本發(fā)明涉及肝素鈉制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從動(dòng)物腸衣中提取肝素鈉的工藝。
背景技術(shù)：
肝素鈉是一種由動(dòng)物結(jié)締組織的肥大細(xì)胞產(chǎn)生的酸性粘多糖的硫酸酯類物質(zhì)，因其具有強(qiáng)抗凝作用，是防治深層靜脈血栓形成等血栓栓塞性疾病的首選藥物，隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)肝素鈉不僅有抗凝、抗血栓形成和調(diào)整血脂的作用，還有抗炎、抗過敏、抗病毒、抗癌等多種生物學(xué)功能。雖肝素鈉用于臨床已有60余年的歷史，但迄今還沒有一種能夠完全代替它的產(chǎn)品，所以它仍然是最重要的抗凝血和抗血栓的生化藥物，且目前只能從動(dòng)物的部分組織中提取，不能人工合成。我國是生豬養(yǎng)殖、屠宰和消費(fèi)大國，更是腸衣加工大國。腸粘膜是提取肝素鈉的最佳原料，國內(nèi)有大量致力于從腸粘膜中提取肝素鈉的廠家，大部分企業(yè)用鹽析法或酶鹽結(jié)合法提取肝素鈉。目前的肝素鈉提取工藝，所得產(chǎn)品收率低，殘留量比較大，分解不完全，分解后的雜質(zhì)比較多，純度低，含有大量的蛋白質(zhì)，色澤黑褐，給臨床用藥的制備增加難度。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種肝素鈉的高效制備工藝，采用超聲酶解，酶解后除雜，顯著提高肝素鈉成品的純度和收率，肝素鈉純度較高，產(chǎn)品得率高，降低了后續(xù)進(jìn)一步純化成藥用肝素鈉的難度，確保最終所獲得的藥用肝素鈉產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好，工藝簡單，生產(chǎn)周期短。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種肝素鈉的高效制備工藝，包括以下步驟：
(1)腸粘膜超聲酶解：將豬腸洗凈、絞碎，加水混合，得豬腸混合水，將pH值為8-9的料液與豬腸混合水在45℃的溫度下，與3％體積比的蛋白酶在超聲條件下酶解，超聲功率為320-350W，酶解時(shí)間為40-50min，然后自然沉淀，通過陶瓷膜錯(cuò)流過濾，收集濾液；
(2)吸附：調(diào)節(jié)濾液的pH值在7.0-7.5，控制濾液的溫度在50-60℃，調(diào)節(jié)濾液的鹽度至2.5-3.0°，向?yàn)V液中加入羅門哈斯樹脂，按每億國際單位粗品肝素鈉加4.5-6kg羅門哈斯樹脂，攪拌吸附5-6小時(shí)之后，放料收集樹脂；
(3)洗脫：將步驟(2)回收的樹脂，用65℃的清水沖洗1-2遍，然后用65℃，pH為8.5-9.0的0.4mol/L的NaCl水溶液浸泡0.5h后，排凈浸泡液，加入質(zhì)量為0.8倍樹脂質(zhì)量2.5mol/L的NaCl溶液，55-60℃攪拌4h，過濾收集脫附液；再添加質(zhì)量為1.4倍樹脂質(zhì)量的2.5mol/L的NaCl溶液，55-60℃攪拌1h，過濾收集脫附液；
(4)醇沉：將步驟(3)中第一次和第二次洗脫的脫附液合并，加入85-95％乙醇至脫附液乙醇濃度為40-45度，混合攪拌后靜置沉淀8-10h，回收上清液并收集肝素鈉沉淀；
(5)純化：將步驟(4)中回收的肝素鈉沉淀用5％的NaCl鹽溶液溶解，離心分離或過濾去除固體雜質(zhì)后，再次加入85-95％乙醇至洗脫液乙醇濃度為40-45度，混合攪拌后靜置沉淀9-10h，回收上清液并收集肝素鈉沉淀；
(6)干燥：干燥即得到純品的肝素鈉。
與已有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：
本發(fā)明的肝素鈉的高效制備工藝，采用超聲酶解，酶解后除雜，顯著提高肝素鈉成品的純度和收率，肝素鈉純度較高，產(chǎn)品得率高，降低了后續(xù)進(jìn)一步純化成藥用肝素鈉的難度，確保最終所獲得的藥用肝素鈉產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好，工藝簡單，生產(chǎn)周期短。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明不僅限于這些實(shí)施例，在未脫離本發(fā)明宗旨的前提下，所作的任何改進(jìn)均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
實(shí)施例1：
一種肝素鈉的高效制備工藝，包括以下步驟：
(1)腸粘膜超聲酶解：將豬腸洗凈、絞碎，加水混合，得豬腸混合水，將pH值為8的料液與豬腸混合水在45℃的溫度下，與3％體積比的蛋白酶在超聲條件下酶解，超聲功率為350W，酶解時(shí)間為45min，然后自然沉淀，通過陶瓷膜錯(cuò)流過濾，收集濾液；
(2)吸附：調(diào)節(jié)濾液的pH值在7.0，控制濾液的溫度在55℃，調(diào)節(jié)濾液的鹽度至2.5°，向?yàn)V液中加入羅門哈斯樹脂，按每億國際單位粗品肝素鈉加5kg羅門哈斯樹脂，攪拌吸附5小時(shí)之后，放料收集樹脂；
(3)洗脫：將步驟(2)回收的樹脂，用65℃的清水沖洗2遍，然后用65℃，pH為8.5的0.4mol/L的NaCl水溶液浸泡0.5h后，排凈浸泡液，加入質(zhì)量為0.8倍樹脂質(zhì)量2.5mol/L的NaCl溶液，55℃攪拌4h，過濾收集脫附液；再添加質(zhì)量為1.4倍樹脂質(zhì)量的2.5mol/L的NaCl溶液，55℃攪拌1h，過濾收集脫附液；
(4)醇沉：將步驟(3)中第一次和第二次洗脫的脫附液合并，加入85％乙醇至脫附液乙醇濃度為40度，混合攪拌后靜置沉淀10h，回收上清液并收集肝素鈉沉淀；
(5)純化：將步驟(4)中回收的肝素鈉沉淀用5％的NaCl鹽溶液溶解，離心分離或過濾去除固體雜質(zhì)后，再次加入95％乙醇至洗脫液乙醇濃度為40度，混合攪拌后靜置沉淀10h，回收上清液并收集肝素鈉沉淀；
(6)干燥：干燥即得到純品的肝素鈉。
本發(fā)明的肝素鈉的高效制備工藝，采用超聲酶解，酶解后除雜，肝素鈉純度高，產(chǎn)品得率高。