本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種HIV重組抗原、表達(dá)基因、表達(dá)載體以及HIV檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
HIV(Human immunodeficiency virus)的感染在全球廣泛流行，嚴(yán)重威脅著人們的生命健康，因此，必須對HIV感染進(jìn)行監(jiān)控。研發(fā)簡便、準(zhǔn)確、快速的檢測產(chǎn)品，及早檢測艾滋病病毒感染，杜絕艾滋病的傳播成為預(yù)防控制艾滋病的首要手段。
目前國內(nèi)外用于檢測艾滋病的方法有免疫學(xué)檢驗、核酸檢測技術(shù)等。每種檢測技術(shù)各有優(yōu)缺，免疫學(xué)檢測因為其操作簡單、靈敏度和特異性好、成本低廉、檢測時間短等特點，已經(jīng)被各大血站、血液制品廠、醫(yī)院等醫(yī)療結(jié)構(gòu)所普遍采用，是應(yīng)用最廣的一項檢測技術(shù)。
免疫學(xué)檢測主要是利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測的一種手段，由于其可以利用同位素、酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對檢測信號進(jìn)行放大和顯示，因此常被用于檢測蛋白質(zhì)、激素等微量物質(zhì)。
免疫分析經(jīng)歷了放射免疫檢驗、熒光免疫檢驗、酶標(biāo)免疫檢驗等不同時期，化學(xué)發(fā)光免疫檢驗是免疫分析發(fā)展的一個新階段，它環(huán)保、快速、準(zhǔn)確的特點已得到人們的普遍認(rèn)識。
放射免疫法(RIA)在中國興起于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院，產(chǎn)品處于衰退期，在國際上現(xiàn)已基本退出臨床應(yīng)用，產(chǎn)品生命周期已終結(jié)。酶聯(lián)免疫法(ELISA)，在中國興起于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)普遍使用于各級臨床機(jī)構(gòu)，為我國臨床免疫診斷的基本方法，產(chǎn)品處于成熟期；國際上興起于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)仍在臨床應(yīng)用，產(chǎn)品處于衰退期?；瘜W(xué)發(fā)光免疫法(CLIA)20世紀(jì)90年代導(dǎo)入中國，現(xiàn)個別較大醫(yī)院開展個別項目，產(chǎn)品處于導(dǎo)入期或成長期；國際上興起于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)已被臨床普遍使用，成為臨床免疫診斷的支柱方法產(chǎn)品處于成熟期，儀器自動化程度高，試劑系列化狀態(tài)。
化學(xué)發(fā)光免疫分析根據(jù)其標(biāo)記物的不同可分為三大類，即直接化學(xué)發(fā)光免疫分析、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法。其中酶促化學(xué)發(fā)光主要包括辣根過氧化物酶(HRP)系統(tǒng)、堿性磷酸酶(AP)系統(tǒng)、黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)等。酶促發(fā)光的共同特點為發(fā)光過程中作為標(biāo)記物的酶基本不被消耗，而反應(yīng)體系中發(fā)光劑過量，因此發(fā)光信號強(qiáng)而穩(wěn)定，且發(fā)光時間較長，故檢測方式簡單、成本較低。
目前，對于HIV的檢測方法較多，其中最常用的有ELISA法、膠體金，核酸檢測等，隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法(CMIA)開始用于HIV抗體的檢測。相較于ELISA法，1)CMIA法的靈敏度更高：其靈敏度可達(dá)10-16mol/L(RIA為10-12mol/L)，又如化學(xué)發(fā)光底物(如AMPPD)可檢測出的堿性磷酸酶的濃度比顯色底物要靈敏5х105倍，因而對于血清中HIV抗體濃度較低的標(biāo)本也可有效檢出，減少假陰性的發(fā)生；2)CMIA具有更寬的線性動力學(xué)范圍：發(fā)光強(qiáng)度在4～6個量級之間與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系，這與顯色的酶免疫分析吸光度(OD值)為2.0的范圍相比，優(yōu)勢明顯，雖然RIA也有較寬的線性動力學(xué)范圍，但放射性限制了其應(yīng)用；3)光信號持續(xù)時間長：輝光型(glow type)的CLIA產(chǎn)生的光信號持續(xù)時間可達(dá)數(shù)小時甚至一天。簡化了實驗操作及測量。4)使用期長：有效期可長達(dá)1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰變，一般有效期只有一個月，而酶聯(lián)的底物貯存性差，都無法與化學(xué)發(fā)光相比，有效期長可以提高勞動效率，也利于推廣應(yīng)用。5)CMIA法免去了ELISA反復(fù)加樣、洗板等操作，可有效降低變異系數(shù)，提高可重復(fù)性；6)CMIA法采用全自動酶免疫分析儀，自動化程度高，可用于大量標(biāo)本的快速、準(zhǔn)確檢測。
然而，目前市場上并沒有特異性和靈敏度較好的采用CMIA法的HIV檢測試劑盒出現(xiàn)。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
基于此，有必要提供一種靈敏度較好的、可以應(yīng)用于CMIA法檢測HIV的HIV重組抗原。
此外還有必要提供用于表達(dá)上述HIV重組抗原的表達(dá)基因和表達(dá)載體，以及含有上述HIV重組抗原的HIV檢測試劑盒。
一種HIV重組抗原，包括依次連接的HIV-2亞型段和HIV-1亞型段；
所述HIV-1亞型段為由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列編碼得到的多肽；
所述HIV-2亞型段為由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列編碼得到的多肽。
在一個實施例中，所述HIV重組抗原還包括連接在所述HIV-2亞型段遠(yuǎn)離所述HIV-1亞型段的一端的OSMY。
一種表達(dá)基因，包括依次連接的HIV-2片段和HIV-1片段；
所述HIV-1片段的序列如SEQ ID No.1所示；
所述HIV-2片段的序列如SEQ ID No.2所示。
在一個實施例中，所述表達(dá)基因還包括連接在所述HIV-2片段遠(yuǎn)離所述HIV-1片段的一端的用于表達(dá)OSMY的序列。
一種表達(dá)載體，包括上述的表達(dá)基因。
在一個實施例中，所述表達(dá)載體為pET-24a(+)或pET-21(+)。
一種HIV檢測試劑盒，包括上述的HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物以及標(biāo)記物標(biāo)記的所述HIV重組抗原。
在一個實施例中，所述HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物中，所述HIV重組抗原與磁微球通過化學(xué)交聯(lián)法偶聯(lián)。
在一個實施例中，所述HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物中，磁微球帶有氨基和羧基中至少一種。
在一個實施例中，所述標(biāo)記物標(biāo)記的所述HIV重組抗原中，標(biāo)記物為堿性磷酸酶。
這種HIV重組抗原應(yīng)用于HIV檢測試劑盒后，通過CMIA法檢測HIV抗體，經(jīng)過試驗驗證，HIV檢測試劑盒具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、穩(wěn)定性優(yōu)異、可測定范圍寬、檢測自動化程度高和無環(huán)境污染等優(yōu)點。
附圖說明
圖1為實施例1中得到的第一HIV重組抗原以及第二HIV重組抗原的SDS-PAGE電泳圖，其中，泳道1為marker，泳道2為第一HIV重組抗原，泳道3為第二HIV重組抗原。
具體實施方式
為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的具體實施方式做詳細(xì)的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施的限制。
本發(fā)明公開了一實施方式的HIV重組抗原，包括依次連接的HIV-2亞型段和HIV-1亞型段。
HIV-2亞型段為由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列編碼得到的多肽。
HIV-1亞型段為由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列編碼得到的多肽。
優(yōu)選的，上述HIV重組抗原還包括連接在HIV-2亞型段遠(yuǎn)離HIV-1亞型段的一端的OSMY。即，上述HIV重組抗原包括依次連接的OSMY、HIV-2亞型段和HIV-1亞型段。
本發(fā)明還公開了用于表達(dá)上述HIV重組抗原的表達(dá)基因。
用于表達(dá)上述HIV重組抗原的表達(dá)基因包括依次連接的HIV-2片段和HIV-1片段。
HIV-1片段的序列如SEQ ID No.1所示，記為HⅠ。
HIV-2片段的序列如SEQ ID No.2所示，記為HⅡ。
優(yōu)選的，用于表達(dá)上述HIV重組抗原的表達(dá)基因還包括連接在HIV-2片段遠(yuǎn)離HIV-1片段的一端的用于表達(dá)OSMY的序列(可記為OSMY片段)。
上述基因片段為采用基因工程技術(shù)手段，通過大量分子生物學(xué)分析軟件分析篩選出來的優(yōu)勢表位基因區(qū)段。
HⅠ為HIV-1亞型的gp41蛋白的優(yōu)勢表位基因區(qū)段。
HⅡ為HIV-2亞型的gp36蛋白的優(yōu)勢表位基因區(qū)段。
本發(fā)明還公開了包括上述表達(dá)基因的表達(dá)載體。
包括上述表達(dá)基因的表達(dá)載體可以為pET-24a(+)或pET-21(+)。
具體的，上述表達(dá)基因的表達(dá)載體多克隆位點C端有His-tag。
包括上述表達(dá)基因的表達(dá)載體可以通過如下操作得到：按照上述表達(dá)基因的序列設(shè)計引物擴(kuò)增目的片段，OSMY片段上游引物帶有BamHI位點，下游引物帶有EcoRI酶切位點，HⅡ片段上游引物帶有EcoRI位點，下游引物帶有SalI酶切位點，HⅠ片段上游引物帶有SalI位點，下游引物帶有XhoI酶切位點，PCR的片段經(jīng)回收用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶酶切，OSMY片段連接到用BamHI和EcoRI酶切之后的表達(dá)載體pET-24a(+)中，得到重組質(zhì)粒pET-24a(+)-OSMY，之后用EcoRI及SalI酶切pET-24a(+)-OSMY，將HⅡ片段連入，之后用SalI及XhoI酶切pET-24a(+)-OSMY-HⅡ，將HⅠ片段連入，轉(zhuǎn)入大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3)pLysS，得到包括上述表達(dá)基因的表達(dá)載體pET-24a(+)-OSMY-HⅡ-HⅠ。經(jīng)測序正確后用EcoRI及XhoI酶切重組質(zhì)粒pET-24a(+)-OSMY-HⅡ-HⅠ，切下片段HⅡ-HⅠ，連入載體pET-21(+)中，轉(zhuǎn)入大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3)pLysS，得到包括上述表達(dá)基因的表達(dá)載體pET-21(+)-HⅡ-HⅠ。
包括上述表達(dá)基因的表達(dá)載體pET-21(+)-HⅡ-HⅠ以及包括上述表達(dá)基因的表達(dá)載體pET-24a(+)-OSMY-HⅡ-HⅠ均可以用于上述HIV重組抗原的表達(dá)。
上述HIV重組抗原可以應(yīng)用于HIV檢測領(lǐng)域，下面以應(yīng)用于HIV檢測試劑盒為例進(jìn)行簡單介紹。
本發(fā)明公開了一實施方式的HIV檢測試劑盒，包括上述HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物以及標(biāo)記物標(biāo)記的上述HIV重組抗原。
優(yōu)選的，HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物中，HIV重組抗原與磁微球通過化學(xué)交聯(lián)法偶聯(lián)。
優(yōu)選的，HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物中，磁微球帶有氨基和羧基中至少一種。
優(yōu)選的，標(biāo)記物標(biāo)記的HIV重組抗原中，標(biāo)記物為堿性磷酸酶。
這種HIV檢測試劑盒為第三代HIV檢測試劑，通過CMIA法檢測HIV抗體。將標(biāo)記物(堿性磷酸酶)標(biāo)記在HIV重組抗原上得到標(biāo)記物標(biāo)記的HIV重組抗原，將HIV重組抗原與磁微球偶聯(lián)得到HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物。HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物、樣本中HIV抗體以及標(biāo)記物標(biāo)記的HIV重組抗原形成的復(fù)合物，可以與發(fā)光底物(例如，3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧環(huán)乙烷(AMPPD))作用，持續(xù)發(fā)出可見光，通過光電倍增管讀取光信號。
經(jīng)過試驗驗證，這種HIV抗體檢測試劑盒具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、穩(wěn)定性優(yōu)異、可測定范圍寬、檢測自動化程度高和無環(huán)境污染等優(yōu)點。
以下為具體實施例。
實施例中采用試劑和儀器如非特別說明，均為本領(lǐng)域常規(guī)選擇。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如文獻(xiàn)、書本中所述的條件或者試劑盒生產(chǎn)廠家推薦的方法實現(xiàn)。
實施例1、HIV重組抗原的制備
采用基因工程技術(shù)手段，通過大量的分子生物學(xué)分析軟件分析篩選出HIV-1的gp41,HIV-2的gp36蛋白的優(yōu)勢表位基因區(qū)段，序列為SEQ ID No.1(命名為HⅠ)，SEQ ID No.2(命名為HⅡ)，設(shè)計引物擴(kuò)增目的片段。OSMY全長片段上游引物帶有BamHI位點，下游引物帶有EcoRI酶切位點，HⅡ片段上游引物帶有EcoRI位點，下游引物帶有SalI酶切位點，HⅠ片段上游引物帶有SalI位點，下游引物帶有XhoI酶切位點，PCR的片段經(jīng)回收用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶酶切，OSMY片段連接到用BamHI和EcoRI酶切之后的表達(dá)載體pET-24a(+)中，得到重組質(zhì)粒pET-24a(+)-OSMY，之后用EcoRI及SalI酶切pET-24a(+)-OSMY，將HⅡ片段連入，之后用SalI及XhoI酶切pET-24a(+)-OSMY-HⅡ，將HⅠ片段連入，轉(zhuǎn)入大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3)pLysS，得到包括上述表達(dá)基因的表達(dá)載體pET-24a(+)-OSMY-HⅡ-HⅠ。經(jīng)測序正確后用EcoRI及XhoI酶切重組質(zhì)粒pET-24a(+)-OSMY-HⅡ-HⅠ，切下片段HⅡ-HⅠ，連入載體pET-21(+)中，轉(zhuǎn)入大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3)pLysS，得到包括上述表達(dá)基因的表達(dá)載體pET-21(+)-HⅡ-HⅠ。
含有表達(dá)載體pET-21(+)-HⅡ-HⅠ的BL21(DE3)pLysS菌，用含100μg/mL氨芐青霉素(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司，以下簡稱生工，貨號A100741)的500mL LB培養(yǎng)基37℃振蕩培養(yǎng)至OD600＝1.0左右，用終濃度為0.25mM的IPTG(生工，貨號A100487)28℃誘導(dǎo)6小時。4℃7000rpm離心3分鐘收集菌體，每升菌液的菌體用20mL 50mM Tirs-HCl，pH8.0懸浮，超聲破碎，4℃12000g離心20分鐘，收集上清過Q sepharose fast flow柱(GE)(BufferA:50mM Tirs-HCl，pH8.0；BufferB:50mM Tirs-HCl+1MNaCl，pH8.0)。用5倍柱床體積的Buffer A平衡Q柱之后，加入裂解上清液，用5倍介質(zhì)體積的Buffer A洗去未結(jié)合的蛋白，之后用10％BufferB洗去雜蛋白，35％BufferB洗脫目的蛋白；為了提高純度及抗原特異性，Q柱洗脫后的樣品繼續(xù)過NI柱(BufferA:50mM Tirs-HCl，350mM NaCl，pH8.0；BufferB:50mM Tirs-HCl，350mM NaCl，200mM咪唑pH8.0，)，用5倍柱床體積的Buffer A平衡Ni-NTA親和柱之后，加入Q柱洗脫蛋白樣，用5倍介質(zhì)體積的Buffer A洗去未結(jié)合的蛋白，之后用10％BufferB洗去雜蛋白，100％BufferB洗脫目的蛋白，純度達(dá)90％左右，得到第一HIV重組抗原，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
含有表達(dá)載體pET-24a(+)-OSMY-HⅡ-HⅠ的BL21(DE3)pLysS菌用含100μg/mL硫酸卡那霉素(生工，貨號A506636)的500mL LB培養(yǎng)基37℃振蕩培養(yǎng)至OD600＝1.0左右，用終濃度為0.5mM的IPTG(生工，貨號A100487)37℃誘導(dǎo)4小時。4℃7000rpm離心3分鐘收集菌體，每升菌液的菌體用20mL裂解緩沖液(50mM Tirs-HCl，pH8.0)重懸，超聲破碎，4℃12000g離心20分鐘，收集上清；用15％飽和硫酸銨冰浴沉淀雜蛋白，離心取上清用25％飽和硫酸銨冰浴沉淀目的蛋白，離心，沉淀用20mmPB PH7.4溶解，加入相應(yīng)體積的5Xloadingbuffer后上樣于8％SDS-PAGE，105V 4℃過夜電泳，第二天早上拆膠，取部分膠條5％CuCl2染色，根據(jù)染色結(jié)果切下目的蛋白，裝入透析袋，用10mM PB+1/萬SDS電洗脫，電壓150V 4h，收樣，得到第二HIV重組抗原，純度90％左右，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
對第一HIV重組抗原以及第二HIV重組抗原進(jìn)行SDS-PAGE電泳，得到圖1。由圖1可以看出，第一HIV重組抗原以及第二HIV重組抗原的分子量大小正確，純度為90％以上。
實施例2、HIV測試劑盒(CMIA)的制備
1、AP標(biāo)記第二HIV重組抗原的制備(采用采用NaIO4氧化法)
1)酶透析：配制10mg/mL的AP溶液，純水透析4℃過夜。
2)氧化：吸出透析好的AP至廣口玻璃瓶中，等體積緩慢滴加43mg/mL NaIO4溶液，4℃下放置30min。
3)終止氧化：加入與(2)中NaIO4溶液等體積的1％乙二醇，4℃下放置30min，終止氧化反應(yīng)。
4)抗原交聯(lián)：按質(zhì)量比1：1加入第二HIV重組抗原，裝入透析袋，置0.025mol/L，pH9.0碳酸鹽緩沖液中，4℃透析過夜。
5)還原：取出透析袋中液體，按12.5:1體積比加入10mg/mLNaBH4，4℃2h。
6)提純：等體積加飽和(NH4)2SO4(pH7.6)溶液沉淀結(jié)合物，置4℃2h后，4 000r/min離心30min，棄去上清。
7)將沉淀物溶于0.05M Tris-HCl+150mM NaCl，pH7.4中，裝入透析袋，置0.05M Tris-HCl+150mM NaCl，pH7.4中，4℃透析過夜。
8)得到的AP標(biāo)記第二HIV重組抗原等體積加入甘油，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2、第一HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物的制備
第一HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)采用化學(xué)交聯(lián)法進(jìn)行，步驟如下：
1)第一HIV重組抗原(1mg/mL×0.5mL)透析至活化緩沖液(50mM MES pH5.5)；
2)取磁微球(Merk公司，品名：Estapor EM1-100/40)0.1mL(100mg/mL)，用活化緩沖液(50mM MES pH5.5)洗滌4次，每次5mL，最后加1mL活化緩沖液，超聲分散；
3)稱取3mg EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽)，用0.3mL活化緩沖液(預(yù)冷)溶解至10mg/mL。立刻在振蕩條件下往混合液中加入0.2mL EDC溶液，充分混勻。室溫旋轉(zhuǎn)(30rpm)反應(yīng)0.5～1小時，磁分離，棄去上清；
4)加入透析后的第一HIV重組抗原，用50mM MES pH5.5補(bǔ)足1mL，室溫旋轉(zhuǎn)(30rpm)結(jié)合30分鐘，棄去上清；
5)用洗滌液(50mM Tris-HCl+150mM NaCl+0.05％Tween-20+0.1％ProClin300,pH7.4)洗2次，每次5mL；加5mL封閉液(洗滌液+1％BSA)，室溫旋轉(zhuǎn)(30rpm)反應(yīng)4小時
6)用洗滌液洗3次，每次5mL；最后加1mL磁珠保存液(50mM Tris+1％BSA)重懸，得到第一HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物，終濃度為10mg/mL固體含量，+2～+8℃保存。
3、檢測方法
HIV測試劑盒包括AP標(biāo)記第二HIV重組抗原以及第一HIV重組抗原與磁微球的偶聯(lián)物。
這種HIV測試劑盒進(jìn)行檢測時，可以采用如下方法：在反應(yīng)容器中加入磁微粒懸浮液25μL，樣品稀釋液50μL，樣品50μL，反應(yīng)15min，50mMTris+0.05％吐溫20，pH7.5洗5次，加入100μL稀釋后的pET-26b-OSMY-HIIHI-AP標(biāo)記物，反應(yīng)15min，50mM Tris+0.05％吐溫20，pH7.5洗5次，加入發(fā)光底物100μL反應(yīng)5min，讀值。
實施例3、實施例2得到的HIV檢測試劑盒的靈敏度和特異性測試
1、靈敏度
a)選取國內(nèi)一家HIV抗體檢測(CMIA)試劑盒為對照，進(jìn)行了靈敏度測試對比，測試結(jié)果如表1所示。
表1：實施例2得到的HIV檢測試劑盒與對照試劑盒的靈敏度對比
由表1可以看出，實施例2得到的HIV檢測試劑盒的靈敏度及本底均正常，II型活性比對照試劑盒稍高，本底比對照試劑盒低；對照試劑盒對陽性HIV-I-1質(zhì)控的反應(yīng)性比實施例2得到的HIV檢測試劑盒低一倍多，陽性HIV-I-2質(zhì)控反應(yīng)性稍低于實施例2得到的HIV檢測試劑盒，對陰性質(zhì)控的反應(yīng)性較差。
另外，實施例2得到的HIV檢測試劑盒還對122份確定的HIV陽性標(biāo)本進(jìn)行檢測，均檢出，說明實施例2得到的HIV檢測試劑盒的靈敏度高。
b)實施例2得到的HIV檢測試劑盒過國標(biāo)盤(批號20140930)，具體檢測數(shù)據(jù)如表2。
表2：實施例2得到的HIV檢測試劑盒
由表2可以看出，本發(fā)明HIV抗體檢測試劑盒可以過國標(biāo)盤。
2、臨床特異性
對2024份臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測，實施例2得到的HIV檢測試劑盒的假陽率為0.1％，遠(yuǎn)低于市場現(xiàn)有HIV雙抗原夾心法ELISA產(chǎn)品的假陽率0.2％～1％，說明實施例2得到的HIV檢測試劑盒的特異性好。
3、穩(wěn)定性
對實施例2得到的HIV檢測試劑盒進(jìn)行37℃3天、6天熱破實驗，數(shù)據(jù)結(jié)果如表3所示。
表3：實施例2得到的HIV檢測試劑盒的穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)
由表3可以看出，實施例2得到的HIV檢測試劑盒的穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)波動均在10％以內(nèi)，說明實施例2得到的HIV檢測試劑盒的穩(wěn)定性合格。
以上所述實施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
SEQUENCE LISTING
<110> 菲鵬生物股份有限公司
<120> HIV重組抗原、表達(dá)基因、表達(dá)載體以及HIV檢測試劑盒
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 384
<212> DNA
<213> HⅠ
<400> 1
gcagcaggaa gcactatggg cgcggcgtca ataacgctga cggtacaagc cagacaattg 60
ttgtctggta tagtgcaaca gcaaagcaat ttgctgagag ctatagaggc gcaacagcat 120
ctgttgcaac tcacagtctg gggcattaag cagctacaga caagagtcct ggctatagaa 180
agatacctaa aggatcaaca gctcctaggg ctttggggct gctctggaaa aaccatctgc 240
actactgctg taccttggaa ctccagttgg agtaacaaat ctcaacatga gatttgggat 300
aacatgacct ggctgcagtg ggataaggaa attagtaatt acacaaacac aatatacaag 360
ttgcttgaag actcgcaaat ccag 384
<210> 2
<211> 372
<212> DNA
<213> HⅡ
<400> 2
gggatagtgc agcaacagca acagctgttg gacgtggtca agagacaaca agagatgttg 60
cgactgaccg tctggggaac aaaaaatctc caggcaagag tcactgctat agagaagtac 120
ctaaaggacc aggcgcagct aaattcatgg ggatgtgcgt ttagacaagt ctgccacact 180
actgtaccat gggtaaatga ttccttaaca cctgagtggg acaatatgac gtggcaggaa 240
tgggaacgac aggtccgcca cctggaggca aatatcagtc aaagcttaga acaagcacaa 300
atccagcagg aaaagaatat gtatgagcta caaaaattaa atagctggga tgtttttggc 360
aactggtttg ac 372