一種荔枝多糖鐵配合物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種荔枝多糖鐵配合物的制備方法，屬于多糖鐵配合物領(lǐng)域。本發(fā)明從荔枝中提取出荔枝多糖，將荔枝多糖和鐵鹽為原料進行絡(luò)合反應(yīng)制備得荔枝多糖鐵配合物，本發(fā)明制備得到的荔枝多糖鐵絡(luò)合物不僅可以作為新型補鐵劑，穩(wěn)定性好，對胃腸道無或極少刺激作用，副作用小，溶解度好，含鐵量高，而且結(jié)合了荔枝多糖自身的生物活性，還具有調(diào)節(jié)免疫、開胃益脾等作用，在人體釋放后可被充分吸收利用。
【專利說明】
一種荔枝多糖鐵配合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明公開了一種荔枝多糖鐵配合物的制備方法，屬于多糖鐵配合物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵是人體內(nèi)必需的微量元素之一，是血紅蛋白和肌紅蛋白的核心部分，細胞中許多有重要功能的酶也都含有鐵，是人體許多正常生理過程中不可缺少的物質(zhì)。缺鐵嚴重時，細胞內(nèi)酶的功能受到影響，產(chǎn)生神經(jīng)系統(tǒng)和消化道癥狀，對全身健康影響很大。缺鐵性貧血是世界上最常見的疾病之一，常見藥用補鐵劑分為有機鐵和無機鐵兩大類，無機鐵主要為硫酸亞鐵，硫酸亞鐵雖然鐵含量較高，吸收較好，在一定程度上可以緩解鐵缺乏和貧血癥狀，但常伴有胃腸刺激和銹味等副作用，生物利用度低，化學穩(wěn)定性差，并且鐵在體內(nèi)能產(chǎn)生內(nèi)源性自由基，導(dǎo)致細胞膜脂質(zhì)過氧化造成損傷。
[0003]荔枝主要分布于我國的廣東、廣西、福建、海南和臺灣等地，是華南地區(qū)栽培面積最大的果樹，長期以來，荔枝因具有較高的營養(yǎng)價值和多種滋補養(yǎng)顏效果一直被視為“果中珍品”，“常食荔枝能補腦健身，治療瘰疬，開胃益脾;干制能補元氣，可作為產(chǎn)婦及老弱者的補品”。目前，多糖的提取方法主要有加熱浸提法、酶解法、微波萃取法、超聲提取法和超濾法等。
[0004]研究表明，以植物多糖為載體，配合上三價鐵離子后形成的多糖鐵配合物，不僅可以避免胃腸道刺激，其副作用小，溶解度好，含鐵量高，與傳統(tǒng)的無機補鐵劑相比，植物多糖鐵配合物具有穩(wěn)定的水溶性、易吸收、無鐵味、無腸道刺激、無毒性、定向十二指腸吸收等優(yōu)點，符合理想的口服補鐵劑的國際標準，是一種值得研究開發(fā)的新型補鐵劑。因此，多糖鐵配合物成為當前研究熱點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對治療缺鐵性貧血的藥物為各種亞鐵鹽制劑，可溶性有機絡(luò)合鐵劑琥珀酸亞鐵、富馬酸鐵、葡萄糖酸鐵等，游離的亞鐵離子刺激胃腸，造成惡心、嘔吐、腹瀉、便秘等消化道不良反應(yīng)，且二價鐵制劑易產(chǎn)生內(nèi)源性自由基，導(dǎo)致細胞膜脂質(zhì)過氧化而造成細胞膜損傷的問題，提供了一種荔枝多糖鐵配合物的制備方法，本發(fā)明從荔枝中提取出荔枝多糖，將荔枝多糖和鐵鹽為原料進行絡(luò)合反應(yīng)制備得荔枝多糖鐵配合物，本發(fā)明制備得到的荔枝多糖鐵絡(luò)合物不僅可以作為新型補鐵劑，穩(wěn)定性好，對胃腸道無或極少刺激作用，副作用小，溶解度好，含鐵量高，而且結(jié)合了荔枝多糖自身的生物活性，還具有調(diào)節(jié)免疫、開胃益脾等作用，在人體釋放后可被充分吸收利用。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(1)稱取I?2kg荔枝剝殼去核得到荔枝肉，將其放入石臼中人工研磨搗碎，再用勻漿器攪拌勻漿20?30min，倒入微波振蕩儀中，按料液比為6:1向荔枝勻漿中加入相應(yīng)體積的去離子水，以500?600W功率微波預(yù)處理10?20min;
(2)將上述預(yù)處理后的荔枝勻漿移入陶瓷酶解罐中，按體積比為1:5向勻漿中加入蒸餾水并攪拌均勻得混合酶解底物，再加入酶解底物總質(zhì)量I?2%的復(fù)合酶制劑，攪拌均勻后用濃度為0.2mol/L檸檬酸調(diào)節(jié)pH至4?6，再將酶解罐移至35?45°C的恒溫水浴搖床上，保溫酶解2?4h;
(3)酶解結(jié)束后提高水浴溫度至90?95°C，滅酶5?8min后放入高速離心機，以4000?5000r/min轉(zhuǎn)速離心分離1?15min，去除下層沉淀得到上清液，再向上清液中加入其體積3倍的濃度為75%乙醇溶液，移入4?6°C冰水浴中，靜置沉淀過夜，最后倒入布氏漏斗，用無水乙醇抽濾洗滌3?5遍，得到荔枝多糖；
(4)稱取20?30g上述制得的荔枝多糖、10?15g檸檬酸三鈉倒入錐形瓶中，加入1000?1200mL去離子水，置于70?80°C下超聲水浴中，用質(zhì)量濃度為30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8?9并用磁力攪拌機以200?300r/min轉(zhuǎn)速進行攪拌；
(5 )在攪拌的過程中逐滴滴加濃度為0.5mo I/L硝酸鐵溶液，當反應(yīng)液中出現(xiàn)紅棕色不溶物時，停止滴加，繼續(xù)保溫攪拌反應(yīng)I?2h，待其冷卻至室溫后過濾得濾液，再加入濾液總體積3?5倍的無水乙醇，轉(zhuǎn)入漩渦振蕩儀，以30?40W功率旋渦振蕩30?40min，得到紅棕色懸浮液；
(6)將上述得到的紅棕色懸浮液置于臥式離心機中，以5000?5500r/min轉(zhuǎn)速離心分離15?20min，收集下層沉淀，用無水乙醇持續(xù)沖洗10?15min后放入烘箱，在105?110 °C下干燥I?2h后即得荔枝多糖鐵配合物。
[0006]所述的復(fù)合酶制劑是由纖維素酶、果膠酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比為2:2:5復(fù)配制得。
[0007]本發(fā)明的應(yīng)用方法:將本發(fā)明制備得到的荔枝多糖鐵配合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素260?280mg的溶液，所述的注射用水為常規(guī)無菌去離子注射用水，加入質(zhì)量分數(shù)10%的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為9?11，控制溫度在50?60°C，然后再加入總質(zhì)量5?8%的活性炭，攪拌混合20?30min后用0.22?0.24μπι微濾膜過濾，將濾液在105?115°C滅菌5?lOmin，滅菌后的濾液裝入容器中，即得荔枝多糖鐵配合物注射液成品。
[0008]本發(fā)明的有益效果是:
(1)本發(fā)明制備得到的荔枝多糖鐵絡(luò)合物不僅可以作為新型補鐵劑，穩(wěn)定性好，對胃腸道無或極少刺激作用，副作用小，溶解度好，含鐵量高；
(2)本發(fā)明荔枝多糖鐵絡(luò)合物中結(jié)合了荔枝多糖自身的生物活性，還具有調(diào)節(jié)免疫、開胃益脾等作用，水溶性好，在人體釋放后可被吸收利用。
【具體實施方式】
[0009]稱取I?2kg荔枝剝殼去核得到荔枝肉，將其放入石臼中人工研磨搗碎，再用勻漿器攪拌勻漿20?30min，倒入微波振蕩儀中，按料液比為6:1向荔枝勻漿中加入相應(yīng)體積的去離子水，以500?600W功率微波預(yù)處理10?20min;將上述預(yù)處理后的荔枝勻漿移入陶瓷酶解罐中，按體積比為I: 5向勻漿中加入蒸餾水并攪拌均勻得混合酶解底物，再加入酶解底物總質(zhì)量I?2%的復(fù)合酶制劑，攪拌均勻后用濃度為0.2mol/L檸檬酸調(diào)節(jié)pH至4?6，再將酶解罐移至35?45°C的恒溫水浴搖床上，保溫酶解2?4h;酶解結(jié)束后提高水浴溫度至90?950C，滅酶5?8min后放入高速離心機，以4000?5000r/min轉(zhuǎn)速離心分離10?15min，去除下層沉淀得到上清液，再向上清液中加入其體積3倍的濃度為75%乙醇溶液，移入4?6 °C冰水浴中，靜置沉淀過夜，最后倒入布氏漏斗，用無水乙醇抽濾洗滌3?5遍，得到荔枝多糖;稱取20?30g上述制得的荔枝多糖、10?15g檸檬酸三鈉倒入錐形瓶中，加入1000?1200mL去離子水，置于70?80°C下超聲水浴中，用質(zhì)量濃度為30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8?9并用磁力攪拌機以200?300r/min轉(zhuǎn)速進行攪拌;在攪拌的過程中逐滴滴加濃度為0.5mol/L硝酸鐵溶液，當反應(yīng)液中出現(xiàn)紅棕色不溶物時，停止滴加，繼續(xù)保溫攪拌反應(yīng)I?2h，待其冷卻至室溫后過濾得濾液，再加入濾液總體積3?5倍的無水乙醇，轉(zhuǎn)入漩渦振蕩儀，以30?40W功率旋渦振蕩30?40min，得到紅棕色懸浮液;將上述得到的紅棕色懸浮液置于臥式離心機中，以5000?5500r/min轉(zhuǎn)速離心分離15?20min，收集下層沉淀，用無水乙醇持續(xù)沖洗10?15min后放入烘箱，在105?110°C下干燥I?2h后即得荔枝多糖鐵配合物。
[0010]所述的復(fù)合酶制劑是由纖維素酶、果膠酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比為2:2:5復(fù)配制得。
[0011]實例I
稱取Ikg荔枝剝殼去核得到荔枝肉，將其放入石白中人工研磨搗碎，再用勻漿器攪拌勻漿20min，倒入微波振蕩儀中，按料液比為6:1向荔枝勻漿中加入相應(yīng)體積的去離子水，以500W功率微波預(yù)處理1min;將上述預(yù)處理后的荔枝勻漿移入陶瓷酶解罐中，按體積比為1:5向勻漿中加入蒸餾水并攪拌均勻得混合酶解底物，再加入酶解底物總質(zhì)量1%的復(fù)合酶制劑，攪拌均勻后用濃度為0.2mol/L檸檬酸調(diào)節(jié)pH至4，再將酶解罐移至35°C的恒溫水浴搖床上，保溫酶解2h;酶解結(jié)束后提高水浴溫度至90 0C，滅酶5min后放入高速離心機，以4000r/min轉(zhuǎn)速離心分離lOmin，去除下層沉淀得到上清液，再向上清液中加入其體積3倍的濃度為75%乙醇溶液，移入4°C冰水浴中，靜置沉淀過夜，最后倒入布氏漏斗，用無水乙醇抽濾洗滌3遍，得到荔枝多糖；稱取20g上述制得的荔枝多糖、1g檸檬酸三鈉倒入錐形瓶中，加入100mL去離子水，置于70°C下超聲水浴中，用質(zhì)量濃度為30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8并用磁力攪拌機以200r/min轉(zhuǎn)速進行攪拌;在攪拌的過程中逐滴滴加濃度為0.5mol/L硝酸鐵溶液，當反應(yīng)液中出現(xiàn)紅棕色不溶物時，停止滴加，繼續(xù)保溫攪拌反應(yīng)Ih，待其冷卻至室溫后過濾得濾液，再加入濾液總體積3倍的無水乙醇，轉(zhuǎn)入漩渦振蕩儀，以30W功率旋渦振蕩30min，得到紅棕色懸浮液;將上述得到的紅棕色懸浮液置于臥式離心機中，以5000r/min轉(zhuǎn)速離心分離15min，收集下層沉淀，用無水乙醇持續(xù)沖洗I Omin后放入烘箱，在105 °C下干燥Ih后即得荔枝多糖鐵配合物。
[0012]所述的復(fù)合酶制劑是由纖維素酶、果膠酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比為2:2:5復(fù)配制得。
[0013]將本發(fā)明制備得到的荔枝多糖鐵配合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素260mg的溶液，所述的注射用水為常規(guī)無菌去離子注射用水，加入質(zhì)量分數(shù)1 %的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為9，控制溫度在50°C，然后再加入總質(zhì)量5%的活性炭，攪拌混合20min后用0.22μπι微濾膜過濾，將濾液在105°C滅菌5min，滅菌后的濾液裝入容器中，即得荔枝多糖鐵配合物注射液成品。
[0014]實例2
稱取1.5kg荔枝剝殼去核得到荔枝肉，將其放入石白中人工研磨搗碎，再用勻漿器攪拌勻漿25min，倒入微波振蕩儀中，按料液比為6:1向荔枝勻漿中加入相應(yīng)體積的去離子水，以550W功率微波預(yù)處理15min;將上述預(yù)處理后的荔枝勻漿移入陶瓷酶解罐中，按體積比為1:5向勻漿中加入蒸餾水并攪拌均勻得混合酶解底物，再加入酶解底物總質(zhì)量1.5%的復(fù)合酶制劑，攪拌均勻后用濃度為0.2mol/L檸檬酸調(diào)節(jié)pH至5，再將酶解罐移至40°C的恒溫水浴搖床上，保溫酶解3h;酶解結(jié)束后提高水浴溫度至93°C，滅酶6min后放入高速離心機，以4500r/ min轉(zhuǎn)速離心分離13min，去除下層沉淀得到上清液，再向上清液中加入其體積3倍的濃度為75%乙醇溶液，移入50C冰水浴中，靜置沉淀過夜，最后倒入布氏漏斗，用無水乙醇抽濾洗滌4遍，得到荔枝多糖;稱取25g上述制得的荔枝多糖、13g檸檬酸三鈉倒入錐形瓶中，加入I10mL去離子水，置于75°C下超聲水浴中，用質(zhì)量濃度為30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.5并用磁力攪拌機以250r/min轉(zhuǎn)速進行攪拌;在攪拌的過程中逐滴滴加濃度為0.5mol/L硝酸鐵溶液，當反應(yīng)液中出現(xiàn)紅棕色不溶物時，停止滴加，繼續(xù)保溫攪拌反應(yīng)1.5h，待其冷卻至室溫后過濾得濾液，再加入濾液總體積4倍的無水乙醇，轉(zhuǎn)入漩渦振蕩儀，以35W功率旋渦振蕩35min，得到紅棕色懸浮液;將上述得到的紅棕色懸浮液置于臥式離心機中，以5250r/min轉(zhuǎn)速離心分離17min，收集下層沉淀，用無水乙醇持續(xù)沖洗13min后放入烘箱，在108°C下干燥1.5h后即得荔枝多糖鐵配合物。
[0015]所述的復(fù)合酶制劑是由纖維素酶、果膠酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比為2:2:5復(fù)配制得。
[0016]將本發(fā)明制備得到的荔枝多糖鐵配合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素270mg的溶液，所述的注射用水為常規(guī)無菌去離子注射用水，加入質(zhì)量分數(shù)10%的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為10，控制溫度在55°C，然后再加入總質(zhì)量7%的活性炭，攪拌混合25min后用
0.23μπι微濾膜過濾，將濾液在110°C滅菌8min，滅菌后的濾液裝入容器中，即得荔枝多糖鐵配合物注射液成品。
[0017]實例3
稱取2kg荔枝剝殼去核得到荔枝肉，將其放入石白中人工研磨搗碎，再用勻漿器攪拌勻漿30min，倒入微波振蕩儀中，按料液比為6:1向荔枝勻漿中加入相應(yīng)體積的去離子水，以600W功率微波預(yù)處理20min;將上述預(yù)處理后的荔枝勻漿移入陶瓷酶解罐中，按體積比為1:5向勻漿中加入蒸餾水并攪拌均勻得混合酶解底物，再加入酶解底物總質(zhì)量2%的復(fù)合酶制劑，攪拌均勻后用濃度為0.2mol/L檸檬酸調(diào)節(jié)pH至6，再將酶解罐移至45°C的恒溫水浴搖床上，保溫酶解4h;酶解結(jié)束后提高水浴溫度至95 0C，滅酶8min后放入高速離心機，以5000r/min轉(zhuǎn)速離心分離15min，去除下層沉淀得到上清液，再向上清液中加入其體積3倍的濃度為75%乙醇溶液，移入6°C冰水浴中，靜置沉淀過夜，最后倒入布氏漏斗，用無水乙醇抽濾洗滌5遍，得到荔枝多糖；稱取30g上述制得的荔枝多糖、15g檸檬酸三鈉倒入錐形瓶中，加入1200mL去離子水，置于80°C下超聲水浴中，用質(zhì)量濃度為30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至9并用磁力攪拌機以300r/min轉(zhuǎn)速進行攪拌;在攪拌的過程中逐滴滴加濃度為0.5mol/L硝酸鐵溶液，當反應(yīng)液中出現(xiàn)紅棕色不溶物時，停止滴加，繼續(xù)保溫攪拌反應(yīng)2h，待其冷卻至室溫后過濾得濾液，再加入濾液總體積5倍的無水乙醇，轉(zhuǎn)入漩渦振蕩儀，以40W功率旋渦振蕩40min，得到紅棕色懸浮液;將上述得到的紅棕色懸浮液置于臥式離心機中，以5500r/min轉(zhuǎn)速離心分離20min，收集下層沉淀，用無水乙醇持續(xù)沖洗15min后放入烘箱，在110 °C下干燥2h后即得荔枝多糖鐵配合物。
[0018]所述的復(fù)合酶制劑是由纖維素酶、果膠酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比為2:2:5復(fù)配制得。
[0019]將本發(fā)明制備得到的荔枝多糖鐵配合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素280mg的溶液，所述的注射用水為常規(guī)無菌去離子注射用水，加入質(zhì)量分數(shù)1 %的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為11，控制溫度在60°C，然后再加入總質(zhì)量8%的活性炭，攪拌混合30min后用
0.24μπι微濾膜過濾，將濾液在115°C滅菌lOmin，滅菌后的濾液裝入容器中，即得荔枝多糖鐵配合物注射液成品。
【主權(quán)項】
1.一種荔枝多糖鐵配合物的制備方法，其特征在于具體制備步驟為: (1)稱取I?2kg荔枝剝殼去核得到荔枝肉，將其放入石臼中人工研磨搗碎，再用勻漿器攪拌勻漿20?30min，倒入微波振蕩儀中，按料液比為6:1向荔枝勻漿中加入相應(yīng)體積的去離子水，以500?600W功率微波預(yù)處理10?20min; (2)將上述預(yù)處理后的荔枝勻漿移入陶瓷酶解罐中，按體積比為1:5向勻漿中加入蒸餾水并攪拌均勻得混合酶解底物，再加入酶解底物總質(zhì)量I?2%的復(fù)合酶制劑，攪拌均勻后用濃度為0.2mol/L檸檬酸調(diào)節(jié)pH至4?6，再將酶解罐移至35?45°C的恒溫水浴搖床上，保溫酶解2?4h; (3)酶解結(jié)束后提高水浴溫度至90?95°C，滅酶5?8min后放入高速離心機，以4000?5000r/min轉(zhuǎn)速離心分離1?15min，去除下層沉淀得到上清液，再向上清液中加入其體積3倍的濃度為75%乙醇溶液，移入4?6°C冰水浴中，靜置沉淀過夜，最后倒入布氏漏斗，用無水乙醇抽濾洗滌3?5遍，得到荔枝多糖； (4)稱取20?30g上述制得的荔枝多糖、10?15g檸檬酸三鈉倒入錐形瓶中，加入1000?1200mL去離子水，置于70?80°C下超聲水浴中，用質(zhì)量濃度為30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8?9并用磁力攪拌機以200?300r/min轉(zhuǎn)速進行攪拌； (5 )在攪拌的過程中逐滴滴加濃度為0.5mo I/L硝酸鐵溶液，當反應(yīng)液中出現(xiàn)紅棕色不溶物時，停止滴加，繼續(xù)保溫攪拌反應(yīng)I?2h，待其冷卻至室溫后過濾得濾液，再加入濾液總體積3?5倍的無水乙醇，轉(zhuǎn)入漩渦振蕩儀，以30?40W功率旋渦振蕩30?40min，得到紅棕色懸浮液； (6)將上述得到的紅棕色懸浮液置于臥式離心機中，以5000?5500r/min轉(zhuǎn)速離心分離15?20min，收集下層沉淀，用無水乙醇持續(xù)沖洗10?15min后放入烘箱，在105?110 °C下干燥I?2h后即得荔枝多糖鐵配合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種荔枝多糖鐵配合物的制備方法，其特征在于:所述的復(fù)合酶制劑是由纖維素酶、果膠酶和中性蛋白酶按質(zhì)量比為2:2:5復(fù)配制得。
【文檔編號】A61P37/02GK105906736SQ201610302003
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月9日
【發(fā)明人】郭舒洋, 林茂平, 王統(tǒng)軍
【申請人】郭舒洋