1.一種電子束輻照聯(lián)合酶法分離純化高親和鈣的麥胚多肽的方法,其特征在于:以麥胚分離蛋白為原料,將麥胚分離蛋白配成弱堿性的懸濁液,該懸濁液經(jīng)過(guò)電子束輻照后冷凍干燥備用,利用堿性蛋白酶水解麥胚分離蛋白,得到麥胚多肽混合物,混合物經(jīng)過(guò)超濾、陰離子交換色譜、凝膠過(guò)濾色譜以及RP-HPLC分離純化得麥胚多肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述懸濁液的制備方法為:將麥胚分離蛋白與去離子水按照料液w/v比為10~40%混合均勻,添加堿液,形成pH為7.5~8.5的懸濁液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述電子束輻照的的方法為:懸濁液密封于透明、耐輻照的密封袋中,懸濁液的厚度控制在1~2cm,電子輻照劑量為1~10kGy,輻照條件為1.5~5.0MeV/20~40mA。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述堿性蛋白酶水解條件為:蛋白濃度為2~5%,酶解pH為8.0~8.5、溫度50~60℃、酶與蛋白重量配比為1:50~1:100。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述分離純化的具體步驟為麥胚多肽首先利用超濾過(guò)程進(jìn)行分離,截取<1kDa、1~3kDa、>3kDa的組分;收集鈣螯合率最高的組分通過(guò)DEAE-FF 16/10陰離子交換色譜進(jìn)行分離,洗脫液為濃度梯度為含有0~0.5M NaCI的Tris-HCl,流速為5mL/min,洗脫峰在214nm下進(jìn)行測(cè)量;收集鈣螯合率最高的組分通過(guò)Superdex Peptide 10/300凝膠過(guò)濾色譜進(jìn)行分離,洗脫液為去離子水,流速為0.5mL/min,洗脫峰在214nm下進(jìn)行測(cè)定;收集鈣螯合率最高的組分通過(guò)RP-HPLC進(jìn)行分離,分離條件是用5~30%乙睛溶液作為梯度洗脫液,流速為lmL/min,洗脫液自含體積比為5%乙睛和95%水的混合液開(kāi)始,至體積比為30%乙睛和70%水的混合液結(jié)束,進(jìn)行梯度洗脫,收集鈣螯合率最高的組分。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述多肽的氨基酸序列為Phe-Val-Asp-Val-Thr。