本發(fā)明涉及一種坎格雷洛中間體的純化方法。
背景技術(shù)：
坎格雷洛(Cangrelor,II)是一種靜脈用小分子P2Y12抑制劑，可以快聚集，能夠降低血栓性心血管疾病風(fēng)險。在美國每年有大約50萬人接受PCI(經(jīng)皮冠狀動脈介入治療)，坎格雷洛可通過防止血小板聚集來降低與介入治療相關(guān)的嚴(yán)重凝血并發(fā)癥，包括心臟病發(fā)作和支架內(nèi)血栓形成。FDA藥物評估和研究中心心血管與腎病藥物部認(rèn)為，對于接受PCI的患者，凝血可引發(fā)嚴(yán)重問題，坎格雷洛的獲批可為這些患者提供另一種治療選擇。歐洲人用藥品委員會(CHMP)建議批準(zhǔn)坎格雷洛用于接受PCI的成人患者。美國FDA于2015年6月22日宣布，批準(zhǔn)坎格雷洛(一種預(yù)防冠狀動脈血栓形成的靜脈用抗血小板藥物)用于接受PCI的成年患者?？哺窭茁褰Y(jié)構(gòu)如式II所示：
坎格雷洛中間體I是坎格雷洛II的關(guān)鍵中間體，核苷酸衍生物一般都是以成鹽的形式存在，極性非常大，現(xiàn)有技術(shù)條件下的純化方法都是以離子交換樹脂進行分離提純。文獻(J.Med.Chem.1999,42,213-220)報道，單磷酸核苷衍生物坎格雷洛中間體I反應(yīng)結(jié)束后，用碳酸氫鈉處理后，用乙醚將雜質(zhì)萃取除去，采用Dowex 50Wx8(H型)，用去離子水洗脫到pH＝6，然后產(chǎn)品用2M的氨水洗脫，最后含有產(chǎn)品的水相冷凍干燥得到產(chǎn)品。這種處理方法的缺陷是采用昂貴的陽離子交換樹脂Dowex 50Wx8(無國產(chǎn))或昂貴的反向硅膠，成本高，且操作繁瑣，時間成本也較高，并且需要用到冷凍干燥，對設(shè)備要求較高、產(chǎn)能低、不適宜放大生產(chǎn)。因此，需要尋找一種坎格雷洛中間體有效的純化方法，縮短反應(yīng)時間、降低雜質(zhì)含量、提高收率、并避免使用柱層析和昂貴的填料。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中坎格雷洛中間體I的純化方法操作繁瑣、使用昂貴的離子交換樹脂提純、需要用到冷凍干燥，對設(shè)備要求較高、產(chǎn)能低、不適宜放大生產(chǎn)等缺陷而提供了一種坎格雷洛中間體的純化方法。本發(fā)明的純化方法避免使用昂貴的離子交換樹脂、避免使用操作繁瑣及純化時間長的陽離子交換樹脂和反向硅膠分離方法、操作簡單、時間短、收率高、制得的產(chǎn)品純度高(HPLC純度大于99.0％)、生產(chǎn)成本低、適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明提供了一種坎格雷洛中間體I的純化方法，其包括以下步驟：
步驟1：將坎格雷洛中間體I粗品與有機溶劑形成的混合物與堿式鹽或氨水進行反應(yīng)后，萃取，得到水相；
步驟2：將步驟1得到的水相除去水，后加入醇類溶劑，過濾或離心得濾餅；
步驟3：水中，將步驟2得到的濾餅調(diào)節(jié)pH至2-3，過濾或離心，得到濾餅；
步驟4：醇類溶劑中，將步驟3得到的濾餅調(diào)節(jié)pH至7-8，過濾得到坎格雷洛中間體I即可；
步驟1中，所述的坎格雷洛中間體I粗品的純度一般75.0％～99.0％(包括75.0％，但是不包括99.0％)。
步驟1中，所述的有機溶劑優(yōu)選酯類溶劑和/或醚類溶劑；所述的酯類溶劑優(yōu)選磷酸三乙酯；所述的醚類溶劑優(yōu)選乙醚和/或甲基叔丁基醚。
步驟1中，所述的堿式鹽是指本領(lǐng)域中常規(guī)的電離時生成的陰離子除酸根離子外還有氫氧根離子，陽離子為金屬離子或NH4+的鹽；本發(fā)明中特別有選碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和碳酸氫銨中的一種或多種，進一步優(yōu)選碳酸氫鈉。所述的堿式鹽優(yōu)選以其水溶液的形式使用，所述的堿式鹽水溶液的質(zhì)量濃度優(yōu)選1％～50％，進一步優(yōu)選2％～10％，例如4.3％或4.4％；所述的質(zhì)量濃度是指堿式鹽的質(zhì)量占堿式鹽水溶液總質(zhì)量的百分比。
步驟1中，所述的堿式鹽或氨水與所述的坎格雷洛中間體I粗品的摩爾比值優(yōu)選1～50，進一步優(yōu)選10～20，例如14.7或15.3。
步驟1中，所述的萃取的次數(shù)優(yōu)選1次～3次。
步驟1中，所述的萃取采用的溶劑優(yōu)選醚類溶劑；所述的醚類溶劑優(yōu)選乙醚和/或甲基叔丁基醚。
步驟2中，所述的水相除去水優(yōu)選采用減壓濃縮的方式。
步驟2中，所述的水相除去水的程度優(yōu)選濃縮至40℃，-0.08MPa～-0.1MPa，減壓無餾分蒸出。
步驟2中，所述的醇類溶劑優(yōu)選乙醇、甲醇和異丙醇中的一種或多種；進一步優(yōu)選乙醇。
步驟2中，所述的醇類溶劑與所述的坎格雷洛中間體I粗品的質(zhì)量比值優(yōu)選1～50，進一步優(yōu)選10～20，例如13.5或14.1。
步驟2中得到濾餅后，優(yōu)選洗滌濾餅。所述的洗滌采用的溶劑優(yōu)選醇類溶劑；所述的洗滌的次數(shù)優(yōu)選1次～3次。所述的醇類溶劑優(yōu)選乙醇、甲醇和異丙醇中的一種或多種；進一步優(yōu)選乙醇。
步驟3中，所述的調(diào)節(jié)pH優(yōu)選采用無機酸或有機酸。所述的無機酸優(yōu)選鹽酸，所述的鹽酸可以為常規(guī)市售鹽酸試劑，所述的鹽酸的摩爾濃度優(yōu)選1N～3N，例如1N(即1mol/L)，所述的摩爾濃度是指氯化氫的摩爾數(shù)與鹽酸體積的比值。所述的有機酸優(yōu)選乙酸。
步驟3中得到濾餅后，優(yōu)選洗滌濾餅。所述的洗滌優(yōu)選采用去離子水；所述的洗滌的次數(shù)優(yōu)選1次～3次。
步驟4中，所述的醇類溶劑優(yōu)選乙醇、甲醇和異丙醇中的一種或多種；進一步優(yōu)選乙醇。
步驟4中，所述的調(diào)節(jié)pH可以采用本領(lǐng)域中常規(guī)的堿或堿式鹽，所述的堿優(yōu)選無機堿；所述的無機堿優(yōu)選氨水。所述的氨水可以為常規(guī)市售氨水試劑；所述的氨水的質(zhì)量濃度優(yōu)選10％～25％，例如25％，所述的質(zhì)量濃度是指氨氣的質(zhì)量占氨水總質(zhì)量的百分比。
步驟4中，得到坎格雷洛中間體I后，優(yōu)選洗滌濾餅，后干燥。所述的洗滌優(yōu)選采用去離子水。所述的洗滌的次數(shù)優(yōu)選1次～3次。所述的干燥可以為本領(lǐng)域中該類操作的常規(guī)方法，優(yōu)選真空干燥，所述的真空干燥的溫度優(yōu)選10℃～40℃，例如20℃～25℃。所述的真空干燥的壓強優(yōu)選-0.08MPa～-0.1MPa。所述的真空干燥的時間優(yōu)選10小時～20小時，例如16小時。
步驟4中，制得的坎格雷洛中間體I的純度大于等于99.0％。
所述的坎格雷洛中間體I的純化方法中，所述的坎格雷洛中間體I粗品可以采用以下步驟制得：三氯氧磷和堿存在的條件下，將坎格雷洛中間體III與磷酸三乙酯進行縮合反應(yīng)，得到所述的坎格雷洛中間體I粗品即可；
所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法可以為本領(lǐng)域中該類縮合反應(yīng)的常規(guī)方法，本發(fā)明中特別優(yōu)選以下反應(yīng)條件：
在所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法中，所述的磷酸三乙酯與所述的坎格雷洛中間體III的摩爾比值優(yōu)選10～100，進一步優(yōu)選25～75，例如55或51.5。
在所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法中，所述的堿優(yōu)選有機堿；所述的有機堿優(yōu)選1,8雙二甲基氨基萘。
在所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法中，所述的堿與所述的坎格雷洛中間體III的摩爾比值優(yōu)選1.0～5.0，進一步優(yōu)選1.1～3.0，例如1.5。
在所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法中，所述的三氯氧磷與所述的坎格雷洛中間體III的摩爾比值優(yōu)選1.0～5.0，進一步優(yōu)選1.5～3.0，例如2.0。
在所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法中，所述的縮合反應(yīng)的溫度優(yōu)選-10℃～10℃，進一步優(yōu)選0℃～5℃，例如0℃。
在所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法中，所述的縮合反應(yīng)的進程可以采用本領(lǐng)域中常規(guī)檢測方法(例如TLC、HPLC或NMR)進行監(jiān)測，一般以坎格雷洛中間體III消失時為反應(yīng)終點，所述的縮合反應(yīng)的時間優(yōu)選1小時～10小時，進一步優(yōu)選2小時～9小時，例如6小時或8小時。
在所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法中，所述的磷酸三乙酯既做反應(yīng)試劑也做反應(yīng)溶劑。
所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法優(yōu)選采用以下反應(yīng)步驟：-10℃～10℃(優(yōu)選0℃～5℃，例如0℃)，向坎格雷洛中間體III、堿與磷酸三乙酯形成的混合物中加入三氯氧磷，進行縮合反應(yīng)，得到所述的坎格雷洛中間體I粗品即可。所述的加入的方式優(yōu)選滴加，滴加的速度優(yōu)選保持反應(yīng)液溫度不超過5℃。
制得所述的坎格雷洛中間體I粗品的反應(yīng)液后，可以不經(jīng)處理直接用于坎格雷洛中間體I的純化。
所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法可以在有機溶劑或無溶劑條件下進行。當(dāng)所述的坎格雷洛中間體I粗品的制備方法在有機溶劑中進行時，所述的有機溶劑優(yōu)選醇類溶劑，所述的醇類溶劑優(yōu)選乙醇和/或甲醇。
在不違背本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。
本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
本發(fā)明的積極進步效果在于：本發(fā)明的純化方法避免使用昂貴、操作繁瑣及純化時間長的陽離子交換樹脂和反向硅膠分離方法、操作簡單、反應(yīng)時間短、收率高、制得的產(chǎn)品純度高(HPLC純度大于99.0％)、生產(chǎn)成本低、適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施方式
下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。
實施例1：坎格雷洛中間體I粗品的制備方法
5g坎格雷洛中間體III和3.42g 1,8雙二甲基氨基萘溶于106g磷酸三乙酯中，冰浴冷卻至0℃，3.27g三氯氧磷滴加入反應(yīng)液中。在0℃下反應(yīng)6小時，TLC檢測坎格雷洛中間體III反應(yīng)完全。得到坎格雷洛中間體I粗品的磷酸三乙酯溶液(HPLC純度大約75％)。
實施例2坎格雷洛中間體I粗品的純化方法
將坎格雷洛中間體I粗品的磷酸三乙酯溶液(HPLC純度大約75％，可以為實施例1制得的)倒入含有13.6g碳酸氫鈉的冰水中300mL，并攪拌1小時。用乙醚(3×350mL)萃取水相并棄去有機相。水相在40℃下減壓(-0.08MPa～-0.1MPa)濃縮至無餾分蒸出。殘留物中加入100ml乙醇，并攪拌2小時。析出固體過濾，并用10ml乙醇洗滌。所得固體重新溶解于80ml去離子水中，用1N鹽酸調(diào)pH至2-3，攪拌1小時，過濾，所得固體用5ml去離子水洗滌。上述固體溶解于50ml乙醇中，加入5ml質(zhì)量濃度為25％氨水(所述的質(zhì)量濃度是指氨氣的質(zhì)量占氨水溶液總質(zhì)量的百分比)調(diào)節(jié)至pH7-8，攪拌2小時，過濾，所得固體-0.08MPa～-0.1MPa減壓，20℃～25℃干燥16小時，得到3.8g白色固體為坎格雷洛中間體I，收率64.9％。LC-MS：m/z＝550(M+H)+，HPLC純度99.20％。
實施例3：坎格雷洛中間體I粗品的制備方法
將15Kg坎格雷洛中間體III和10.3Kg 1,8雙二甲基氨基萘投入300Kg磷酸三乙酯中，冷凍鹽水冷卻至0～5℃，9.9Kg三氯氧磷滴加入反應(yīng)液中。在0～5℃下攪拌8小時，TLC檢測坎格雷洛中間體III反應(yīng)完全。得到坎格雷洛中間體I粗品的磷酸三乙酯溶液，HPLC純度約90％。
實施例4坎格雷洛中間體I粗品的純化方法
將坎格雷洛中間體I粗品的磷酸三乙酯溶液(可以為實施例3制得的)轉(zhuǎn)移至含有41Kg碳酸氫鈉的900Kg冰水中，并攪拌1.5小時。用甲基叔丁基醚(900Kg)萃取水相三次并棄去有機相。水相在40℃下減壓(-0.08MPa～-0.1MPa)濃縮至無餾分蒸出。殘留物中加入248Kg乙醇，并攪拌2小時。離心，并用25Kg乙醇洗滌。所得固體投入240Kg去離子水中，攪拌溶解，用1N鹽酸調(diào)pH至2-3，攪拌1小時，離心，并用15Kg去離子水洗滌。所得固體溶投入126Kg乙醇中，加入15Kg質(zhì)量濃度為25％的氨水(所述的質(zhì)量濃度是指氨氣的質(zhì)量占氨水溶液總質(zhì)量的百分比)調(diào)節(jié)至pH7-8，攪拌2小時，離心，并用15Kg去離子水洗滌。濕品40℃、-0.08MPa～-0.1MPa減壓，20℃～25℃干燥16小時得到11.6Kg白色固體為坎格雷洛中間體I，收率66.1％。LC-MS：m/z＝550(M+H)+。HPLC純度99.26％。