技術(shù)特征：

1.一種基于單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記的桑樹(shù)遺傳分型方法，其特征是由以下步驟構(gòu)成：

(1)種群調(diào)查與取樣；

(2)DNA提?。?/p>

(3)高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，其中，高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的方法為：提取樣本總RNA，用Oligo(dT)的磁珠富集分離mRNA，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成雙鏈cDNA，構(gòu)建轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫(kù)，插入片段長(zhǎng)度為500bp，在Illumina HiSeq2500測(cè)序儀上進(jìn)行高通量測(cè)序，使用Trinity軟件對(duì)測(cè)序片段進(jìn)行拼接，從而得到基因序列；

(4)篩選種群的目標(biāo)基因TR2222；

(5)根據(jù)目標(biāo)基因TR2222設(shè)計(jì)引物，正向引物如序列表中SEQ ID NO:1所示；反向引物如序列表中SEQ ID NO:2所示；

(6)PCR擴(kuò)增，其中，PCR擴(kuò)增體系為50μl：36.5μl ddH₂O、5μl 10×Buffer(含Mg²⁺)、4μl dNTP Mixture(2.5mM each)、0.5μl TaKaRa Taq(5U/μl)、2μl Template DNA(20-40ng/μl)、1μl正向引物、1μl反向引物；PCR反應(yīng)參數(shù)為：94℃預(yù)變性5min、94℃30s、55℃30s、72℃1min，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min；

(7)將(6)中PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，回收目標(biāo)片段，對(duì)回收產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序；

(8)序列拼接、比對(duì)，鑒定記錄單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)；其中，所述目標(biāo)基因TR2222在桑樹(shù)種群中有8個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，目標(biāo)基因TR2222基因片段如序列表中SEQ ID NO:3所示，其中8個(gè)單核苷酸位點(diǎn)分別位于13、115、201、297、384、386、486、551。