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一種用于檢測轉(zhuǎn)基因調(diào)控元件的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒及其構(gòu)建方法與應(yīng)用與流程

文檔序號:12167883閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于檢測轉(zhuǎn)基因調(diào)控元件的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒,其核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。

2.如權(quán)利要求1所述用于檢測轉(zhuǎn)基因調(diào)控元件的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的構(gòu)建方法,其特征在于,具體步驟如下:

以重疊PCR技術(shù)將SEQ ID No.1所示的CaMV35S啟動(dòng)子基因、SEQ ID No.2所示的FMV35S啟動(dòng)子基因、SEQ ID No.3所示的Pat29基因、SEQ ID No.4所示的Ubiquitin基因、SEQ ID No.5所示的NOS啟動(dòng)子基因、SEQ ID No.6所示的T-35S終止子基因、SEQ ID No.7所示的NOS終止子基因和SEQ ID No.8所示的T-E9終止子基因片段依次連接獲得融合片段,再將融合片段克隆到載體pMD-19中,即獲得所述用于檢測轉(zhuǎn)基因調(diào)控元件的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒。

3.如權(quán)利要求1所述用于檢測轉(zhuǎn)基因調(diào)控元件的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒在檢測轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品調(diào)控元件中的應(yīng)用。

4.一種包含如權(quán)利要求1所述用于檢測轉(zhuǎn)基因調(diào)控元件的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的試劑盒。

5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括如下引物:

CaMV35S啟動(dòng)子的特異性引物P-35S-F和P-35S-R,他們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示;

或者,F(xiàn)MV35S啟動(dòng)子的特異性引物FMV35S-F和FMV35S-R,他們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示;

或者,PTA29啟動(dòng)子的特異性引物PTA29-F和PTA29-R,他們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15所示;

或者,Ubiquitin啟動(dòng)子的特異性引物Ubiquitin-F和Ubiquitin-R,他們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17所示;

或者,NOS啟動(dòng)子的特異性引物PNOS-F和PNOS-R,他們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.18和SEQ ID NO.19所示;

或者,T35S終止子T-35S的特異性引物T35S-F和T35S-R,他們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.21所示;

或者,NOS終止子T-NOS的特異性引物T-NOS-F和T-NOS-R,他們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.22和SEQ ID NO.23所示;

或者,E9終止子T-E9的特異性引物T-E9-F和T-E9-R,他們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.24和SEQ ID NO.25所示。

6.如權(quán)利要求5或6所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒體積為25μL,其中包括:10×PCR緩沖液Mg2+2.5μL、200mmol的 dNTPs、含量均為0.5 mmol的特異性引物、1.25U的Taq DNA聚合酶以及濃度為25mg/L的所述用于檢測轉(zhuǎn)基因調(diào)控元件的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒1.5μL,去離子水補(bǔ)足至25μL。

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