本發(fā)明屬于藥物合成領(lǐng)域，具體涉及雷替曲塞的新晶型、其制備方法以及用途。
背景技術(shù)：
：雷替曲塞是由英國的royalmarsden醫(yī)院的癌癥研究署與zeneca共同合作發(fā)展的藥物。它是一種胸腺合成酶抑制劑，屬于葉酸的衍生物，用于治療晚期直腸結(jié)腸癌患者。1996年在英國首次上市，商品名tomudex，同年在法國等國家上市。其作為晚期結(jié)直腸癌的一線治療藥物，具有毒副作用小、給藥方便、價格便宜等優(yōu)點，在中國的需求量大。雷替曲塞物理化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，對光、濕、熱均較敏感。目前對雷替曲塞的報道集中在合成方法、精制方法等，對雷替曲塞晶型的研究報道較少。美國專利us4992550b中公開了通過堿溶酸析的精制方法得到雷替曲塞一水合物，熔點為180-184℃(下文稱為晶型i)，該方法會產(chǎn)生大量氯化鈉，導(dǎo)致氯化鈉殘留，后處理過程中需經(jīng)過多次打漿才能除去。中國專利cn103570702a公開了通過無水甲醇旋蒸析晶制備雷替曲塞結(jié)晶固體，熔點為171-183℃。中國專利cn102424679b公開了將粗品溶于甲醇，再向其中加入純化水得到淡黃色固體的精制方法。中國專利cn102127063a公開了采用甲醇-無水乙醚重結(jié)晶的方法。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)采用目前文獻記載的方法得到的雷替曲塞或者通過市售購買的雷替曲塞引濕性強，極易吸潮，導(dǎo)致其性狀發(fā)生改變以及純度降低，給運輸、儲存和藥物制劑帶來不便。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)制備的雷替曲塞容易吸潮、穩(wěn)定性差的缺陷，提供一種穩(wěn)定的雷替曲塞晶型以及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供了具有以下結(jié)構(gòu)的雷替曲塞水合物，下文稱為晶型ii：其中，n＝0.5～3，優(yōu)選n＝0.5～1。本發(fā)明的晶型ii通過cu-ka輻射，以2θ角度表示的x射線粉末衍射在2θ值為6.0±0.2°、7.1±0.2°、8.1±0.2°、13.5±0.2°、14.3±0.2°、16.3±0.2°、18.4±0.2°、19.2±0.2°、20.6±0.2°、26.5±0.2°處具有特征峰；優(yōu)選地，x射線粉末衍射在2θ值為6.0±0.2°、7.1±0.2°、8.1±0.2°、13.5±0.2°、14.3±0.2°、15.2±0.2°、16.3±0.2°、17.7±0.2°、18.4±0.2°、19.2±0.2°、20.6±0.2°、21.8±0.2°、24.2±0.2°、26.5±0.2°、28.0±0.2°、31.0±0.2°處具有特征峰；更優(yōu)選地，其具有如圖1所示的x射線粉末衍射圖譜。經(jīng)熱重分析(tga)可知，本發(fā)明的晶型ii在50～150℃范圍內(nèi)出現(xiàn)重量損失，重量損失的質(zhì)量分數(shù)為1.7％～4.4％；在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述晶型ii的tga圖譜如圖2所示；在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施例中，所述晶型ii的tga圖譜如圖5所示。經(jīng)差示掃描量熱分析(dsc)測定，本發(fā)明的晶型ii其dsc圖譜分別在100～110℃、170～185℃范圍內(nèi)出現(xiàn)吸熱峰；在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述晶型ii的dsc圖譜如圖3所示；在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施例中，所述晶型ii的dsc圖譜如圖6所示。另外,本發(fā)明還提供了雷替曲塞三水合物的單晶，x射線單晶衍射數(shù)據(jù)表明，其為單斜晶系，軸長晶面夾角α＝90.00°，β＝90.00°，γ＝90.00°，x單晶衍射圖譜如圖7所示。由圖可知其中一個水為結(jié)合水，另外2個水為通道水。另一方面，本發(fā)明提供了晶型ii的制備方法，該方法包含以下步驟：(a)將雷替曲塞粗品加熱溶解于水和有機溶劑的混合溶劑；(b)冷卻至0～10℃，靜置析晶；(c)分離，干燥即得。其中所述有機溶劑選自四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)。步驟(a)中，水和有機溶劑的質(zhì)量比為1：0.25～4。步驟(b)中，任選地，向體系中加入反溶劑水，反溶劑水的量為加至水的質(zhì)量比重為80～90％。步驟(c)中，干燥方式優(yōu)選真空干燥，優(yōu)選干燥溫度為30～60℃。干燥溫度和時間不同，可得到不同摩爾含量的水合物，如下表所示：(一)重結(jié)晶溶劑的篩選實驗表明，雷替曲塞難溶于水，也難溶于四氫呋喃等有機溶劑中，但是發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，在雷替曲塞四氫呋喃懸濁液或者1，4-二氧六環(huán)的懸濁液中，加入一定比例的水后，雷替曲塞溶解性增強。在水和有機溶劑的混合體系中重結(jié)晶可以得到雷替曲塞晶體。下表是具體的篩選過程，將質(zhì)量比為1：1的水和有機溶劑作為重結(jié)晶溶劑對粗品雷替曲塞進行重結(jié)晶，結(jié)果如下所示：溶劑粗品溶解性重結(jié)晶結(jié)果水/thf溶解晶型ii水/1，4-二氧六環(huán)溶解晶型ii水/異丙醇部分溶解無定型水/n-甲基吡咯烷酮部分溶解無定型上表表明，在水/thf、水/1，4-二氧六環(huán)中可以得到晶型ii，而在水/異丙醇或水/n-甲基吡咯烷酮混合體系中得到的為無定型。(二)混合溶劑比例的研究發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)在不同比例的水和上述二種有機溶劑的混合溶劑中重結(jié)晶所得產(chǎn)品的晶型不同，只有在特定比例的混合溶劑中才能得到本發(fā)明的晶型ii。以水和四氫呋喃為例，具體如下表所示：上述試驗結(jié)果表明，在水和四氫呋喃質(zhì)量比為1：0.25～4時，可以得到晶型ii。發(fā)明人還考察了水和1，4-二氧六環(huán)的比例，同樣，在該比例范圍內(nèi)可以得到晶型ii。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)了以兩種雷替曲塞的不良溶劑組成的混合溶劑(水/有機溶劑)為重結(jié)晶溶劑可以制備得到雷替曲塞的新晶型，經(jīng)過x射線粉末衍射圖譜、dsc圖譜以及tga圖譜表征，該新晶型不同于目前文獻報道的晶型。并且該新晶型具有令人驚喜的優(yōu)勢，目前文獻報道的晶型或者市售的晶型引濕性極強，即使在室溫下放置也容易吸潮，而本發(fā)明的晶型ii成功克服了這一缺陷，本發(fā)明的晶型ii無引濕性，給儲存、運輸以及制劑帶來極大的便利。同時，本發(fā)明的晶型ii與現(xiàn)有文獻制備的晶型相比，在溶解性和光穩(wěn)定性方面也具備令人意想不到的優(yōu)勢。在溶解性方面，晶型ii在磷酸氫二鈉/氫氧化鈉的緩沖溶液中較晶型i可以更快溶解，在制劑上更具優(yōu)勢；在光穩(wěn)定性方面，本發(fā)明的晶型ii較晶型i也有顯著的提高。附圖說明圖1為實施例1晶型ii的x射線粉末衍射圖譜圖2為實施例1晶型ii的熱重分析圖譜圖3為實施例1晶型ii的dsc圖譜圖4為實施例4晶型ii的x射線粉末衍射圖譜圖5為實施例4晶型ii的熱重分析圖譜圖6為實施例4晶型ii的dsc圖譜圖7為實施例5三水合物的單晶結(jié)構(gòu)圖圖8為對比例1晶型i的x射線粉末衍射圖譜圖9為對比例1晶型i的熱重分析圖譜圖10為對比例1晶型i的dsc圖譜具體實施方式下面結(jié)合具體實施例進一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但并不限定本發(fā)明。雷替曲塞粗品可采用以n-[5-(n-甲胺基)-2-噻吩甲?；鵠-l-谷氨酸二乙酯和2-甲基-6-溴甲基-3-氫-喹唑啉-4-酮為原料，經(jīng)縮合、水解、酸析制備得到。1.粉末衍射儀是由制造廠商瑞士arl公司生產(chǎn)的，儀器型號：x'tra，管電壓40kv，管電流30ma，掃描速度8°/min。2.差示掃描量熱儀和熱重分析儀由美國perkinelmer公司生產(chǎn)，儀器型號：pyris1dsc，采用氮氣氣氛，升溫速率10℃/min。3.卡爾費休水分測試儀型號：mettlertoledov30volumetrickftitrator實施例1：晶型ii的制備(n＝1)將10g雷替曲塞粗品溶于水(280g)和thf(150g)混合溶劑，加熱溶解，過濾，室溫下緩慢滴加水620g，降溫至5℃，靜置過夜，析出晶體，分離，30℃真空干燥3h，得到淡黃色晶體9.2g，hplc純度99.8％。xrpd圖譜見圖1所示；熱重分析圖譜如圖2所示，在加熱至155℃時，具有4.12％的失重，由熱重數(shù)據(jù)分析得一分子雷替曲塞中含有一個水分子；dsc圖譜如圖3所示，在109℃、178℃處有吸熱峰，在109℃失去水分子，178℃為熔化峰?？栙M休水分儀測得水分含量為4.00％。實施例2：晶型ii的制備(n＝1)將10g雷替曲塞粗品溶于水(250g)和四氫呋喃(250g)混合溶劑，攪拌溶解，過濾，室溫下加入0.05g晶型ii的晶種，滴加水1000g，冷卻至10℃，靜置過夜，析出晶體，分離，40℃真空干燥3h，得到淡黃色晶體8.9g，hplc純度為99.8％。xrpd圖譜、熱重分析圖譜、dsc圖譜與實施例1所得晶型一致。實施例3：晶型ii的制備(n＝1)將10g雷替曲塞粗品溶于水(100g)和1，4-二氧六環(huán)(300g)混合溶劑，加熱溶解，過濾，室溫下加入水1100g，析出晶體，分離，40℃真空干燥3h，得到淡黃色晶體8.8g，hplc純度為99.7％。xrpd圖譜、熱重分析圖譜、dsc圖譜與實施例1所得晶型一致。實施例4：晶型ii的制備(n＝0.5)將10g雷替曲塞粗品溶于水(100g)和四氫呋喃(400g)混合溶劑，攪拌溶解，過濾，室溫下加入水1500g，析出晶體，分離，60℃下干燥8h，得到淡黃色晶體9.1g，hplc純度為99.8％。取樣品進行x射線粉末衍射、tg、dsc分析。x射線粉末衍射圖譜如圖4所示，與圖1一致。熱重分析如圖5所示，在加熱至150℃時，具有1.98％的失重，由熱重數(shù)據(jù)分析得一分子雷替曲塞中含有0.5個水分子；dsc圖譜如圖6所示，在110℃、178℃處有吸熱峰，在110℃失去水分子，178℃為熔化峰?？栙M休水分儀測得水分含量為2.00％。實施例5：三水合物單晶的制備將200mg雷替曲塞溶于水：四氫呋喃(質(zhì)量比＝1：1)的混合溶劑中，通過0.45μm的濾紙將未溶解的固體過濾掉，將得到的飽和濾液用扎孔的薄膜封住，緩慢揮發(fā)至固體析出，過濾，真空干燥，收集固體即得三水合物晶型。對單個晶體進行x射線單晶衍射，結(jié)果如圖7所示。對比例1：參照文獻us4992550b的方法制備將n-[5-[n-(3,4-二氫-2-甲基-4-氧代-6-喹唑啉基)-甲基]-n-甲基]-2-噻吩甲?；?l-谷氨酸二乙酯(1g)、naoh(1.2g)加入水(10ml)和乙醇(10ml)中，室溫下攪拌。反應(yīng)完成后減壓濃縮，用2n鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph至3，析出白色固體，過濾，水洗，干燥得雷替曲塞晶型i。xrpd表征圖譜如圖8所示，其與實施例1～4所得晶型的xrpd圖譜明顯不同；熱重分析圖譜如圖9所示，在加熱至50℃時，具有4.17％的失重，由熱重數(shù)據(jù)分析得一分子雷替曲塞中含有一個水分子；差示掃描量熱圖譜如圖10所示，在80℃、179℃處有吸熱峰，在80℃失去水分子，179℃為熔化峰。對比例2：參照文獻cn103570702a的方法制備取未經(jīng)干燥的雷替曲塞濕粗品13.8g加入到600ml甲醇中，室溫攪拌0.5小時，室溫下過濾，濾液28-35℃下濃縮析晶，置4℃冰箱中冷藏3小時，過濾，產(chǎn)物用少量純化水洗滌，室溫真空干燥10小時，得淡黃色固體2.7g。對比例3：參照文獻cn102424679b的方法制備取雷替曲塞粗品10g置于反應(yīng)瓶中，加入500ml甲醇加熱回流至澄清，過濾、濾液冷卻至5-10℃，慢慢加入約4200ml純化水攪拌析晶，過濾，固體用純化水洗滌，40℃真空干燥24小時，得淡黃色固體3.5g，經(jīng)x射線粉末衍射分析，為無定型。對比例4：參照文獻cn102127063a的方法制備取0.2gn-[5-[n-(3,4-二氫-2-甲基-4-氧代-6-喹唑啉基)-甲基]-n-甲基]-2-噻吩甲?；?l-谷氨酸二乙酯溶于10ml乙醇和10ml丙酮中，加入3n氫氧化鈉水溶液14ml,室溫攪拌反應(yīng)3h。減壓蒸餾蒸除乙醇和丙酮，用2n鹽酸調(diào)節(jié)ph至4，過濾得淡黃色固體，用甲醇-無水乙醚重結(jié)晶，得淡黃色固體，經(jīng)x射線粉末衍射分析，為無定型。實施例6引濕性試驗根據(jù)中國藥典2015版藥物引濕性試驗指導(dǎo)原則的方法對實施例1、實施例4、對比例1～4的樣品進行引濕性試驗。結(jié)果如下：上述結(jié)果表明，本發(fā)明的晶型ii幾乎不引濕，而對比例1～4所得到的樣品具有較強的引濕性。實施例7溶解性比較試驗?zāi)壳芭R床上批準的雷替曲塞是凍干粉針，在制劑過程中需要先將原料藥雷替曲塞加入到磷酸氫二鈉/氫氧化鈉的緩沖溶液中溶解，在進行凍干。故原料藥在緩沖溶液中的溶解性對于制劑工藝十分重要。取實施例1、實施例4、對比例1、對比例2的樣品進行溶解性比較試驗。分別取實施例1、實施例4、對比例1、對比例2的樣品100mg于25℃下置于100ml緩沖溶液中，以相同的磁力攪拌速度，觀察溶解快慢情況，如無目視可見的溶質(zhì)顆粒即視為完全溶解。緩沖溶液配制：稱取2g磷酸氫二鈉溶于800ml蒸餾水中，用0.1m氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)溶液的ph值至7.6，加水定容至1l。結(jié)果如下表：實施例8穩(wěn)定性試驗將實施例1、實施例4、對比例1～4的樣品開口放在25℃、濕度為40％的環(huán)境下，放置30天，于第15天和第30天取樣，考察外觀及有關(guān)物質(zhì)變化，結(jié)果見下表：上述結(jié)果表明，在室溫條件下放置一個月，本發(fā)明的晶型ii無論在外觀、含水量還是有關(guān)物質(zhì)方面，均無變化，具有良好的儲存穩(wěn)定性，而對比例1～4的樣品首先是外觀顏色發(fā)生變化，其次是容易吸潮，同時hplc檢測化學(xué)純度發(fā)現(xiàn)有關(guān)物質(zhì)的含量也升高。與現(xiàn)有文獻得到的雷替曲塞純品相比，本發(fā)明的晶型ii具備顯著的優(yōu)勢。實施例9光照試驗?zāi)壳笆惺鄣睦滋媲约案鶕?jù)現(xiàn)有文獻制備的雷替曲塞均存在對光照敏感的問題，本發(fā)明人考察了晶型ii在光照條件下的穩(wěn)定性問題。將實施例1、實施例4、對比例1～4的樣品開口放在裝有日光燈的光照箱中，于照度為4500lx±500lx的條件下放置10天，于第5天和第10天取樣，考察外觀及有關(guān)物質(zhì)變化。上表中對外觀顏色的描述，淡黃色、黃色、棕黃、黃褐色表示顏色依次加深。光照試驗表明，實施例1、4制備的晶型ii與對比例1的晶型i相比，穩(wěn)定性有所增加，有利于原料藥的儲存。當前第1頁12