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檸檬酸產(chǎn)量提高的重組霉菌的構(gòu)建方法及應(yīng)用與流程

文檔序號(hào):12410903閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種檸檬酸產(chǎn)量提高的重組霉菌的構(gòu)建方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)構(gòu)建HGT1蛋白表達(dá)框,所述HGT1蛋白表達(dá)框包含組成型啟動(dòng)子、與所述組成型啟動(dòng)子連接的HGT1蛋白編碼基因以及與所述HGT1蛋白編碼基因連接的終止子;

(2)構(gòu)建抗性基因表達(dá)框,所述抗性基因表達(dá)框包含組成型啟動(dòng)子、與所述組成型啟動(dòng)子連接的hph基因以及與所述hph基因連接的終止子;

(3)將步驟(1)所述HGT1蛋白表達(dá)框和步驟(2)得到的所述抗性基因表達(dá)框轉(zhuǎn)化到霉菌中,得到所述重組霉菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檸檬酸產(chǎn)量提高的重組霉菌的構(gòu)建方法,其特征在于:在步驟(1)中,所述HGT1蛋白編碼基因來(lái)源于黑曲霉。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檸檬酸產(chǎn)量提高的重組霉菌的構(gòu)建方法,其特征在于:在步驟(1)中,所述HGT1蛋白編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檸檬酸產(chǎn)量提高的重組霉菌的構(gòu)建方法,其特征在于:在步驟(1)中和步驟(2)中,所述組成型啟動(dòng)子為PgpdA啟動(dòng)子、gpdA啟動(dòng)子、Pmbf啟動(dòng)子或Pgla啟動(dòng)子。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檸檬酸產(chǎn)量提高的重組霉菌的構(gòu)建方法,其特征在于:在步驟(1)和步驟(2)中,所述終止子為trp終止子。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檸檬酸產(chǎn)量提高的重組霉菌的構(gòu)建方法,其特征在于:在步驟(3)中,所述霉菌為黑曲霉、米曲霉或構(gòu)巢曲霉。

7.一種HGT1蛋白表達(dá)框,包括組成型啟動(dòng)子、與所述組成型啟動(dòng)子連接的HGT1蛋白編碼基因以及與所述HGT1蛋白編碼基因連接的終止子。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的HGT1蛋白表達(dá)框,其特征在于:所述組成型啟動(dòng)子為PgpdA啟動(dòng)子、gpdA啟動(dòng)子、Pmbf啟動(dòng)子或Pgla啟動(dòng)子。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的HGT1蛋白表達(dá)框,其特征在于:所述HGT1蛋白編碼基因來(lái)源于黑曲霉,所述HGT1蛋白編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的HGT1蛋白表達(dá)框,其特征在于:所述終止子為trp終止子。

11.一種由權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)方法構(gòu)建的重組霉菌。

12.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)方法構(gòu)建的重組霉菌在發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸中的應(yīng)用。

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