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一種嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法與流程

文檔序號:12545028閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

S1,將血液轉(zhuǎn)移至離心管,用生理鹽水稀釋,混合均勻;

S2,將3mL的泛影葡胺加入Ficoll溶液,得到混合液,將混合液放入離心管中,并將離心管豎直放置在操作臺上,將稀釋好的血液放入二分之一,并緩慢攪拌,靜止1-2min后,再加入剩余的二分之一血液,緩慢攪拌直至混合均勻;

S3,將S2中加好血液、泛影葡胺與Ficoll溶液的離心管放置在離心機(jī),在20-30℃的溫度下離心25-45min;

S4,將S3中離心后的離心管移至操作臺,取中間的白膜層即淋巴細(xì)胞層并轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)板上;

S5,將培養(yǎng)板放置在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h;

S6,將S5中培養(yǎng)后的培養(yǎng)板上加入病毒,并放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)持續(xù)5-10天;

S7,檢測培養(yǎng)板上的細(xì)胞,并確定T細(xì)胞是否被感染,即可完成嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法,其特征在于,所述生理鹽水與血液的體積比為1:1-2。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法,其特征在于,所述生理鹽水與血液的體積比為1:2。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法,其特征在于,所述泛影葡胺的質(zhì)量體積濃度為340g/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法,其特征在于,所述S3中,將S2中加好血液、泛影葡胺與Ficoll溶液的離心管放置在離心機(jī),在25℃的溫度下離心35min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法,其特征在于,所述S4中,操作臺為超凈操作臺。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法,其特征在于,所述S5中,培養(yǎng)箱的溫度為36-38℃,培養(yǎng)箱內(nèi)的二氧化碳為4-10%。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法,其特征在于,所述S5中,培養(yǎng)箱的溫度為37℃,培養(yǎng)箱內(nèi)的二氧化碳為7%。

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