白花龍膽的hplc檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及白花龍膽的HPLC檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] （b0ng ji0n，"榜間"），"榜"藏語意為"高山草甸"，"間"有"裝飾"之意， 即"高山草甸的點綴"，中文名，龍膽花?！毒е楸静荨分袣w為的花類藥物。以花色的不同常 分為白、藍、黑三種，分別為"榜間嘎保"（中文名，白花龍膽），為花白色者，深秋生長在高山 寒涼地帶，葉狀如秦艽葉；無莖，從地面開出四、五朵白花，有紅色光澤，花基部合生。"榜間 恩保"（藍花龍膽），花藍色者，初秋生長在非常潮濕的沼澤草灘，葉小，花淡藍色；"榜間那 保"（黑花龍膽），花黑色者，中秋生長在高山草甸，形態(tài)與前同，花深藍色，比藍色種略大。 關(guān)于"榜間"有這樣一段傳說：仙女三姐妹化作草地三姐妹，大地春回，陽氣上泛，三姐妹作 為諸藥先導化為馬蘭花、報春花、點地梅，迎接三春。三花一開，諸藥不得不生，百花相繼開 放。秋風蕭瑟，陽氣下降，諸藥枯萎，百花凋謝，三姐妹化作大、中、小三種榜間，分別開在三 秋。三花一開，諸藥不得不去。
[0003] "榜間"來源于龍膽科龍膽屬多種藥用植物。是具有代表性的常用大宗藏藥材，功 效為治毒病，各種熱癥，喉炎熱閉。目前，10余家藏藥企業(yè)擁有總計14個國藥準字號的藏藥 復方制劑，分別是十味龍膽花顆粒（膠囊）、三味龍膽花片（丸）、十五味龍膽花丸（散）； "龍膽花"商品藥材在青海、四川、西藏等地藥材市場和土特產(chǎn)門市出售，是內(nèi)地最常用的藏 藥材之一。
[0004] 然則就功效來看"榜間"分類不同其功效有異，"榜間嘎保"，即是白花龍膽，治一切 熱病，解毒，利喉，列為上品，"榜間恩保"與前者同效而性涼，"榜間那保"治黑痘疤疹。就使 用現(xiàn)狀看，"榜間"基原品種復雜，僅"榜間嘎保"的使用就不只一種，尚有"榜間恩保"替代 "榜間嘎保"使用的情況?，F(xiàn)代藏醫(yī)藥學著作及國家、地方標準收載的品種繁多，且質(zhì)量控制 方法簡單，缺乏內(nèi)在質(zhì)量評價的標準。
[0005] 因此，目前亟需找到一種有效鑒別白花龍膽各基原品種及其混偽品的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供白花龍膽的HPLC檢測方法。
[0007] 本發(fā)明提供了白花龍膽的HPLC檢測方法，它包括如下操作步驟：
[0008] (1)取待檢藥材，甲醇提取，制備供試品溶液；
[0009] (2)將供試品溶液注入高翔液相色譜儀中，檢測即可，其色譜條件如下：
[0010] 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠為填料；
[0011] 檢測波長：240±3nm ;
[0012] 流動相：A相為0. 1~0. 3%磷酸水溶液，B相為甲醇，梯度程序如下：
[0013]
[0014] 進一步地，步驟（1)中，采用超聲或者回流提取。
[0015] 進一步地，步驟（2)中，所述色譜柱尺寸為4. 6 X 250mm，5 μ m。
[0016] 進一步地，步驟（2)中，流動相流速為1.0 mL/min。
[0017] 進一步地，步驟⑵中，柱溫：30°C。
[0018] 進一步地，所述待檢藥材為大花龍膽、短柄龍膽、高山龍膽無莖植株、高山龍膽有 莖植株或岷縣龍膽。
[0019] 本發(fā)明還提供了一種藍花龍膽、麻花秦艽或龍膽草HPLC檢測方法，包括如下操作 步驟：
[0020] (1)取待檢藥材標準品，甲醇提取，制備供試品溶液；
[0021] (2)將供試品溶液注入高效液相色譜儀中，檢測即可，建立標準指紋圖譜，色譜條 件如下：
[0022] 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠為填料；
[0023] 檢測波長：240±3nm ;
[0024] 流動相：A相為0. 1~0. 3%磷酸水溶液，B相為甲醇，梯度程序如下：
[0025]
[0026] (3)取待檢藥材，按照步驟⑴和⑵的方法得到指紋圖譜，將其與標準指紋圖譜 的對比即可。
[0027] 進一步優(yōu)選地，步驟（2)中，所述色譜柱尺寸為4. 6 X 250mm，5 μ m，流動相流速為 1.0 mL/min，柱溫為 30°C。
[0028] 進一步優(yōu)選地，所述指紋圖譜的參照物為獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、異葒草苷和異牡 荊苷。
[0029] 本發(fā)明的檢測方法，得到了出峰量較多和峰形較好的指紋圖譜，不僅可以有效分 辨白花龍膽與其近似品種和混偽品，還可以準確區(qū)分白花龍膽的不同基原品種及不同存放 時間的藥材。因此，本發(fā)明的檢測方法可以有效保障白花龍膽的品質(zhì)。
[0030] 同時，由于一些其他的龍膽花和龍膽草同樣具有藥用價值，如藍花龍膽、麻花秦艽 和龍膽草等，這些品種與白花龍膽均屬于龍膽科，其內(nèi)部的主要化學成分存在一定的相似 性。因此，我們推測，盡管專屬性可能會稍差于白花龍膽的標準指紋圖譜，但是本發(fā)明的技 術(shù)方案有用于對這些白花龍膽以外的其他龍膽科藥材進行鑒別的可能。幸運的是，最終實 驗證明，將本發(fā)明的方法在用于以上龍膽科藥材時，可以獲得出峰量較多和峰形較好的指 紋圖譜。因此，本發(fā)明的方法還可用于對藍花龍膽、麻花秦艽或龍膽草進行檢測。
[0031] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0032] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說明】
[0033] 圖 1 為 We I chrom-C 18 柱圖譜。
[0034] 圖 2 為 Swell_C18 柱圖譜。
[0035] 圖3為流動相為乙腈-0. 2%磷酸水時的色譜圖，上為岷縣龍膽、下為大花龍膽。
[0036] 圖4為流動相為甲醇-0. 2%磷酸水時的色譜圖，上為岷縣龍膽、下為大花龍膽。
[0037] 圖5為岷縣龍膽（MX-6)的特征3D譜圖。
[0038] 圖6為大花龍膽（DH-14)的特征3D譜圖。
[0039] 圖7為供試品的乙酸乙酯、乙醇、甲醇提取色譜圖，1和2依次為乙酸乙酯提取岷縣 龍膽和大花龍膽，3和4依次為乙醇提取大花龍膽和岷縣龍膽，5的上方為甲醇提取的岷縣 龍膽，下方為甲醇提取的大花龍膽。
[0040] 圖8為對照品色譜圖：1獐牙菜苦苷、2龍膽苦苷、3異葒草苷、4異牡荊苷。
[0041] 圖9為大花龍膽（上）和岷縣龍膽（下）的HPLC指紋色譜圖，。
[0042] 圖10為岷縣龍膽（上）和大花龍膽（下）的對照品色譜峰指認色譜圖：1獐牙菜 苦苷、2龍膽苦苷、3異葒草苷、4異牡荊苷。
[0043] 圖11為大花龍膽（上）和短柄龍膽（下）的特征圖譜。
[0044] 圖12為岷縣龍膽（上）、高山龍膽"有莖"（中）、高山龍膽"無莖"（下）的特征 圖譜。
[0045] 圖13為條紋龍膽的特征圖譜
[0046] 圖14為藍花類龍膽、麻花秦艽、烏奴龍膽、中藥龍膽的特征圖譜。
[0047] 圖15為白花龍膽、藍花龍膽、混偽品及龍膽草的投影圖。
[0048] 圖16為白花龍膽、藍花龍膽、混偽品及龍膽草的系統(tǒng)聚類圖。
[0049] 圖17為26批大花龍膽、短柄龍膽高效液相指紋圖譜。
[0050] 圖18為對照圖譜共有峰標定。
[0051] 圖19為大花龍膽、短柄龍膽三維投影圖。
[0052] 圖20為19批高山龍膽、岷縣龍膽、藍花類龍膽高效液相指紋圖譜。
[0053] 圖21為對照圖譜共有峰標定。
[0054] 圖22為高山龍膽、岷縣龍膽、藍花類龍膽三維投影圖。
【具體實施方式】
[0055] 材料：
[0056] 樣品來源如表1所示：
[0057] 表1樣品來源編號
[0058]


[0061] 通過查閱文獻資料、核對四川大學及中國科學院成都生物研究所標本，經(jīng)鑒定，以 上樣品1號~18號為龍膽科植物大花龍膽G. szechenyii Kanitz，19號~28號為龍膽科植 物短柄龍膽G. stipitata Edgew.，29號~34號為龍膽科植物高山龍膽G. algida pall.，35 號~40號為龍膽科植物峨縣龍膽G. purdomii Marq，41號~45號為條紋龍膽G. striata Maxim.。以上樣品為白花龍膽的不同基原品種。
[0062] 編號46~53號為藍花類龍膽，藏醫(yī)及藏藥廠替代白花龍膽使用，鑒定為龍 膽科植物青藏龍膽G.futtereri Diels、華麗龍膽G.sino-ornata Balf.f·、藍玉簪龍 膽 G.veitchiorum Hemsl·、六葉龍膽 G.hexaphylla Maxim.;編號 54 ~56 為麻花秦充 G. straminea Maxim，白花龍膽偽品；57、58號烏奴龍膽G.urnula H.，花為白色，藏藥做"崗 嘎瓊"使用；59~62號為中藥龍膽草。以上樣品為白花龍膽的近似品種和混偽品，用于與 白花龍膽比較鑒定。
[0063] 儀器：
[0064] 1200型高效液相色譜儀（美國，安捷倫，DAD檢測器，自動進樣器），BP121S型電子 分析天平（萬分之一，Sartorius德國賽多利斯股份公司），BP211D型電子分析天平（十萬 分之一，Sartorius德國賽多利斯股份公司）；KQ5200E型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲 儀器有限公司）；DZKW-4電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有