉素的方法,其特征在于,所述步驟(4)中上柱分離的具體步驟如下:用80~100目硅膠拌樣后裝柱,固定相為200~300目硅膠,以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫,硅膠薄層層析檢測(cè),合并二氯甲烷-甲醇的體積比為100:(2~4)的流份,30~40℃下減壓回收二氯甲烷和甲醇,再用二氯甲烷-甲醇體積比為1:1混合溶劑溶解,經(jīng)Sephadex LH-20層析,得可皆霉素。
5.如權(quán)利要求1所述利用狹旋毛殼菌發(fā)酵生產(chǎn)可皆霉素的方法,其特征在于,所述步驟(1)中平板培養(yǎng)基配方為:酵母膏10g/L,葡萄糖40g/L,蛋白胨10g/L,瓊脂粉20g/L,pH6.0±0.1。
6.如權(quán)利要求1所述利用狹旋毛殼菌發(fā)酵生產(chǎn)可皆霉素的方法,其特征在于,所述步驟(3)中將發(fā)酵物用乙酸乙酯浸取時(shí)的工藝條件如下:加入乙酸乙酯,20~25℃下冷浸12h,用紗布過(guò)濾,得到乙酸乙酯提取液,反復(fù)提取3次,合并提取液。
7.如權(quán)利要求1所述利用狹旋毛殼菌發(fā)酵生產(chǎn)可皆霉素的方法,其特征在于,所述步驟(4)中將乙酸乙酯提取物與80~100目硅膠拌樣時(shí),乙酸乙酯提取物與80~100目硅膠的重量比為1︰2。