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NK細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)基組合和培養(yǎng)方法與流程

文檔序號(hào):12056327閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種NK細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)基組合,包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和活化適應(yīng)培養(yǎng)基;

其中,所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成成分包括:RPMI-1640培養(yǎng)基、GT-T551培養(yǎng)基、慶大霉素和BSA;

所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成成分包括:RPMI-1640培養(yǎng)基、GT-T551培養(yǎng)基、BSA、香菇多糖、靈芝多糖、茶多酚、大蒜素和紫杉醇;

所述增殖培養(yǎng)基的組成成分包括:RPMI-1640培養(yǎng)基、GT-T551培養(yǎng)基、BSA和白細(xì)胞介素;

所述活化適應(yīng)培養(yǎng)基包括:RPMI-1640培養(yǎng)基、GT-T551培養(yǎng)基、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白和谷氨酰胺。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組合,其特征在于,所述白細(xì)胞介素為IL-12、IL-15、IL-18和IL-21中的至少一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基組合,其特征在于,所述白細(xì)胞介素為IL-12、IL-15、IL-18和IL-21。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基組合,其特征在于,所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括以下含量的各組分:慶大霉素50-90IU/mL、BSA 100-300μg/mL、RPMI-1640培養(yǎng)基與GT-T551培養(yǎng)基的體積比為1:0.8-1.2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基組合,其特征在于,所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括以下含量的各組分:BSA 100-300μg/mL、香菇多糖50-80μg/mL、靈芝多糖50-80μg/mL、茶多酚20-40μg/mL、大蒜素20-40μg/mL、紫杉醇20-40μg/mL,RPMI-1640培養(yǎng)基與GT-T551培養(yǎng)基的體積比為1:1-1.4。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基組合,其特征在于,所述增殖培養(yǎng)基包括以下含量的各組分:BSA 100-300μg/mL、IL-12 5-15ng/mL、IL-15 5-15ng/mL、IL-18 5-15ng/mL和IL-21 5-15ng/mL,RPMI-1640培養(yǎng)基與GT-T551培養(yǎng)基的體積比為1:1.2-1.6。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基組合,其特征在于,所述活化適應(yīng)培養(yǎng)基包括以下含量的各組分:胰島素1.5-3μg/mL、轉(zhuǎn)鐵蛋白2-3μg/mL、谷氨酰胺1-2mM,RPMI-1640培養(yǎng)基與GT-T551培養(yǎng)基的體積比為1:2-4。

8.一種NK細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)方法,其特征在于,包括使用權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)所述的NK細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)基組合,所述方法包括:

基礎(chǔ)培養(yǎng):將分離的單個(gè)核細(xì)胞接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)1-2天獲得基礎(chǔ)培養(yǎng)細(xì)胞;

誘導(dǎo)培養(yǎng):將所述基礎(chǔ)培養(yǎng)細(xì)胞接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)2-4天獲得誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞;

增殖培養(yǎng):將所述誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞接種于增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-7天獲得增殖培養(yǎng)細(xì)胞;

活化適應(yīng):將所述增殖培養(yǎng)細(xì)胞接種于活化適應(yīng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)0.5-1.5天。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的培養(yǎng)方法,其特征在于,所述接種的細(xì)胞密度為4.5×105個(gè)/mL-5.5×105個(gè)/mL。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的培養(yǎng)方法,其特征在于,所述基礎(chǔ)培養(yǎng)、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和活化適應(yīng)在免疫細(xì)胞體外擴(kuò)增裝置中進(jìn)行,所述裝置包括細(xì)胞培養(yǎng)袋(1)和承載所述細(xì)胞培養(yǎng)袋(1)的承載臺(tái)(3),該裝置還包括容納于所述細(xì)胞培養(yǎng)袋(1)中的磁性浮球(2)以及在懸掛于所述細(xì)胞培養(yǎng)袋(1)上方并且能夠驅(qū)動(dòng)所述磁性浮球(2)在所述細(xì)胞培養(yǎng)袋(1)中移動(dòng)的磁性懸掛驅(qū)動(dòng)器(4),所述磁性懸掛驅(qū)動(dòng)器(4)包括能夠吸引所述磁性浮球(2)的磁體片(41)和能夠懸掛且驅(qū)動(dòng)所述磁體片(41)在所述細(xì)胞培養(yǎng)袋(1)上方移動(dòng)的懸掛驅(qū)動(dòng)架(42);所述細(xì)胞培養(yǎng)袋(1)中充有細(xì)胞培養(yǎng)液,述細(xì)胞培養(yǎng)液中含有培養(yǎng)基以及待擴(kuò)增的細(xì)胞;所述磁性浮球(2)在浮力和磁力的合力作用下漂浮在培養(yǎng)液液面上;所述磁體片(41)能夠在所述細(xì)胞培養(yǎng)袋(1)上方往復(fù)移動(dòng),從而通過磁力的作用,驅(qū)動(dòng)所述磁性浮球(2)在漂浮狀態(tài)下在培養(yǎng)液液面往復(fù)移動(dòng),所述磁性浮球(2)在培養(yǎng)液液面以下的部分能夠攪拌培養(yǎng)液,從而在所述細(xì)胞培養(yǎng)袋(1)中模擬血液流動(dòng)的體內(nèi)環(huán)境。

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