1.從龍脷葉中同時分離槲皮素-3-0-龍膽二糖苷和山柰酚-3-0-龍膽二糖苷的方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)提取
以龍脷葉藥材為原料,粉碎成1~4mm的粗粉,然后按照每千克原料加入乙醇溶液6升,加入70%乙醇溶液,回流提取3-4次,每次2-3小時,提取液過濾,收集、合并,得提取液Ⅰ;
(2)濃縮
將步驟(1)所得的提取液Ⅰ回收乙醇后,濃縮至原提取液Ⅰ體積的15-25%,為提取液Ⅱ;
(3)大孔樹脂柱富集與洗脫
將步驟(2)所得的提取液Ⅱ過大孔樹脂柱進(jìn)行吸附,用純化水清洗至無色后,再用60-70%乙醇溶液洗脫產(chǎn)品段,至流出液無色,收集、合并洗脫液,然后將洗脫液減壓濃縮,回收乙醇,得提取液Ⅲ;
(4)聚酰胺樹脂柱富集與洗脫
將步驟(3)所得的提取液Ⅲ過聚酰胺樹脂柱進(jìn)行吸附,先用10%乙醇溶液清洗聚酰胺樹脂柱至無色后,再用90%乙醇溶液洗脫產(chǎn)品段,至流出液無色,收集、合并洗脫液,然后將洗脫液減壓濃縮,回收乙醇后,得含有兩種目標(biāo)產(chǎn)物的濃縮液,為提取液Ⅳ;
(5)高效制備液相色譜儀分離
取步驟(4)所得的提取液Ⅳ用0.45μm有機(jī)膜過濾,收集濾液,然后濾液進(jìn)樣,進(jìn)行槲皮素-3-0-龍膽二糖苷單體與山柰酚-3-0-龍膽二糖苷單體的制備分離,并針對性收集槲皮素-3-0-龍膽二糖苷與山柰酚-3-0-龍膽二糖苷兩種單體的制備餾分溶液;在此過程中,紫外檢測器以波長350nm,進(jìn)行在線檢測;
(6)產(chǎn)品回收
將步驟(5)中進(jìn)行高效制備液相色譜分離得到的槲皮素-3-0-龍膽二糖苷與山柰酚-3-0-龍膽二糖苷兩種單體的制備餾分溶液,加熱回收甲醇,槲皮素-3-0-龍膽二糖苷、山柰酚-3-0-龍膽二糖苷單體在水溶液中大量析出,放置室溫后,用漏斗過濾析出晶體,過濾固體于65℃條件下干燥12小時,即得到槲皮素-3-0-龍膽二糖苷單體及山柰酚-3-0-龍膽二糖苷單體目標(biāo)產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從龍脷葉中同時分離槲皮素-3-0-龍膽二糖苷和山柰酚-3-0-龍膽二糖苷的方法,其特征在于,在步驟(5)中,色譜條件為:色譜柱填料為C18填料;柱溫為室溫;流速為1.0mL/min;流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液,且兩者的體積比為46比54。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從龍脷葉中同時分離槲皮素-3-0-龍膽二糖苷和山柰酚-3-0-龍膽二糖苷的方法,其特征在于,所述槲皮素-3-0-龍膽二糖苷、山柰酚-3-0-龍膽二糖苷單體產(chǎn)品的純度復(fù)檢采用反相分析型液相色譜,色譜條件為:以C18為填充劑;以甲醇-0.1%磷酸水溶液為流動相,兩者體積比為46比54;流速1.0mL/min;檢測波長為350nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從龍脷葉中同時分離槲皮素-3-0-龍膽二糖苷和山柰酚-3-0-龍膽二糖苷的方法,其特征在于,槲皮素-3-0-龍膽二糖苷與山柰酚-3-0-龍膽二糖苷純度分別達(dá)到99%以上。