本發(fā)明涉及抗生素發(fā)酵領域，具體涉及一種通過發(fā)酵調(diào)控來影響微生物代謝流，從而改變不同組分含量的方法。
背景技術：
：替考拉寧系替考游動放線菌發(fā)酵產(chǎn)生的一種糖肽類抗生素，為六個主要組分和四個次要組分的混合物。替考拉寧A2(TA2)是替考拉寧的主要組分，它是由五個化學結(jié)構(gòu)十分相似的組分(TA2-1TA2-2TA2-3TA2-4TA2-5)的復合物，五個組分中以TA2-2為主要有效成分。替考拉寧A2(TA2)五個組分的差異在于酰基側(cè)鏈的不同，各組分在物理化學性質(zhì)方面極為相似，常規(guī)的分離純化方法很難讓這五個組分實現(xiàn)有效分離。歐洲藥典關于替考拉寧組分含量的要求如下：如果發(fā)酵過程中產(chǎn)生的替考拉寧A2(TA2)五個組分含量不能得到合理調(diào)控，單靠提取過程很難達到歐洲藥典關于組分含量的要求。即使通過一定的純化手段使產(chǎn)品符合藥典的要求，也會導致收率極低、生產(chǎn)成本急劇增加。因此通過發(fā)酵調(diào)控使替考拉寧A2(TA2)五個組分的含量符合藥典的要求，可大幅度地降低生產(chǎn)成本和提高產(chǎn)品質(zhì)量。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明是為了解決原有發(fā)酵工藝條件下發(fā)酵液中替考拉寧A2(TA2)五個組分的比例不符合歐洲藥典的問題，經(jīng)過改進發(fā)酵調(diào)控技術后，發(fā)酵液中替考拉寧A2(TA2)五個組分的含量均能符合歐洲藥典要求，不需要在發(fā)酵后通過純化手段調(diào)節(jié)替考拉寧組分含量，可大幅度地降低生產(chǎn)成本和提高產(chǎn)品質(zhì)量。本發(fā)明人在優(yōu)化發(fā)酵工藝時發(fā)現(xiàn)，通過適時的發(fā)酵調(diào)控和補料可有效提高替考拉寧的發(fā)酵產(chǎn)量和控制替考拉寧A2(TA2)五個組分的含量在藥典要求合理范圍內(nèi)。一種發(fā)酵法生產(chǎn)替考拉寧并調(diào)控其組分含量的方法，將種子培養(yǎng)基培養(yǎng)的成熟的種子接種到含有發(fā)酵液培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中培養(yǎng)，接種量10％；全程發(fā)酵溫度28℃，罐壓0.03-0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn)速600rpm，氣比0.4-0.6v/v/m；當發(fā)酵液pH降至5.8后回升至6.0時，補入發(fā)酵液體積0.4％的正丁醇；待發(fā)酵的pH值回升至6.8時補入0.04％質(zhì)量的纈氨酸，24h后補入0.02％質(zhì)量的纈氨酸，補料后繼續(xù)培養(yǎng)至放罐。所述的一種發(fā)酵法生產(chǎn)替考拉寧并調(diào)控其組分含量的方法，種子培養(yǎng)基配比如下：所述的一種發(fā)酵法生產(chǎn)替考拉寧并調(diào)控其組分含量的方法，發(fā)酵培養(yǎng)基配比如下：所述的一種發(fā)酵法生產(chǎn)替考拉寧并調(diào)控其組分含量的方法，發(fā)酵液培養(yǎng)基使用純化水配制，消毒前使用10％液堿調(diào)節(jié)pH值至7.0-7.2，消毒溫度121℃，維持25分鐘。具體實施方式：以下實施例進一步描述本發(fā)明的制備過程和有益效果，實施例僅用于例證的目的，不限制本發(fā)明的范圍，同時本領域普通技術人員根據(jù)本發(fā)明所做的顯而易見的改變和修飾也包含在本發(fā)明范圍之內(nèi)。實施例1：種子培養(yǎng)種子培養(yǎng)基配比如下：序號原材料名稱重量配比(％)1玉米淀粉4.02葡萄糖1.03黃豆餅粉2.54蛋白胨0.55硫酸銨0.256氯化鈉0.47七水硫酸鎂0.0258磷酸二氫鉀0.039輕質(zhì)碳酸鈣0.4使用純化水配制，消毒前使用10％液堿調(diào)節(jié)pH值至7.0-7.3，消毒溫度121℃，維持25分鐘。溫度：27-29℃，實際全程28℃罐壓：0.03-0.05MPa。攪拌轉(zhuǎn)速：300-500rpm氣比：0.4-0.6v/v/m培養(yǎng)時間30-40h；種子液生長30-40h，pH降至6.0以下，濕菌重在18-20％左右，視為種子成熟。將成熟的種子接種到發(fā)酵罐中，接種量為10％。實施例2發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基配比如下：序號原材料名稱重量配比(％)1玉米淀粉3.52葡萄糖2.03黃豆餅粉0.64棉籽餅粉1.05酵母粉2.26甘油1.07氯化鈉0.18七水硫酸鎂0.039磷酸二氫鉀0.0610沉淀碳酸鈣0.411纈氨酸0.06消毒前使用10％液堿調(diào)節(jié)pH值至7.0-7.2，消毒溫度121℃，維持30分鐘。發(fā)酵罐接種量：10％。溫度：27-29℃，實際全程28℃罐壓：0.03-0.05MPa。攪拌轉(zhuǎn)速：全程400rpm氣比：0.4-0.6v/v/m發(fā)酵效價：4.0g/L替考拉寧各組分含量：A2-1：9％A2-2：57％A2-3：10％A2-4：15％A2-5：9％。實施例3：發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基配比如下：序號原材料名稱重量配比(％)1玉米淀粉3.52葡萄糖2.03黃豆餅粉0.64棉籽餅粉1.05酵母粉2.26甘油1.07氯化鈉0.18七水硫酸鎂0.039磷酸二氫鉀0.0610沉淀碳酸鈣0.411纈氨酸0.06消毒前使用10％液堿調(diào)節(jié)pH值至7.0-7.2，消毒溫度121℃，維持30分鐘。發(fā)酵罐接種量10％。溫度：27-29℃，實際全程28℃罐壓：0.03-0.05MPa。攪拌轉(zhuǎn)速：全程600rpm氣比：0.8-1.2v/v/m發(fā)酵效價：4.5g/L替考拉寧各組分含量：A2-1：5％A2-2：62％A2-3：9％A2-4：20％A2-5：4％。實施例4：發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基配比如下：序號原材料名稱重量配比(％)1玉米淀粉3.52葡萄糖2.03黃豆餅粉0.64棉籽餅粉1.05酵母粉2.26甘油1.07氯化鈉0.18七水硫酸鎂0.039磷酸二氫鉀0.0610沉淀碳酸鈣0.4使用純化水配制，消毒前使用10％液堿調(diào)節(jié)pH值至7.0-7.2，消毒溫度121℃，維持25分鐘。發(fā)酵罐接種量10％。溫度：27-29℃，實際全程28℃罐壓：0.03-0.05MPa。攪拌轉(zhuǎn)速：全程400rpm氣比：0.4-0.6v/v/m補料：待發(fā)酵液的pH回升至6.8時，補入0.04％質(zhì)量的纈氨酸，大約在50-70h。24h后補入0.02％質(zhì)量的纈氨酸，補料后繼續(xù)培養(yǎng)。發(fā)酵效價：4.7g/L替考拉寧各組分含量：A2-1：10％A2-2：47％A2-3：11％A2-4：15％A2-5：17％。實施例5：發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基配比如下：序號原材料名稱重量配比(％)1玉米淀粉3.52葡萄糖2.03黃豆餅粉0.64棉籽餅粉1.05酵母粉2.26甘油1.07氯化鈉0.18七水硫酸鎂0.039磷酸二氫鉀0.0610沉淀碳酸鈣0.4使用純化水配制，消毒前使用10％液堿調(diào)節(jié)pH值至7.0-7.2，消毒溫度121℃，維持25分鐘。發(fā)酵罐接種量：10％。溫度：27-29℃，實際全程28℃罐壓：0.03-0.05MPa。攪拌轉(zhuǎn)速：全程400rpm氣比：0.8-1.2v/v/m補料：發(fā)酵液pH降至5.8回升至6.0時，補入發(fā)酵液體積0.4％正丁醇，大約在15-20h左右。待發(fā)酵的pH值回升至6.8時補入0.04％質(zhì)量的纈氨酸，大約在50-70h左右。24h后補入0.02％質(zhì)量的纈氨酸，補料后繼續(xù)培養(yǎng)至放罐。發(fā)酵效價：5.0g/L替考拉寧各組分含量：A2-1：12％A2-2：48％A2-3：11％A2-4：15％A2-5：14％。實施例6：發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基配比如下：序號原材料名稱重量配比(％)1玉米淀粉3.52葡萄糖2.03黃豆餅粉0.64棉籽餅粉1.05酵母粉2.26甘油1.07氯化鈉0.18七水硫酸鎂0.039磷酸二氫鉀0.0610沉淀碳酸鈣0.4使用純化水配制，消毒前使用10％液堿調(diào)節(jié)pH值至7.0-7.2，消毒溫度121℃，維持25分鐘。發(fā)酵罐接種量：10％。溫度：27-29℃，實際全程28℃罐壓：0.03-0.05MPa。攪拌轉(zhuǎn)速：全程600rpm氣比：0.4-0.6v/v/m補料：發(fā)酵液pH降至5.8回升至6.0時，補入發(fā)酵液體積0.4％正丁醇，大約在15-20h左右。待發(fā)酵的pH值回升至6.8時補入0.04％質(zhì)量的纈氨酸，大約在50-70h左右。24h后補入0.02％質(zhì)量的纈氨酸。補料后繼續(xù)培養(yǎng)至放罐。發(fā)酵效價：5.5g/L替考拉寧各組分含量：A2-1：11％A2-2：52％A2-3：12％A2-4：16％A2-5：9％。當前第1頁1 2 3