本發(fā)明涉及一種楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶及其制備方法。

背景技術(shù)：
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楊梅素（Myricetin）的化學(xué)名為：3,3',4',5,5', 7-六羥基黃酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

楊梅素作為一種天然的黃酮醇類化學(xué)成分，不僅是醋柳黃酮的組成之一，同時(shí)也是楊梅科植物楊梅的樹皮及葉、葡萄、紅酒及洋蔥的主要化學(xué)成分，并廣泛存在于洋蔥、漿果、茶等其他天然植物中。楊梅素來源廣泛，在藥物的研究與應(yīng)用中具有資源優(yōu)勢(shì)而被受研究人員關(guān)注。近年的研究表明楊梅素具有廣泛的藥理活性，具有抗血栓、抗心肌缺血、改善微循環(huán)、抗炎、鎮(zhèn)痛、降血糖、保肝護(hù)、抗突變、預(yù)防齲齒、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)以及抗腫瘤等多種生物學(xué)活性，尤其是清除自由基的能力比其他黃酮類活性成分都強(qiáng)，在防治心血管疾病方面作用明顯，是一種極具開發(fā)應(yīng)用價(jià)值的天然藥物。然而，由于楊梅素的水溶性很差，且在弱酸、中性及堿性條件下不穩(wěn)定，導(dǎo)致其生物利用度低，極大地限制其應(yīng)用范圍。因此，改善楊梅素的水溶性和穩(wěn)定性成為一個(gè)亟待解決的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的是提供一種溶出率高、抗大腸桿菌活性好的楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶及其制備方法，并對(duì)其晶體進(jìn)行測(cè)試，對(duì)其性能進(jìn)行了表征。

上述的目的通過以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶，以楊梅素作為活性藥物成分，以4,4'-聯(lián)吡啶為前驅(qū)體，通過分子間氫鍵形成的楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶，共晶其空間群為單斜晶系，空間群為P2₁/c，其軸長(zhǎng)a =7.5325(6)?，b =17.5966(11)?，c =18.2623(15)?，α =90°，β =100.782(8)°，γ =90°，V=2377.9(3) ?³；具體有以下的化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

該晶體的紅外譜圖至少在3468，3291，3088，1655，1600，1508，1448，1382，1316，1194，1108，1027，936，800和617 cm^-1處具有特征峰。

所述藥物共晶用KBr壓片測(cè)得的紅外吸收光譜，在519，945，1058，1127，1378，1459，1710，2927，2858和3134 cm^-1處有吸收峰。

一種楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的制備方法，包括以下步驟：（1）將楊梅素和4,4'-聯(lián)吡啶按摩爾比4:1~1:4置于透明玻璃儀器中，然后共同溶解在10mL的乙醇和有機(jī)溶劑的混合溶劑中，在混合溶液中的楊梅素所占質(zhì)量濃度為1.5mg/mL~6.5mg/mL。

（2）將盛有上述混合溶液的玻璃容器置于攪拌器上攪拌或置于超聲波儀器中超聲，待粉末完全溶解后，將混合溶液置于室溫下?lián)]發(fā)，通過溶液揮發(fā)法1~30天后生成黃色塊狀共晶，即為楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

所述的有機(jī)溶劑為丙酮、異丙醇、乙酸乙酯或吡啶。

所述的有機(jī)溶劑為丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、吡啶或水中的兩種以上的混合物。

有益效果：

1、我們通過研究發(fā)明了楊梅素的新的共晶：楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇，本發(fā)明提供的楊梅素共晶相比原料藥楊梅素溶解度有很大的提高且抗大腸桿菌活性顯著增強(qiáng)，有利于提高藥物的生物利用度，使楊梅素在成藥時(shí)節(jié)約楊梅素的用藥量，從而達(dá)到提高其吸收的目的，對(duì)于藥物療效及安全性的提高具有重要意義。

2、本發(fā)明制備的楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶相比楊梅素，溶解度提升，抗大腸桿菌活性好，有利于提高藥物的生物利用度，使楊梅素在成藥時(shí)節(jié)約楊梅素的用藥量，從而達(dá)到提高其吸收的目的，對(duì)于藥物療效及安全性的提高具有重要意義。

3、本發(fā)明制備的楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶的對(duì)大腸桿菌（E.coli）的抑制效果相比原料藥楊梅素有顯著提升。

附圖說明：

圖1：楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶分子結(jié)構(gòu)圖；

圖2：楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的IR圖；

圖3：楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的XRPD圖；

圖4 ：楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的DSC圖；

圖5 ：楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的在0.1M/HCl溶液中的溶解速率曲線；

圖6：楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶對(duì)大腸桿菌的抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

具體實(shí)施方式：

下面將結(jié)合本發(fā)明的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。

實(shí)施例1：

1．一種楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶，是以楊梅素作為活性藥物成分，以4,4'-聯(lián)吡啶為前驅(qū)體，通過分子間氫鍵形成的楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶，共晶其空間群為單斜晶系，空間群為P2₁/c，其軸長(zhǎng)a =7.5325(6)?，b =17.5966(11)?，c =18.2623(15)?，α =90°，β=100.782(8)°，γ =90°，V=2377.9(3) ?³。具體有以下的化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

該晶體的紅外譜圖至少在3468，3291，3088，1655，1600，1508，1448，1382，1316，1194，1108，1027，936，800和617 cm^-1處具有特征峰。

所述藥物共晶用KBr壓片測(cè)得的紅外吸收光譜，在519，945，1058，1127，1378，1459，1710，2927，2858和3134 cm^-1處有吸收峰。

一種楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的制備方法，包括以下步驟：（1）將楊梅素和4,4'-聯(lián)吡啶按摩爾比4:1~1:4置于透明玻璃儀器中，然后共同溶解在10mL的乙醇和有機(jī)溶劑的混合溶劑中，在混合溶液中的楊梅素所占質(zhì)量濃度為1.5mg/mL~6.5mg/mL。

（2）將盛有上述混合溶液的玻璃容器置于攪拌器上攪拌或置于超聲波儀器中超聲，待粉末完全溶解后，將混合溶液置于室溫下?lián)]發(fā)，通過溶液揮發(fā)法1~30天后生成黃色塊狀共晶，即為楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

所述的有機(jī)溶劑為丙酮、異丙醇、乙酸乙酯或吡啶。

所述的有機(jī)溶劑為丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、吡啶或水中的兩種以上的混合物。

本發(fā)明選用的藥物活性成分（API）是楊梅素，4,4'-聯(lián)吡啶作為共晶前軀體（CCF），制備得到一種新型結(jié)構(gòu)的藥物共晶。其共晶結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)述如下：

本發(fā)明中的天然藥物共晶選用乙醇和有機(jī)溶劑的混合液為溶劑，采用室溫?fù)]發(fā)的方法。

本發(fā)明所述的楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶是由一個(gè)楊梅素分子、一個(gè)4,4'-聯(lián)吡啶分子和一個(gè)乙醇分子組成基本結(jié)構(gòu)單元。其中兩個(gè)楊梅素分子和兩個(gè)4,4'-聯(lián)吡啶分子通過分子間氫鍵連接，形成一個(gè)“Z”字型結(jié)構(gòu)的四聚體。相鄰的四聚體通過楊梅素分子與乙醇分子間形成的氫鍵形成一個(gè)波浪形的超分子鏈，鏈與鏈之間通過楊梅素分子分別和乙醇分子和4,4'-聯(lián)吡啶分子間的氫鍵連接，形成了二維超分子層。該藥物共晶的空間群為單斜晶系，其軸長(zhǎng)a =7.5325(6)?，b =17.5966(11)?，c =18.2623(15)?，α =90°，β =100.782(8)°，γ =90°，V=2377.9(3) ?³。

本發(fā)明的楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的制備方法是室溫?fù)]發(fā)法，具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：

（1）將楊梅素和4,4'-聯(lián)吡啶按摩爾比4:1~1:4置于透明玻璃儀器中，然后共同溶解在10mL的乙醇和有機(jī)溶劑的混合溶劑中，在混合溶液中的楊梅素所占質(zhì)量濃度為1.5mg/mL~6.5mg/mL；

（2）將盛有上述混合溶液的玻璃容器置于攪拌器上攪拌或置于超聲波儀器中超聲，待粉末完全溶解后，將混合溶液置于室溫下?lián)]發(fā)，通過溶液揮發(fā)法1~30天后生成黃色塊狀單晶體，即為楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

本發(fā)明中檢測(cè)藥物共晶結(jié)構(gòu)及性能的儀器如下：

1、共晶結(jié)構(gòu)由德國(guó)Bruker CCD面探 X-射線單晶衍射儀測(cè)定。

2、Brucker D8 X-射線粉末衍射測(cè)定X-射線粉末衍射數(shù)據(jù)，輻射源為Cu K_α，掃速10°min^-1，2θ 為5~50°。

3、DSC200F3，德國(guó)Netzsch公司，本發(fā)明采用氮?dú)鈿夥?，在室溫下?0°C·min^-1加熱速率升溫至500°C。

4、Alpha Centaurt FT/IR 紅外光譜儀，美國(guó)Mattson公司，KBr壓片，掃描范圍為400-4000 cm^-1。

藥物共晶技術(shù)是指通過引入共晶配體（cocrystal former, CCF），在氫鍵，π-π堆積作用，范德華力等分子間弱作用力的誘導(dǎo)下可與藥物活性分子（active pharmaceutical ingredient, API）自組裝形成具有固定化學(xué)計(jì)量比的超分子晶體。藥物共晶技術(shù)可以通過所引入的共晶配體改變藥物活性成分的諸多理化性質(zhì)，如提升溶解度、改善藥理活性、提高穩(wěn)定性或降低成型熔點(diǎn)。更為重要的是，共晶配體以氫鍵等非共價(jià)鍵方式與藥物活性成分形成超分子共晶化合物后還可提高原有藥物活性分子的藥理活性，進(jìn)而為開發(fā)更具臨床應(yīng)用價(jià)值的新型藥物提供一個(gè)全新的解決途徑。

我們通過研究發(fā)明了一種楊梅素的新的共晶：楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇。本發(fā)明提供的楊梅素共晶相比原料藥楊梅素溶解度有很大的提高且抗大腸桿菌活性增強(qiáng)，有利于提高藥物的生物利用度，使楊梅素在成藥時(shí)節(jié)約楊梅素的用藥量，從而達(dá)到提高其吸收的目的，對(duì)于藥物療效及安全性的提高具有重要意義。

將楊梅素0.05mmol和4,4'-聯(lián)吡啶0.025mmol加入到乙醇2mL和水8mL的混合溶液中，完全溶解后，再在室溫條件下緩慢揮發(fā)，得到楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

實(shí)施例2

將楊梅素0.05mmol和4,4'-聯(lián)吡啶0.05mmol加入到乙醇4mL和乙酸乙酯6mL的混合溶液中，完全溶解后，再在室溫條件下緩慢揮發(fā)，得到楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

實(shí)施例3

將楊梅素0.05mmol和4,4'-聯(lián)吡啶0.1mmol加入到乙醇6mL和異丙醇4mL的混合溶液中，完全溶解后，再在室溫條件下緩慢揮發(fā)，得到楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

實(shí)施例4

將楊梅素0.05mmol和4,4'-聯(lián)吡啶0.15mmol加入到乙醇8mL和丙酮2mL的混合溶液中，完全溶解后，再在室溫條件下緩慢揮發(fā)，得到楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

實(shí)施例5

將楊梅素0.15mmol和4,4'-聯(lián)吡啶0.5mmol加入到乙醇10mL溶液中，置于超聲波儀器中超聲，完全溶解后，再在室溫條件下緩慢揮發(fā)，得到楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

實(shí)施例6

將楊梅素0.2mmol和4,4'-聯(lián)吡啶0.5mmol加入到乙醇6mL和吡啶4 mL的混合溶液中，置于超聲波儀器中超聲，完全溶解后，再在室溫條件下緩慢揮發(fā)，得到楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

實(shí)施例7

一種楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的制備方法，包括以下步驟：（1）將楊梅素和4,4'-聯(lián)吡啶按摩爾比4:1置于透明玻璃儀器中，然后共同溶解在10mL的乙醇和有機(jī)溶劑的混合溶劑中，在混合溶液中的楊梅素所占質(zhì)量濃度為1.5mg/mLmg/mL。

（2）將盛有上述混合溶液的玻璃容器置于攪拌器上攪拌或置于超聲波儀器中超聲，待粉末完全溶解后，將混合溶液置于室溫下?lián)]發(fā)，通過溶液揮發(fā)法1天后生成黃色塊狀共晶，即為楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

所述的有機(jī)溶劑為吡啶。

實(shí)施例8

一種楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的制備方法，包括以下步驟：（1）將楊梅素和4,4'-聯(lián)吡啶按摩爾比1:4置于透明玻璃儀器中，然后共同溶解在10mL的乙醇和有機(jī)溶劑的混合溶劑中，在混合溶液中的楊梅素所占質(zhì)量濃度為6.5mg/mL。

（2）將盛有上述混合溶液的玻璃容器置于攪拌器上攪拌或置于超聲波儀器中超聲，待粉末完全溶解后，將混合溶液置于室溫下?lián)]發(fā)，通過溶液揮發(fā)法30天后生成黃色塊狀共晶，即為楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

所述的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯。

實(shí)施例9

一種楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的制備方法，包括以下步驟：（1）將楊梅素和4,4'-聯(lián)吡啶按摩爾比3:3置于透明玻璃儀器中，然后共同溶解在10mL的乙醇和有機(jī)溶劑的混合溶劑中，在混合溶液中的楊梅素所占質(zhì)量濃度為3mg/mL。

（2）將盛有上述混合溶液的玻璃容器置于攪拌器上攪拌或置于超聲波儀器中超聲，待粉末完全溶解后，將混合溶液置于室溫下?lián)]發(fā)，通過溶液揮發(fā)法15天后生成黃色塊狀共晶，即為楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

所述的有機(jī)溶劑為異丙醇。

實(shí)施例10

一種楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶的制備方法，包括以下步驟：（1）將楊梅素和4,4'-聯(lián)吡啶按摩爾比2:2置于透明玻璃儀器中，然后共同溶解在10mL的乙醇和有機(jī)溶劑的混合溶劑中，在混合溶液中的楊梅素所占質(zhì)量濃度為5mg/mL。

（2）將盛有上述混合溶液的玻璃容器置于攪拌器上攪拌或置于超聲波儀器中超聲，待粉末完全溶解后，將混合溶液置于室溫下?lián)]發(fā)，通過溶液揮發(fā)法20天后生成黃色塊狀共晶，即為楊梅素4,4’-聯(lián)吡啶乙醇共晶。

所述的有機(jī)溶劑為丙酮和水的混合物。

實(shí)施例11

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：

楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶的紅外譜圖（IR）如圖2所示：在3290 cm^-1~3470 cm^-1處的峰可以歸屬為ν（-OH）的振動(dòng)峰，3088 cm^-1歸屬于ν（C-H）的伸縮振動(dòng)峰，1655~1500 cm^-1歸屬于ν（C=O）、ν（C=N ）和ν（C=C）的振動(dòng)峰，在1450~1315 cm^-1歸屬于-CH的彎曲振動(dòng)峰，在1200~1025 cm^-1歸屬于ν（C-O）的振動(dòng)峰，940~620 cm^-1處的強(qiáng)峰為苯環(huán)面外的δ（C-H）振動(dòng)吸收峰。進(jìn)一步證明了楊梅素共晶的形成。

楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶的X-射線粉末衍射（XRPD）譜圖如圖3所示，這些峰的出峰位置既不同于原料藥楊梅素也不同于前驅(qū)體4,4'-聯(lián)吡啶的XRPD譜圖，證明了新晶相的形成。

楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶的差示掃描熱量分析（DSC）結(jié)果如圖4所示。圖中顯示只有共晶的熔融峰（262°C和 284°C），而無楊梅素（369°C）和4,4'-聯(lián)吡啶（114°C）的熔融峰，證明產(chǎn)物為純相。

楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶在0.1M/HCl溶液中的溶解速率曲線如圖5所示。由圖可見：本發(fā)明所提供的楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶的溶解度及溶出速率相對(duì)于楊梅素均有顯著提升。

楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶的抗大腸桿菌活性結(jié)果如圖6所示。由圖分析可知，楊梅素4,4'-聯(lián)吡啶乙醇共晶的對(duì)大腸桿菌（E.coli）的抑制效果相比原料藥楊梅素有顯著提升。