一種去除肝素鈉中有機(jī)殘留的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種去除肝素鈉中有機(jī)殘留的方法，該產(chǎn)品主要經(jīng)過酶解，除蛋白、沉淀干燥等工序制得。該方法主要解決目前該類產(chǎn)品生產(chǎn)工藝流程復(fù)雜、堿酸或鹽用量較大、制備周期長、收率低等問題；該方法僅需一步酶解即可把硫酸軟骨素中的軟骨提取出來，不需要堿解或用鹽浸泡，制備后的產(chǎn)品色澤潔白、質(zhì)地疏松、收率可高達(dá)43％及以上，且純度較高，符合國內(nèi)外口服標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)工序簡單，周期較短，反應(yīng)時間僅需3-8小時，堿用量比稀堿酶解法節(jié)約80％以上，同時減少了下游提純的難度，減輕對環(huán)境的污染，有利于環(huán)保。
【專利說明】一種去除肝素鈉中有機(jī)殘留的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生化制藥領(lǐng)域，具體涉及到一種去除肝素鈉中有機(jī)殘留的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]硫酸軟骨素鈉，英文名Chondroitin sulfate sodium,是動物軟骨中提取的酸性粘多糖，多存在于動物的軟骨、喉骨、鼻骨(41%)、牛、馬中膈和氣管中，其分子結(jié)構(gòu)為β -D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通過β I — 3糖苷鍵形成的重復(fù)二糖單位所組成的多糖鏈。
[0003]硫酸軟骨素鈉主要用于治療風(fēng)濕和類風(fēng)濕疾病的藥物，還具有抗凝、抗癌、抗血栓、降血脂等作用，可用于治療頭痛、偏頭痛、冠心病、心絞痛等癥狀。在國外，對硫酸軟骨素鈉藥理的研究已經(jīng)達(dá)到分子水平。
[0004]目前國內(nèi)提取硫酸軟骨素鈉的方法主要有三種:鹽解法、堿解法和酶解法。主要采用的分離純化技術(shù)有:乙醇沉淀法、離子交換色譜法、纖維素分離法、季銨鹽配合法、吸附法、區(qū)帶電泳分離法等。在以上的集中提取方法中，收率雖然可以達(dá)到很高的水平，但生產(chǎn)方法都存在很大問題，如鹽解法工藝中存在除酸性蛋白調(diào)節(jié)PH值1-2在產(chǎn)品量大時耗時很長，硫酸軟骨素中的氨基易被解離下來，從而影響了硫酸軟骨素的收率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是，提供一種提高硫酸軟骨素收率的制備方法，此方法主要從節(jié)能、節(jié)約試劑、縮短生產(chǎn)時間、簡化生產(chǎn)工藝等角度出發(fā)，提供一種提高硫酸軟骨素收率的制備方法，該方法利于工業(yè)化生產(chǎn)。
`[0006]由于硫酸軟骨素和軟骨中的蛋白質(zhì)是以糖肽共價鍵結(jié)合在一起的，在堿性條件下，以胰蛋白酶為催化劑，糖胺聚糖可以從軟骨組織中的膠原蛋白中分離出來。根據(jù)這個原理，本工藝直接把胰蛋白酶加入，調(diào)節(jié)反應(yīng)的ΡΗ，溫度條件，直接生產(chǎn)硫酸軟骨素。這樣以來，縮短了工藝流程，反應(yīng)時間只需要4-8小時，用堿量比稀堿酶解法節(jié)省80%以上，收率不但沒有下降，反而比原來要高3-5個百分點。
[0007]本發(fā)明的步驟如下:
[0008]1、將潔白干凈的動物軟骨放入反應(yīng)罐內(nèi)，加入適量的水浸泡，并加入軟骨重量的
0.1% -1.6%的胰蛋白酶，調(diào)節(jié)PH在8.5-9.5之間，控制溫度在40-55°C之間，攪拌2_9小時；
[0009]2、當(dāng)動物軟骨反應(yīng)完全后，用鹽酸調(diào)節(jié)酶解液使其PH在5.5-7.5之間，加熱至65-80°C，保溫 10-40 分鐘；
[0010]3、待酶解液冷卻后，過濾或離心除渣，過濾后得較清澈的濾液酶解液，加入酶解液重量0.2% -2.0%的氯化鈉，使PH在3.5-5.5之間，攪拌20-50分鐘，過濾或離心除渣。
[0011]4、將上步所得酶解液加入其體積2-4倍的濃度為90%的乙醇，使乙醇濃度達(dá)到50% -80%，沉淀；[0012]5、將上步沉淀物用濃度為95%的乙醇復(fù)沉2到3遍，干燥后即得所述的硫酸軟骨素成品。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)點為:本制備方法通過對目前工藝的改進(jìn)創(chuàng)新，采用進(jìn)一步酶解法生產(chǎn)硫酸軟骨素，通過正交實驗，找到生產(chǎn)工藝的優(yōu)化生產(chǎn)工藝條件為:水解時間為6小時，水解溫度為48°C,胰蛋白酶用量為0.8%軟骨重，三種因素中對水解影響程度主要為水解溫度，其次為酶用量和水解時間。整個反應(yīng)過程PH值控制在8.5-9.5之間。此最佳組合可使硫酸軟骨素收率達(dá)到43%及以上。采用新工藝后，可簡化生產(chǎn)流程，大大縮短生產(chǎn)時間，減少堿用量，同時減少下游提純`的難度，減輕對環(huán)境的污染。
【權(quán)利要求】
1.一種去除肝素鈉中有機(jī)殘留的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將潔白干凈的動物軟骨放入反應(yīng)罐內(nèi)，加入適量的水浸泡，并加入軟骨重量的0.1% -1.6%的胰蛋白酶，調(diào)節(jié)PH在8.5-9.5之間，控制溫度在40_55°C之間，攪拌2_9小時； (2)當(dāng)動物軟骨反應(yīng)完全后，用鹽酸調(diào)節(jié)酶解液使其PH在5.5-7.5之間，加熱至65-80°C，保溫 10-40 分鐘； (3)待酶解液冷卻后，過濾或離心除渣，過濾后得較清澈的濾液酶解液，加入酶解液重量0.2% -2.0%的氯化鈉，使PH在3.5-5.5之間，攪拌20-50分鐘，過濾或離心除渣； (4)將上步所得酶解液加入其體積2-4倍的濃度為90%的乙醇，使乙醇濃度達(dá)到50% -80%，沉淀； (5)將上步沉淀物用濃度為95%的乙醇復(fù)沉2到3遍，干燥后即得所述的硫酸軟骨素成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:(3)步中加入的酶解液重0.2% -2.0%的氯化鈉鹽析，以增強(qiáng)硫酸軟骨素的沉淀效果。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:水解溫度為48°C。
4.根據(jù)權(quán)利要 求1所述的方法，其特征在于:水解時間為6h，胰酶用量為0.8%倍軟骨重。
【文檔編號】C08B37/10GK103804525SQ201310631226
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2013年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月26日
【發(fā)明者】劉乃山, 陸玉梅, 遲培升, 夏襯來 申請人:青島九龍生物醫(yī)藥有限公司