本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)檢測(cè)領(lǐng)域，特別是指一種TMV病毒快速鑒定方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

農(nóng)業(yè)種植中，蟲害病害等，一直是種植業(yè)的危害，關(guān)系到農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量、產(chǎn)量等，有時(shí)甚至?xí)斐赊r(nóng)產(chǎn)品顆粒無收，因此，在蟲害病害的防治上，一直是農(nóng)業(yè)種植中極為重要的環(huán)節(jié)，而農(nóng)藥即是解決這個(gè)問題的有效方法，但隨著環(huán)保理念的加深，以及健康食品的普及，人們對(duì)于無公害、無農(nóng)藥農(nóng)產(chǎn)品的需求不斷提升，而且，市場(chǎng)上也屢有農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留超標(biāo)的報(bào)道，農(nóng)藥殘留對(duì)于人體健康的損害是非常嚴(yán)重的，因此，需要嚴(yán)格控制農(nóng)藥的噴灑；此外，對(duì)于有些農(nóng)產(chǎn)品，如煙葉，由于吸食的即為煙株的煙葉器官，如果噴灑過多農(nóng)藥，將直接影響到產(chǎn)品的質(zhì)量以及危及吸食者的身體健康，從而對(duì)煙葉種植中蟲害病害的去除提出了更為苛刻的要求。并且，病害的感染相對(duì)蟲害更加難以處理，表現(xiàn)為病害原因難以判斷，許多病害的表征特征相似，從而，在病害的防治中，常常由于無法判斷病害，而采用大量的廣譜的滅害措施，導(dǎo)致過多甚至不必要的農(nóng)藥使用，病害的判斷時(shí)間過長(zhǎng)，也會(huì)造成對(duì)于病害的去除帶來影響，進(jìn)而影響到產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量。

煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus；TMV)，又譯為煙草花葉病毒，是一種單鏈RNA病毒，專門感染植物，尤其是煙草及其他茄科植物，能使這些受感染的葉片看來斑駁污損；病毒在葉片組織內(nèi)大量增殖，使部分葉肉細(xì)胞增大或增多，出現(xiàn)葉片薄厚不勻，顏色黃綠相間，呈花葉狀。后花葉斑駁程度加大，并現(xiàn)大面積深褐色壞死斑，中下部老葉尤甚，發(fā)病重的葉片皺縮、畸形、扭曲。早期發(fā)病的植株節(jié)間縮短，嚴(yán)重矮化，生長(zhǎng)緩慢，不能正常開花結(jié)實(shí)，并易脫落，能發(fā)育的蔭果小而皺縮，種子量少且小，多不能發(fā)芽。

目前，對(duì)于TMV病毒的防治雖然較為成熟，但如何及時(shí)發(fā)現(xiàn)和鑒別出TMV病毒，成為TMV病毒去除的一個(gè)關(guān)鍵，常規(guī)的TMV病毒的鑒定包括血清學(xué)鑒定方法，雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法(DAS—ELISA)和抗原直接包被法，電子顯微鏡法等，上述鑒定方式，技術(shù)要求與設(shè)備要求較高，或者成本大等，并不便于種植人員使用，而一般的經(jīng)驗(yàn)判斷又相對(duì)較為粗糙，常常出現(xiàn)錯(cuò)誤的判斷。因此，需要針對(duì)種植人員提出一種更加便捷，成本低，鑒定速度快，且結(jié)果相對(duì)可靠的鑒定方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出一種TMV病毒快速鑒定方法，鑒定更加便捷，成本低，且結(jié)果相對(duì)可靠。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種TMV病毒快速鑒定方法，通過將TMV病毒在鑒別寄主系統(tǒng)中進(jìn)行傳播，并根據(jù)鑒別寄主系統(tǒng)中不同寄主的表征進(jìn)行判斷；其中，所述鑒別寄主系統(tǒng)中的鑒別寄主包括普通煙、心葉煙、黃瓜或西葫蘆、千日紅、莧色藜、曼陀羅。

進(jìn)一步，針對(duì)TMV病毒的傳播特征，采用的傳播方式為汁液摩擦傳播。

進(jìn)一步，所述鑒別寄主在接受TMV傳播后的表征分別為：

更加準(zhǔn)確的，其中心葉煙的枯斑表現(xiàn)為接種葉枯斑。

當(dāng)待測(cè)病毒與所述鑒別寄主進(jìn)行汁液摩擦傳播，所述鑒別寄主的表征為上述所列的癥狀時(shí)，即可判斷待測(cè)病毒為TMV病毒。方法簡(jiǎn)單，成本低廉，且結(jié)果可靠。

所述TMV病毒快速鑒定方法在農(nóng)業(yè)種植中的應(yīng)用。將鑒別寄主系統(tǒng)與目標(biāo)農(nóng)作物間種，并根據(jù)鑒別寄主的表征判斷是否有TMV病毒感染，如有則采取相應(yīng)的殺毒措施。

本發(fā)明的所述TMV病毒快速鑒定方法，結(jié)合了TMV病毒感染的特性，研究了不同寄主對(duì)于TMV病毒感染后的表征，進(jìn)行了有機(jī)的組合判斷，形成對(duì)TMV病毒鑒定的系統(tǒng)與方法，此外，本發(fā)明的鑒別寄主系統(tǒng)還結(jié)合了其他病毒的感染表征，并進(jìn)行了區(qū)分，防止不同的病毒(主要的農(nóng)業(yè)種植中出現(xiàn)的病毒種類)在浸染了所述鑒別寄主系統(tǒng)后，出現(xiàn)相同即重復(fù)表征的情況，而導(dǎo)致鑒別錯(cuò)誤。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

煙草種植中使用本發(fā)明的TMV病毒快速鑒定方法

在煙田中種植煙草，并在煙壟中間隔種植若干排鑒別寄主，包括普通煙、心葉煙、黃瓜或西葫蘆、千日紅、莧色藜、曼陀羅。

種植期間，如發(fā)現(xiàn)煙葉出現(xiàn)花葉，則將病變較為嚴(yán)重的煙葉采摘，然后將其磨碎，把磨碎的汁液與鑒別寄主的葉片進(jìn)行摩擦傳播。

摩擦后，各出現(xiàn)如下情形：

則可判斷為感染病毒為TMV病毒。

進(jìn)行Tas-ELISA測(cè)定TMV進(jìn)行核實(shí)

TMV單克隆抗體1:5000倍稀釋后包被酶標(biāo)板，37℃孵育3h；加入病汁液樣品(即為病變較為嚴(yán)重的煙葉磨碎獲得)，4℃包被過夜；5％脫脂奶粉液封閉，37℃孵育0.5h。

測(cè)定結(jié)果顯示抗體陽(yáng)性，即含有TMV病毒。

實(shí)施例2

處理同實(shí)施例，如摩擦后，各出現(xiàn)如下情形：

則可判斷為感染病毒為不是TMV病毒，通過電鏡觀察為CMV病毒。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。