專利名稱：小穴殼菌素化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種聚酮類化合物，尤其是涉及一種源于紅樹(shù)林真菌(小穴殼菌素)的具有抗腫瘤活性的聚酮類化合物及其制備方法，以及它們?cè)谥苽淇鼓[瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
紅樹(shù)林為分布于熱帶和亞熱帶海岸潮間帶的木本植物群落，是海灘上特有的森林類型。生活在紅樹(shù)林區(qū)的紅樹(shù)林真菌(mangrove fungi)由于所處的生境特殊，其遺傳及生理特性與其他生境中的微生物有所不同，具有產(chǎn)生新型活性物質(zhì)的潛力，是開(kāi)發(fā)新藥的重要資源。近年來(lái)對(duì)紅樹(shù)林真菌活性物質(zhì)的研究引起了國(guó)內(nèi)外的關(guān)注，目前已從這類真菌中發(fā)現(xiàn)了一些具有藥用價(jià)值的新化合物，如Isaka等(Isaka，M.，Chotika，S.，Morakot，T.Aigialomycins A-E，new resorcylic macrolides from the marine mangrove fungusAigialus parvus.J.Org.Chem.2002，671561-1566.)從紅樹(shù)林真菌Aigialus parvus中分離到5種新的大環(huán)內(nèi)酯類化合物(aigialomycins A～E)，其中aigialomycin D對(duì)KB細(xì)胞和Vero細(xì)胞的IC50分別為3.0μg/mL和1.8μg/mL。Lin等(Lin，Y.C.，Wu，X.Y.，F(xiàn)eng，S.，et al.Five Unique CompoundsXyloketals from Mangrove Fungus Xylaria sp.fromthe South China Sea Coast.J.Org.Chem.2001，666252-6256.)從南海紅樹(shù)林真菌Xylaria sp.(no.2508)發(fā)酵液中分離到5種獨(dú)特的化合物xyloketals A～E，當(dāng)xyloketals A濃度為1.5×10-6mol/L時(shí)對(duì)乙酰膽堿酯酶有抑制活性。所以我們的研究具有較高的理論價(jià)值和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類新的來(lái)源于紅樹(shù)林真菌的具有潛在藥用價(jià)值的化合物及其提取分離方法，以及它們?cè)谥苽淇鼓[瘤藥物方面的應(yīng)用。
本發(fā)明所說(shuō)的小穴殼菌素化合物是從紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3(簡(jiǎn)稱HTF3)的發(fā)酵培養(yǎng)物中提取分離到的四種結(jié)構(gòu)類似的新化合物，結(jié)構(gòu)分別為小穴殼菌素A，(3，5-Dihydroxy-2-octanoyl-phenyl)-acetic acid methyl ester(化合物A)、小穴殼菌素B，[3，5-Dihydroxy-2-(1-methoxy-octyl)-phenyl］-acetic acid methyl ester(化合物B)、小穴殼菌素C，(3，5-Dihydroxy-2-nonanoyl-phenyl)-acetic acid ethyl ester(化合物C)和小穴殼菌素D，6，8-Dihydroxy-1-(6-hydroxy-heptyl)-isochroman-3-one(化合物D)。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物A、化合物B、化合物C、化合物D的結(jié)構(gòu)式分別為 本發(fā)明所用的紅樹(shù)林真菌HTF3已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC，中國(guó)武漢大學(xué)校內(nèi))，保藏號(hào)為CCTCC NOM203067，保藏日期為2003年8月29日。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物A、B、C和D可從紅樹(shù)林真菌HTF3的發(fā)酵培養(yǎng)物中提取分離得到，制備方法的具體步驟如下(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)按質(zhì)量比培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面培養(yǎng)；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)按質(zhì)量比發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得到組分A；菌體用甲醇充分浸提，合并提取液減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得到組分B；水相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分A用硅膠柱和反相硅膠柱層析后，用高效液相色譜分離，收集保留時(shí)間為11.6min的洗脫峰，濃縮后得到化合物A；(6)組分B用硅膠柱層析和凝膠柱層析后，再用硅膠柱純化，按體積比收集氯仿∶甲醇＝(30～60)∶1的組分得到化合物B；(7)組分C用硅膠柱層析，氯仿—甲醇梯度洗脫，得到組分1和組分2，組分1用反相硅膠柱得到化合物C，組分2用硅膠柱純化得到化合物D。
在步驟1中，挑取菌種接入斜面，28℃培養(yǎng)5-15天。
在步驟2中，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，溫度28℃、以100-160轉(zhuǎn)/分震搖，培養(yǎng)5-10天。
在步驟4中，水相用乙酸乙酯萃取2-5遍。
在步驟5中，組分A反復(fù)用硅膠柱和反相硅膠柱層析后，用高效液相色譜Nova-Pak@silica6μm，7.8mm×300mm，WATO2582分離，洗脫劑為氯仿—甲醇，流量為1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物A、化合物B、化合物C、化合物D具有抗腫瘤活性，可用于制備抗腫瘤藥物。由此可見(jiàn)，本發(fā)明具有較高的理論價(jià)值和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1化合物A、B、C、D的分離制備方法(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基以克為單位馬鈴薯去皮、切碎20，加水煮沸，紗布過(guò)濾，濾液中加葡萄糖2，瓊脂2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面。挑取菌種接入斜面，28℃培養(yǎng)10天；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基以克為單位馬鈴薯去皮、切碎20，加水煮沸，紗布過(guò)濾，濾液中加葡萄糖2，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，溫度28℃、震搖(120轉(zhuǎn)/分)培養(yǎng)7天；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)液用4層紗布過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用等體積乙酸乙酯萃取4遍，有機(jī)相于50℃減壓濃縮，得到組分A；菌體在室溫用甲醇充分浸提，合并提取液于50℃減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得到組分B；水相用乙酸乙酯萃取3遍，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分A反復(fù)用硅膠柱層析后，再用反相硅膠柱(22g RP-18)分離，收集甲醇—水＝7∶3(V/V)的組分，濃縮后用高效液相色譜分離(Nova-Pak@silica6μm，7.8×300mm，WAT02582)，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝40∶1(V/V)，流量為1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；收集保留時(shí)間為11.6min的洗脫峰，濃縮后得到化合物A(3mg)
(6)組分B用硅膠柱層析，收集氯仿∶甲醇＝30∶1(V/V)的組分，濃縮后用凝膠柱(45g Sephadex LH-20)層析，再用硅膠柱純化，收集氯仿∶甲醇＝50∶1(V/V)的組分得到化合物B(18mg)。
(7)組分C用硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，得到組分1和組分2。組分1用反相硅膠柱(45g RP-18)分離，收集丙酮∶水＝1∶1(V/V)的組分，濃縮后再用硅膠柱純化，收集石油醚∶丙酮＝5∶1(V/V)的組分得到化合物C(10mg)。組分2用反相硅膠柱(45gRP-18)分離，收集甲醇∶水＝1∶1(V/V)的組分，濃縮后再用硅膠柱純化，收集石油醚∶丙酮＝4∶1(V/V)的組分得到化合物D(30mg)。
化合物A的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)黃色油狀物；ESIMS m/z 309.0[M+H]+；HRESIMS m/z 331.1527[M+Na]+(calcd for C17H24O5Na，331.1521)；1H NMR and13C NMR(500MHz，CDCl3)見(jiàn)表1和表2。
表1化合物A、B、C和D的1H-NMR數(shù)據(jù)

a)CDCl3；b)CD3OD
表2化合物A、B、C和D的13C-NMR數(shù)據(jù)

a)CDCl3；b)CD3OD化合物B的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)無(wú)色無(wú)定形粉末；ESIMS m/z 347.1[M+Na]+；HRESIMS m/z 347.1832 [M+Na]+(calcd for C18H28O5Na，347.1834)；1H NMR and13C NMR(400MHz，CDCl3)見(jiàn)表1和表2。
化合物C的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)黃色油狀物；ESIMS m/z 337.0[M+H]+(calcd for C19H28O5)；1H NMR and13C NMR(400MHz，CDCl3)見(jiàn)表1和表2。
化合物D的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)黃色油狀物；ESIMS m/z 295.1[M+H]+(calcd for C16H22O5)；1H NMR and13C NMR(500MHz，CD3OD)見(jiàn)表1和表2。
實(shí)施例2采用體外測(cè)定細(xì)胞毒的MTT(Methyl Thiazolyltetrazolium)法檢測(cè)化合物A、B、C、D的抗腫瘤活性(1)腫瘤細(xì)胞株人B淋巴瘤Raji細(xì)胞、人口腔皮樣癌KB細(xì)胞和人肝癌HepgII細(xì)胞(2)材料a MTT(噻唑藍(lán))用0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS)溶解MTT(Thiazoyl blue)到終濃度5mg/ml，0.220μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，分裝后于4℃避光保存；
b SDS裂解液100g十二烷基磺酸鈉(SDS)，1N HCl10ml，加熱溶解，蒸餾水定容至1000ml。
c細(xì)胞培養(yǎng)基(全培)一袋10g干粉RMPI 1640(Gibco Co.Ltd.)細(xì)胞培養(yǎng)基溶于1L雙蒸水中；加入2g NaHCO3攪勻溶解后封口，置于4℃過(guò)夜，以自然沉淀除去雜質(zhì)；次日加入10-15％已滅活(56℃，30min)的小牛血清及1％多抗母液；混勻后用0.22μm孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。
(3)化合物A、B、C和D的配置分別取一定量的化合物A、B、C和D，用甲醇溶解并調(diào)整濃度為10mg/ml，0.22μm孔徑的濾膜過(guò)濾除菌，4℃保存?zhèn)溆谩?br> (4)腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)a細(xì)胞活化取一干凈燒杯，裝入干凈溫水，水溫調(diào)至37-40℃；將凍存管從液氮中取出迅速投入溫水解凍，并將凍存細(xì)胞接入預(yù)裝有細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％ CO2、100％濕度的條件下培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，及時(shí)更換培養(yǎng)液、分瓶。
b細(xì)胞計(jì)數(shù)選對(duì)數(shù)生成期細(xì)胞，胰酶消化，移入離心管中，加全培至10ml，取一滴滴入計(jì)數(shù)板一側(cè)凹槽中，倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)。調(diào)整細(xì)胞數(shù)至1×105/ml。
c活性檢測(cè)①96孔板在超凈工作臺(tái)內(nèi)紫外光下照射1小時(shí)；②在各孔中加入細(xì)胞懸液80μl，37℃、5％CO2、100％濕度的條件下培養(yǎng)24小時(shí)；③加入20μl用全培梯度稀釋成一系列濃度的A、B、C和D溶液，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)；④每孔加入MTT溶液10μl，輕輕震搖使顆粒溶解，37℃放置3小時(shí)；⑤取出培養(yǎng)板，每孔加入10％SDS溶液100μl，37℃溶解過(guò)夜；⑥用酶聯(lián)反應(yīng)儀590nm測(cè)定各孔吸光值，按下列公式計(jì)算抑制率抑制率＝(對(duì)照組OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值)/對(duì)照組OD值×100％⑦以抑制率為縱坐標(biāo)，受試樣品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)作圖，求出抑制率為50％時(shí)的濃度即為IC50。
d實(shí)驗(yàn)結(jié)果化合物A-D對(duì)三種腫瘤細(xì)胞均具有抗腫瘤活性，但其活性及抗瘤譜有些差異。化合物B和化合物C對(duì)人淋巴瘤Raji細(xì)胞的IC50均小于2μg/mL，而化合物A和化合物D對(duì)人淋巴瘤Raji細(xì)胞的IC50均大于20μg/mL；化合物A-D對(duì)人口腔上皮癌KB細(xì)胞和人肝癌HepgII細(xì)胞的IC50均大于10μg/mL。
實(shí)施例3與實(shí)施例1類似，其區(qū)別在于在紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)中，濾液中加葡萄糖1，瓊脂1.8，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面。挑取菌種接入斜面，28℃培養(yǎng)10天；在紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)中震搖160轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)5天；將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)液用3層紗布過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；發(fā)酵液上清用等體積乙酸乙酯萃取3遍，水相用乙酸乙酯萃取5遍。
實(shí)施例4與實(shí)施例1類似，其區(qū)別在于在紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)中，濾液中加葡萄糖3，瓊脂1.5，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面。挑取菌種接入斜面，28℃培養(yǎng)10天；在紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)中震搖100轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)10天；將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)液用5層紗布過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；發(fā)酵液上清用等體積乙酸乙酯萃取2遍，水相用乙酸乙酯萃取2遍。
權(quán)利要求
1.小穴殼菌素化合物A，其特征在于其結(jié)構(gòu)為
2.小穴殼菌素化合物B，其特征在于其結(jié)構(gòu)為
3.小穴殼菌素化合物C，其特征在于其結(jié)構(gòu)為
4.小穴殼菌素化合物D，其特征在于其結(jié)構(gòu)為
5.如權(quán)利要求1所述的小穴殼菌素化合物A的制備方法，其特征在于其步驟為(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)按質(zhì)量比培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面培養(yǎng)；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)按質(zhì)量比發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得到組分A；菌體用甲醇充分浸提，合并提取液減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得到組分B；水相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分A用硅膠柱和反相硅膠柱層析后，用高效液相色譜分離，收集保留時(shí)間為11.6min的洗脫峰，濃縮后得到化合物A。
6.如權(quán)利要求2所述的小穴殼菌素化合物B的制備方法，其特征在于其步驟為(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)按質(zhì)量比培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面培養(yǎng)；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)按質(zhì)量比發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得到組分A；菌體用甲醇充分浸提，合并提取液減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得到組分B；水相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分A用硅膠柱和反相硅膠柱層析后，用高效液相色譜分離，收集保留時(shí)間為11.6min的洗脫峰，濃縮后得到化合物A；(6)組分B用硅膠柱層析和凝膠柱層析后，再用硅膠柱純化，按體積比收集氯仿∶甲醇＝(30～60)∶1的組分得到化合物B。
7.如權(quán)利要求3所述的小穴殼菌素化合物C的制備方法，其特征在于其步驟為(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)按質(zhì)量比培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面培養(yǎng)；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)按質(zhì)量比發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得到組分A；菌體用甲醇充分浸提，合并提取液減壓濃縮，得到石油醚相和水相，水相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分C用硅膠柱層析，氯仿—甲醇梯度洗脫，得到組分1和組分2。組分1用反相硅膠柱和硅膠柱純化得到化合物C。
8.如權(quán)利要求4所述的小穴殼菌素化合物D的制備方法，其特征在于其步驟為(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)按質(zhì)量比培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面培養(yǎng)；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)按質(zhì)量比發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得到組分A；菌體用甲醇充分浸提，合并提取液減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得到組分B；水相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分C用硅膠柱層析，氯仿—甲醇梯度洗脫，得到組分1和組分2。組分2用硅膠柱純化得到化合物D。
9.如權(quán)利要求1或2或3或4所述的小穴殼菌素化合物用于制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。
全文摘要
小穴殼菌素化合物及其制備方法和應(yīng)用，涉及一種聚酮類化合物，尤其是涉及一種小穴殼菌素的具有抗腫瘤活性的聚酮類化合物及其制備方法，以及它們?cè)谥苽淇鼓[瘤藥物中的應(yīng)用。提供一類新的來(lái)源于紅樹(shù)林真菌的具有潛在藥用價(jià)值的化合物及其提取分離方法，以及它們?cè)谥苽淇鼓[瘤藥物方面的應(yīng)用。步驟為將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)、過(guò)濾，得發(fā)酵液上清和菌體；發(fā)酵液上清萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得組分A；菌體用甲醇充分浸提，減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得組分B；水相萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得組分C；組分A、B、C層析后，再分別用高效液相色譜分離、硅膠柱純化、洗脫得化合物A、B、C、D。
文檔編號(hào)A61K31/216GK1733693SQ20051009188
公開(kāi)日2006年2月15日 申請(qǐng)日期2005年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月15日
發(fā)明者沈月毛, 杜希萍, 鄭忠輝, 黃耀堅(jiān), 宋思揚(yáng), 蘇文金 申請(qǐng)人:廈門(mén)大學(xué)