本發(fā)明屬于醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光性質(zhì)的化合物及其制備方法和在脂滴特異性熒光成像中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

脂滴不僅是脂類分子和蛋白質(zhì)的重要貯存場所，而且是一個動態(tài)變化的多功能細(xì)胞器。脂滴大小和數(shù)量在不同細(xì)胞中差別很大。由于脂滴不僅可作為能量貯存器，而且在膜的合成、蛋白質(zhì)降解等生理活動中發(fā)揮著重要作用，脂滴與許多疾病密切相關(guān)，包括癌癥、炎癥、病毒感染和肥胖等。

癌細(xì)胞具有快速增殖的特點(diǎn)，因此對脂肪酸和膦脂等脂類分子具有高需求，相應(yīng)的癌細(xì)胞內(nèi)脂滴的含量也明顯增加，因此脂滴含量在癌細(xì)胞內(nèi)的高表達(dá)可作為癌癥的標(biāo)記物，迫切需要發(fā)展脂滴特異性的熒光探針來探究脂滴在癌癥中的作用。

為了實(shí)現(xiàn)脂滴特異性熒光成像，需要解決以下幾個關(guān)鍵問題：(1)為了實(shí)現(xiàn)脂滴的高亮度熒光成像，熒光材料需要高濃度聚集在脂滴中，然而傳統(tǒng)熒光材料的聚集誘導(dǎo)猝滅的缺陷嚴(yán)重限制了它們在高亮度脂滴熒光成像中的應(yīng)用；(2)為了降低生產(chǎn)成本，需要發(fā)展簡易制備的脂滴特異性熒光探針。然而，傳統(tǒng)的脂滴特異性熒光探針需要多步合成，難以制備，且成本高昂；(3)脂滴特異性熒光探針應(yīng)具有大的近紅外區(qū)的雙光子吸收截面，在近紅外雙光子激發(fā)的熒光成像中可有效減少背景噪音，降低光傷害，提高深層穿透能力；(4)脂滴特異性熒光探針分子應(yīng)具有快速的活細(xì)胞穿透能力，便于成像應(yīng)用；(5)強(qiáng)的光穩(wěn)定性，便于長期連續(xù)觀測，然而傳統(tǒng)的熒光材料具有易發(fā)生光漂白的缺陷，難以用于持續(xù)觀測。

聚集誘導(dǎo)發(fā)光材料作為新一代熒光材料，具有強(qiáng)抗光漂白能力、聚集態(tài)高發(fā)光效率、大的斯托克位移和低毒性等優(yōu)點(diǎn)，可有效克服聚集誘導(dǎo)猝滅的缺陷，在生物成像和檢測領(lǐng)域日益獲得廣泛應(yīng)用，特別適用于細(xì)胞器的成像和生理功能探究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服上述現(xiàn)有熒光材料的缺陷，本發(fā)明的首要目的在于提供一種具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光性質(zhì)的芐叉茚二酮類化合物，該化合物可實(shí)現(xiàn)脂滴特異性的單光子和雙光子熒光成像。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述芐叉茚二酮類類化合物的制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述芐叉茚二酮類化合物在脂滴特異性熒光成像中的應(yīng)用，通過特異性熒光成像用以檢測脂滴運(yùn)動變化情況；特別是在近紅外雙光子激發(fā)的細(xì)胞脂滴特異性熒光成像中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種芐叉茚二酮類化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示：

其中R¹為氫、鹵素、氰基、硝基、C_1-30烷基、芳基、雜芳基；

R²、R³獨(dú)立地為C_1-30烷基、芳基、雜芳基；

所述的烷基為直鏈或支鏈烷基；優(yōu)選為甲基、乙基、丙基、丁基、異丁基、叔丁基；

所述的芳基指具有6-20個碳原子的單環(huán)或多環(huán)芳族基團(tuán)，優(yōu)選為苯基、萘基、蒽基或芘基；

所述的雜芳基指具有1-20個碳原子、1-4個選自N、S、O雜原子的單環(huán)或多環(huán)雜芳族基團(tuán)，優(yōu)選為吡咯基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、氮雜萘基、氮雜蒽基或氮雜芘基；

優(yōu)選地，R¹為氫，R²為苯基、R³為苯基。

上述芐叉茚二酮類化合物的反應(yīng)方式如下：

式II、式III中各取代基R¹、R²、R³的定義與式I的相同；

上述芐叉茚二酮類化合物的制備方法，包括以下步驟：

將式II化合物和式III化合物溶解于有機(jī)溶劑中，在惰性氣體保護(hù)和堿的作用下，回流反應(yīng)，得到芐叉茚二酮類化合物；

式II化合物的結(jié)構(gòu)為式III化合物的結(jié)構(gòu)為其中R¹為氫、鹵素、氰基、硝基、直鏈或支鏈C_1-30烷基、芳基、雜芳基；R²、R³獨(dú)立地為直鏈或支鏈C_1-30烷基、芳基、雜芳基。R¹、R²、R³的定義與式I的相同。

所述式II化合物和式III化合物的摩爾比為1:1～1:2，優(yōu)選為1:1.2；所述惰性氣體為氮?dú)?，所述堿為嗎啡啉或哌啶。

所述有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、丁醇、乙腈或N,N-二甲基甲酰胺中一種以上，優(yōu)選為乙醇；所述反應(yīng)時間為1～12小時；所述反應(yīng)的溫度為有機(jī)溶劑沸點(diǎn)-5℃到有機(jī)溶劑沸點(diǎn)+5℃，優(yōu)選為有機(jī)溶劑沸點(diǎn)。

所述堿的用量與式II化合物的摩爾比為1:1。

上述的芐叉茚二酮類化合物可以作為脂滴染料用于脂滴的特異性熒光成像，特別是細(xì)胞內(nèi)脂滴的特異性熒光成像；更進(jìn)一步用于在近紅外雙光子激發(fā)的細(xì)胞脂滴特異性熒光成像。

所述細(xì)胞為癌細(xì)胞；尤其是肺癌細(xì)胞。

芐叉茚二酮類化合物具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng)，從而可用于對脂滴進(jìn)行特異性高信噪比熒光成像。通過將芐叉茚二酮類化合物與商用脂滴染料BODIPY493/503Green進(jìn)行共染實(shí)驗(yàn)證實(shí)了芐叉茚二酮類化合物對脂滴具有良好的染色效果和特異性。

芐叉茚二酮類化合物在近紅外區(qū)(800-1000nm)還具有大的雙光子吸收截面，可用于脂滴特異性的雙光子激發(fā)熒光成像，具有高信噪比的優(yōu)點(diǎn)。

值得注意的是，本發(fā)明制備的芐叉茚二酮類化合物的發(fā)光不同于傳統(tǒng)的熒光成像，而是表現(xiàn)出聚集誘導(dǎo)發(fā)光的性質(zhì)，這意味著即使在高濃度條件下，芐叉茚二酮類也可以進(jìn)行熒光成像，而且比低濃度下具有更高的發(fā)光效率，而傳統(tǒng)的熒光染料在高濃度條件下則具有聚集誘導(dǎo)猝滅的現(xiàn)象，因此傳統(tǒng)的熒光染料不利于在高濃度條件下進(jìn)行熒光成像。

需強(qiáng)調(diào)的是，在現(xiàn)有技術(shù)中，未有文獻(xiàn)報(bào)道過本發(fā)明的芐叉茚二酮類化合可以作為脂滴染料。

在本發(fā)明中，“聚集誘導(dǎo)發(fā)光”是指熒光化合物在稀溶液中幾乎不發(fā)光，但在聚集態(tài)或固態(tài)發(fā)出強(qiáng)熒光的現(xiàn)象。例如，在本發(fā)明中，由于分子內(nèi)運(yùn)動受限和扭曲的分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移機(jī)制，芐叉茚二酮類化合物在溶液態(tài)不發(fā)出熒光或發(fā)光很弱，但在聚集態(tài)發(fā)出強(qiáng)熒光。

本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：

1、本發(fā)明的新化合物可實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞內(nèi)脂滴的特異性熒光成像，而且具有易于制備、在近紅外區(qū)具有大的雙光子吸收截面值、紅色熒光、成像信噪比高、細(xì)胞毒性小、斯托克位移大、光穩(wěn)定性強(qiáng)、可快速進(jìn)入活細(xì)胞等優(yōu)點(diǎn)。

2、本發(fā)明的新化合物具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光優(yōu)勢，可有效克服傳統(tǒng)熒光染料的聚集誘導(dǎo)猝滅的缺陷。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA的紫外吸收和熒光發(fā)射光譜圖；(A)為化合物IND-TPA在四氫呋喃中的歸一化紫外吸收光譜圖；(B)為化合物IND-TPA在四氫呋喃和水的混合溶液中不斷增加水含量的熒光發(fā)射光譜圖(10^-5mol·L^-1)；(C)為化合物IND-TPA在四氫呋喃和水的混合溶液中不斷增加水含量的最大熒光發(fā)射強(qiáng)度與四氫呋喃溶液中最大熒光發(fā)射強(qiáng)度的比值變化圖；

圖2為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在不同水含量的四氫呋喃和水的混合溶液中歸一化紫外吸收光譜圖(10^-5mol·L^-1)；

圖3為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在乙二醇和甘油中的熒光發(fā)射光譜圖；

圖4為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在99％水含量的四氫呋喃和水的混合溶液中的動態(tài)光散射粒徑分布圖；

圖5為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA對HCC827細(xì)胞(A)和A549細(xì)胞(B)的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；

圖6為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中，與脂滴染料BODIPY493/503Green的共染圖；其中，(A)細(xì)胞明場圖；(B)為IND-TPA在HCC827細(xì)胞中的脂滴染色圖；(C)為BODIPY493/503在HCC827細(xì)胞中的脂滴染色圖；(D)為(A)、(B)和(C)的疊加圖；(E)為IND-TPA和BODIPY493/503在HCC827細(xì)胞中共染的熒光信號變化趨勢圖；

圖7為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在A549細(xì)胞中，與脂滴染料BODIPY493/503的共染圖；其中，(A)細(xì)胞明場圖；(B)為IND-TPA在A549細(xì)胞中的脂滴染色圖；(C)為BODIPY493/503在A549細(xì)胞中的脂滴染色圖；(D)為(A)、(B)和(C)的疊加圖；(E)為IND-TPA和BODIPY493/503在A549細(xì)胞中共染的熒光信號變化趨勢圖；

圖8為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在(A)HCC827細(xì)胞和(B)A549細(xì)胞中，與脂滴染料BODIPY493/503的熒光信號變化相關(guān)性圖；

圖9為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在HCC827和A549細(xì)胞中，與脂滴染料BODIPY493/503和細(xì)胞核染料Hoechst 33342的共染圖；其中，(A)為HCC827細(xì)胞的明場圖；(B)為IND-TPA在HCC827細(xì)胞中的脂滴染色圖；(C)為BODIPY493/503在HCC827細(xì)胞中的脂滴染色圖；(D)為Hoechst 33342在HCC827細(xì)胞中的細(xì)胞核染色圖；(E)為(A)、(B)、(C)和(D)的疊加圖；(F)為A549細(xì)胞的明場圖；(G)為IND-TPA在A549細(xì)胞中的脂滴染色圖；(H)為BODIPY493/503在A549細(xì)胞中的脂滴染色圖；(I)為Hoechst 33342在A549細(xì)胞中的細(xì)胞核染色圖；(J)為(F)、(G)、(H)和(I)的疊加圖；

圖10為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中熒光圖；其中(A)為化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中，7％的功率的541nm光照下的熒光強(qiáng)度變化圖；(B)為化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中，于光照下不同時間的細(xì)胞熒光成像圖；

圖11為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中的運(yùn)動變化監(jiān)測圖，其中(A)為0min的脂滴染色圖；(B)為1min的脂滴染色圖；(C)為3min的脂滴染色圖；(D)為5min的脂滴染色圖；(E)為0和1min的脂滴染色疊加圖；(F)為1和3min的脂滴染色疊加圖；(G)為3和5min的脂滴染色疊加圖；(H)為HCC827細(xì)胞的明場圖；

圖12為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA雙光子吸收截面值圖；

圖13為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中的雙光子激發(fā)熒光圖，激發(fā)波長為920nm。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。下面以芐叉茚二酮類化合物2-(4-(二苯胺基)苯亞甲基)-1H-茚-1,3(2H)-二酮為例進(jìn)行具體說明，其他芐叉茚二酮類化合物也具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光優(yōu)勢和可實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞內(nèi)脂滴的特異性熒光成像，在近紅外區(qū)具有大的雙光子吸收截面值、紅色熒光、成像信噪比高、細(xì)胞毒性小、斯托克位移大、光穩(wěn)定性強(qiáng)、可快速進(jìn)入活細(xì)胞等特點(diǎn)。

實(shí)施例1

芐叉茚二酮類化合物IND-TPA：2-(4-(二苯胺基)苯亞甲基)-1H-茚-1,3(2H)-二酮(R¹＝氫，R²＝R³＝苯基)結(jié)構(gòu)式如下：

上述芐叉茚二酮類化合物的制備方法，包括以下步驟：

4-二苯胺基苯甲醛(273mg，1.0mmol)，1,3-茚二酮(146mg，1.0mmol)和嗎啡啉(85mg，1.0mmol)溶于15mL乙醇中，隨后在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，回流反應(yīng)(78℃下反應(yīng)3小時)；待反應(yīng)結(jié)束，恢復(fù)至室溫后，過濾后真空干燥得到紅色固體產(chǎn)物2-(4-(二苯胺基)苯亞甲基)-1H-茚-1,3(2H)-二酮(285mg，產(chǎn)率71％)。有關(guān)結(jié)構(gòu)表征數(shù)據(jù)如下：

¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz):δ8.49(d,J＝9.0Hz,2H),7.93–7.89(m,4H),7.71(s,1H),7.48–7.45(m,4H),7.30–7.26(m,6H),6.85(d,J＝9.0Hz,2H)；¹³C NMR(CD₂Cl₂,125MHz):191.3,189.6,152.7,146.6,145.8,142.4,140.0,136.8,134.8,134.5,129.8,126.6,125.7,125.5,125.3,122.8,122.8,118.9；HRMS(ESI):m/z[M+Na]⁺calcd for C₂₈H₁₉NNaO₂,424.1313；found,424.1308。

實(shí)施例2

實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA的光物理性質(zhì)表征：

將四氫呋喃和水按照不同的體積比(四氫呋喃:水＝100:0，90:10，80:20，70:30，60:40，50:50，40:60，30:70，20:80，10:90，1:99)混合，形成含水量(f_w)不同的混合液，將化合物IND-TPA溶解到這些混合液中，使化合物的濃度為10^-5mol·L^-1，隨后檢測熒光發(fā)射光譜和在四氫呋喃中的紫外吸收光譜，結(jié)果見圖1。圖1為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA的紫外吸收和熒光發(fā)射光譜圖；(A)化合物IND-TPA在四氫呋喃中的歸一化紫外吸收光譜圖；(B)為化合物IND-TPA在四氫呋喃和水的混合溶液中不斷增加水含量的熒光發(fā)射光譜圖(10^-5mol·L^-1)；(C)為化合物IND-TPA在四氫呋喃和水的混合溶液中不斷增加水含量的最大熒光發(fā)射強(qiáng)度與四氫呋喃溶液中最大熒光發(fā)射強(qiáng)度的比值變化圖。

從圖1可以看出，當(dāng)不斷增加混合溶液體系中的水含量至70％時，化合物IND-TPA的熒光首先減弱，這是由于扭曲的分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移效應(yīng)造成的。進(jìn)一步在四氫呋喃和水的混合溶劑體系中增加水的比例至99％時，化合物IND-TPA的溶解度降低從而聚集，熒光強(qiáng)度迅速增強(qiáng)，這是由于形成聚集體后，分子內(nèi)運(yùn)動受限造成的。

實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在不同水含量的四氫呋喃和水的混合溶液中歸一化紫外吸收光譜圖(10^-5mol·L^-1)如圖2所示。通過對化合物IND-TPA在水含量為70％的四氫呋喃和水的混合溶液中紫外吸收光譜的測定，發(fā)現(xiàn)隨水含量的增加，化合物IND-TPA的紫外吸收光譜發(fā)生明顯的紅移(見圖2)，這是具有扭曲的分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移性質(zhì)的化合物所具有的典型特征。在水含量為99％的混合溶液中，化合物IND-TPA的紫外吸收出現(xiàn)明顯的拖尾峰，這是由于形成了聚集體造成的。

實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在乙二醇和甘油中的熒光發(fā)射光譜圖如圖3所示；實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在99％水含量的四氫呋喃和水的混合溶液中的動態(tài)光散射粒徑分布圖如圖4所示。通過動態(tài)光散射實(shí)驗(yàn)證實(shí)了納米聚集體的生成，平均粒徑為119.6nm，分散系數(shù)為0.164。進(jìn)一步，通過對化合物IND-TPA在乙二醇(粘度系數(shù)η＝1.2mPa S)和甘油(粘度系數(shù)η＝945mPa S)中的熒光發(fā)射光譜的測定，隨溶劑粘度的增加，分子內(nèi)運(yùn)動受到限制，其熒光發(fā)射強(qiáng)度明顯增強(qiáng)(見圖3)，熒光壽命由1.09ns增加至1.57ns。

通過測量化合物IND-TPA在四氫呋喃和水的混合溶液(四氫呋喃:水＝100:0，30:70，1:99)中的量子產(chǎn)率和熒光壽命(結(jié)果見表1)，發(fā)現(xiàn)相對于在水含量為70％的混合溶液中，化合物IND-TPA在水含量為99％的混合溶液中的量子產(chǎn)率增加了20.4倍，熒光壽命增加了2.2倍，輻射速率增加了9.1倍，非輻射速率降低了2.5倍，清楚證實(shí)了其聚集誘導(dǎo)發(fā)光性質(zhì)。而且化合物IND-TPA在聚集態(tài)的斯托克位移為3580cm^–1，遠(yuǎn)大于傳統(tǒng)的熒光材料，非常有利于其在生物成像中的應(yīng)用。

表1化合物IND-TPA的光物理性質(zhì)

實(shí)施例3

實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：

化合物IND-TPA針對肺癌細(xì)胞HCC827和A549的細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5所示。該結(jié)果表明，化合物IND-TPA在不同濃度下(5,10,20,40,60,80,100μM)都幾乎沒有細(xì)胞毒性。

實(shí)施例4

實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在脂滴特異性熒光成像中的應(yīng)用：測試結(jié)果如圖6～9所示。圖6為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中，與脂滴染料BODIPY493/503Green的共染圖；其中，(A)細(xì)胞明場圖；(B)為IND-TPA在HCC827細(xì)胞中的脂滴染色圖；(C)為BODIPY493/503在HCC827細(xì)胞中的脂滴染色圖；(D)為(A)、(B)和(C)的疊加圖；(E)為IND-TPA和BODIPY493/503在HCC827細(xì)胞中共染的熒光信號變化趨勢圖；圖7為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在A549細(xì)胞中，與脂滴染料BODIPY493/503的共染圖；其中，(A)細(xì)胞明場圖；(B)為IND-TPA在A549細(xì)胞中的脂滴染色圖；(C)為BODIPY493/503在A549細(xì)胞中的脂滴染色圖；(D)為(A)、(B)和(C)的疊加圖；(E)為IND-TPA和BODIPY493/503在A549細(xì)胞中共染的熒光信號變化趨勢圖；圖8為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在(A)HCC827細(xì)胞和(B)A549細(xì)胞中，與脂滴染料BODIPY493/503的熒光信號變化相關(guān)性圖；圖9為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在HCC827和A549細(xì)胞中，與脂滴染料BODIPY493/503和細(xì)胞核染料Hoechst 33342的共染圖；其中，(A)為HCC827細(xì)胞的明場圖；(B)為IND-TPA在HCC827細(xì)胞中的脂滴染色圖；(C)為BODIPY493/503在HCC827細(xì)胞中的脂滴染色圖；(D)為Hoechst 33342在HCC827細(xì)胞中的細(xì)胞核染色圖；(E)為(A)、(B)、(C)和(D)的疊加圖；(F)為A549細(xì)胞的明場圖；(G)為IND-TPA在A549細(xì)胞中的脂滴染色圖；(H)為BODIPY493/503在A549細(xì)胞中的脂滴染色圖；(I)為Hoechst 33342在A549細(xì)胞中的細(xì)胞核染色圖；(J)為(F)、(G)、(H)和(I)的疊加圖。

化合物IND-TPA對肺癌細(xì)胞HCC827和A549的染色結(jié)果如圖6所示。為了證實(shí)化合物IND-TPA在細(xì)胞中所處的位置，進(jìn)行了與商品化的脂滴染料BODIPY493/503的共染實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，化合物IND-TPA可以與脂滴染料BODIPY493/503在HCC827和A549細(xì)胞中均有很好的共定位(重疊系數(shù)均高達(dá)0.96)，而且IND-TPA和BODIPY493/503的熒光信號的變化趨勢十分相符(圖6-圖7)，相關(guān)性很好(圖8)，表明化合物IND-TPA可以作為脂滴靶向的特異性熒光探針。進(jìn)一步通過與商品化的脂滴染料BODIPY493/503和細(xì)胞核染料Hoechst 33342的共染實(shí)驗(yàn)，證明IND-TPA特異性染色脂滴，不會染色細(xì)胞核(圖9)。

實(shí)施例5

實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA具有強(qiáng)的光穩(wěn)定性

圖10為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中熒光圖；其中(A)為化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中，7％的功率的541nm光照下的熒光強(qiáng)度變化圖；(B)為化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中，于光照下不同時間的細(xì)胞熒光成像圖(圖中灰白色原為紅色)。對于IND-TPA在熒光成像中的光穩(wěn)定性，從圖10中可知，通過染色HCC827細(xì)胞，在514nm(7％)的激光照射下，連續(xù)光照10分鐘以上，IND-TPA的熒光強(qiáng)度僅降低了不到20％，證實(shí)了其很好的光穩(wěn)定性(圖10)。

實(shí)施例6

實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在脂滴運(yùn)動變化監(jiān)測中的應(yīng)用：圖11為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中的運(yùn)動變化監(jiān)測圖，其中(A)為0min的脂滴染色圖；(B)為1min的脂滴染色圖；(C)為3min的脂滴染色圖；(D)為5min的脂滴染色圖；(E)為0和1min的脂滴染色疊加圖；(F)為1和3min的脂滴染色疊加圖；(G)為3和5min的脂滴染色疊加圖；(H)為HCC827細(xì)胞的明場圖；圖12為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA雙光子吸收截面值圖；圖13為實(shí)施例1制備的化合物IND-TPA在HCC827細(xì)胞中的雙光子激發(fā)熒光圖，激發(fā)波長為920nm。

具有高信噪比的化合物IND-TPA還可以用于觀察脂滴在細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)動，通過不同時間的細(xì)胞成像圖疊加，可以清楚顯示脂滴的位置的變化(圖11)。

通過在近紅外區(qū)檢測化合物IND-TPA的雙光子吸收截面值，發(fā)現(xiàn)其在920nm處，具有最大的雙光子吸收截面值為119GM(圖12)。

通過在雙光子顯微鏡對IND-TPA的染色效果進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)IND-TPA可以很好地用于脂滴的雙光子熒光成像，具有深層體內(nèi)成像的應(yīng)用潛力(圖13)。

上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。