本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種NS5B聚合酶抑制劑，具體涉及一種化合物，及其制備方法及用途。

背景技術(shù)：

索非布韋(Sofosbuvir)是一種NS5B聚合酶抑制劑，由 Pharmasset 公司研制、后被吉利德(Gilead)于2011年收購，并由吉利德公司開發(fā)上市的一種用于治療丙肝的藥物。該藥2013年12月獲得美國FDA批準(zhǔn)，作為抗病毒治療方案的一部分，用于慢性丙型肝炎(HCV)的治療，其商品名為Sovaldi。索非布韋是首個(gè)獲批可用于丙型肝炎全口服治療方案的藥物，在用于特定基因型慢性丙型肝炎治療時(shí)，可消除對(duì)傳統(tǒng)注射藥物干擾素的需求。索非布韋的結(jié)構(gòu)如下：

。

雖索非布韋治療丙肝效果較好，但治療費(fèi)用極其昂貴，且其化合物專利在中國到期日遠(yuǎn)至2030年，中國丙肝患者無法早日接受相對(duì)便宜的仿制藥的治療，因此迫切需要研發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的治療丙肝的良藥，以使患者盡早接受價(jià)格相對(duì)合理的藥物治療。

WO2008121634還公開了以下一種索非布韋類似物：

但該化合物的活性仍不甚理想。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種NS5B聚合酶抑制劑。具體來說，本發(fā)明提供了一種索非布韋類似物，以使中國患者接受價(jià)格相對(duì)合理的擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的治療丙肝的藥物。

本發(fā)明所提供的索非布韋類似物，具有優(yōu)于索非布韋的治療丙肝的效果，且毒副作用與索非布韋類似，并無明顯的不良反應(yīng)。

本發(fā)明一方面提供了以下索非布韋類似物BG40202或其可藥用鹽：

BG40202。

本發(fā)明另一方面提供了該化合物的用途：在制備作為NS5B聚合酶抑制劑 的藥物中的用途；在制備用于丙型肝炎病毒相關(guān)的疾病和 / 或癥狀的藥物中的用途；在制備用于丙型肝炎病毒感染的藥物中的用途。

本發(fā)明第三方面提供了該化合物的制備方法：

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本發(fā)明第四方面提供了包括上述化合物或其可藥用鹽以及任選的藥學(xué)可接受的載體組成的組合物。

本發(fā)明第五方面提供了上述組合物的用途：在制備作為NS5B聚合酶抑制劑 的藥物中的用途；在制備用于丙型肝炎病毒相關(guān)的疾病和 / 或癥狀的藥物中的用途；在制備用于丙型肝炎病毒感染的藥物中的用途。

本發(fā)明技術(shù)人員意外的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物抗HCV（丙型肝炎病毒）的活性優(yōu)于索非布韋，更遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于其異構(gòu)體BG40203：

BG40203

本發(fā)明化合物BG40202磷酸酯的構(gòu)型為（S）構(gòu)型時(shí)，活性優(yōu)于（R）構(gòu)型的BG40203。

附圖說明

圖1：BG40202及陽性對(duì)照對(duì)HCV GT1b復(fù)制子細(xì)胞的毒性及對(duì)HCV復(fù)制子劑量依賴性抑制（Inhibition%）活性（viability%）擬合曲線。

圖2：BG40203及陽性對(duì)照對(duì)HCV GT1b復(fù)制子細(xì)胞的毒性及對(duì)HCV復(fù)制子劑量依賴性抑制（Inhibition%）活性（viability%）擬合曲線。

圖3：GS-7977及陽性對(duì)照對(duì)HCV GT1b復(fù)制子細(xì)胞的毒性及對(duì)HCV復(fù)制子劑量依賴性抑制（Inhibition%）活性（viability%）擬合曲線。

圖4：BG40202正離子質(zhì)譜 MS(ESI⁺,m/e)：578

圖5：BG40202負(fù)離子質(zhì)譜 MS(ESI^-,m/e)：576

圖6：BG40202氫譜圖1H-NMR。

具體實(shí)施例

實(shí)施例1 BG40202的合成

化合物2的合成

氮?dú)獗Ｗo(hù)下，500mL三口瓶中加入10g（52.8mmol，1.0eq）Boc-L-丙氨酸，再加入200mL二氯甲烷，室溫下攪拌至溶清。再降溫至-5℃，加入10.9g（52.8mmol，1.0eq）DCC，反應(yīng)液移至室溫，攪拌反應(yīng)2小時(shí)。再加入6.86g（63.4mmol，1.2eq）苯甲醇，室溫?cái)嚢?4小時(shí)。過濾，濾液依次用水、飽和NaHCO₃溶液、1M鹽酸溶液、飽和氯化鈉溶液洗滌。分層，所得有機(jī)相加入無水硫酸鈉干燥2小時(shí)。過濾，旋蒸濃縮，得25.0g淺色固體化合物2。

化合物3的合成

氮?dú)獗Ｗo(hù)下，500mL三口瓶中加入25g（31.5mmol，1.0eq）化合物2，再加入50 mL乙酸乙酯，攪拌得渾濁溶液。將該懸濁液降溫至0℃，加入100mL 乙酸乙酯/鹽酸（6N）溶液。滴加完畢，反應(yīng)液移至室溫，攪拌反應(yīng)30min。旋蒸至干，得油狀物。加入100 mL水，用1N HCl溶液調(diào)節(jié)pH=~2，乙酸乙酯萃取三次，棄去有機(jī)相。水相用1M氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH=~8，乙酸乙酯萃取三次，所得有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌一次，無水硫酸鈉干燥2小時(shí)。過濾，旋蒸濃縮，得15.2g油狀液體3。

化合物4的合成

氮?dú)獗Ｗo(hù)下，500mL三口瓶中加入15g（83.7mmol，1.0eq）化合物3，加入100mL二氯甲烷，室溫下攪拌溶清。再降溫至-80℃，滴加17.7g（83.7mmol，1.0eq）二氯磷酸苯酯，滴加過程中控制溫度不超-70℃。滴加完畢，再滴加17.0g（167mmol，2.0eq）三乙胺的二氯甲烷溶液（40mL）。反應(yīng)液移至室溫，攪拌反應(yīng)2小時(shí)。再降溫至0℃，滴加15.4g（83.7mmol，1.0eq）五氟苯酚的二氯甲烷溶液（40ml）。再滴加17.0g（167mmol，2.0eq）三乙胺的二氯甲烷溶液（40mL）?？刂品磻?yīng)溫度0℃，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。過濾，所得濾液旋干，得油狀物。柱層析純化（PE/EA=1:1），收集純品部分，旋干，得淺色固體。

向述固體中加入300mL乙酸乙酯，室溫下攪拌溶清，再加入900mL石油醚，有固體析出。過濾、干燥，得19.4g白色固體4。

BG40202的合成

氮?dú)獗Ｗo(hù)下，500mL三口瓶中加入6.1g（23.3mmol，1.0eq）2’-脫氧-2’-氟-2’-甲基-尿嘧啶，再加入75mL無水THF，室溫下攪拌至溶清。再降溫至-15℃，滴加70mL（70mmol，3.0eq）1M的t-BuMgCl/THF溶液，滴加完畢，反應(yīng)液升溫至室溫，攪拌反應(yīng)4小時(shí)。在12小時(shí)內(nèi)分6批加入18g（35mmol，1.5eq）化合物4，TLC監(jiān)控反應(yīng)至無化合物4剩余。反應(yīng)完畢，向反應(yīng)液中傾入飽和氯化銨溶液淬滅反應(yīng)。真空濃縮除去THF，所得液體用乙酸乙酯萃取三次，分層，有機(jī)相用飽和氯化鈉洗滌一次，無水硫酸鈉干燥2小時(shí)。過濾，旋蒸濃縮，得淺色固體，稱重15g。

向上述固體中加入150mL乙酸乙酯，升溫至回流，固體溶清。再加入150mL叔丁基甲基醚，降溫至室溫，攪拌析晶過夜。過濾并干燥，得13g目標(biāo)化合物白色固體。

MS(ESI⁺,m/e)：578

MS(ESI^-,m/e)：576

¹H NMR：7.60 (1H, s), 7.38-7.21 (9H, m), 6.20-6.10 (1H, m), 5.63 (1H, d), 5.15 (2H, d), 4.51 (1H, m), 4.97 (1H, m), 4.41-3.76 (3H, m), 1.40-1.20 (6H, m)

實(shí)施例2：

以下為本發(fā)明化合物與索非布韋對(duì)照的藥理試驗(yàn)：

其中，BG40202為本發(fā)明化合物；BG40203為BG40202的異構(gòu)體，如上定義；GS-7977為藥理研發(fā)公司提供的標(biāo)準(zhǔn)索非布韋原料藥，作為對(duì)照。

1. 研究目的

運(yùn)用丙型肝炎病毒（HCV） 基因型1b復(fù)制子細(xì)胞系統(tǒng)，對(duì)博瑞生物醫(yī)藥（蘇州）股份有限公司的2個(gè)化合物進(jìn)行抗HCV復(fù)制子活性檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)中采用GS-7977作為陽性對(duì)照。

2 實(shí)驗(yàn)材料

2.1 HCV 1b復(fù)制子細(xì)胞：即Huh7細(xì)胞系穩(wěn)定轉(zhuǎn)入HCV基因型1b復(fù)制子。

2.2 待測(cè)化合物：由博瑞生物醫(yī)藥技術(shù)（蘇州）有限公司提供，用 100% DMSO配制成20 mM母液暫存氮?dú)夤瘛?/p>

2.3 試劑：見表1.

表1. 試劑列表

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3. 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 化合物處理：根據(jù)表2化合物稀釋信息，對(duì)化合物DMSO母液進(jìn)行稀釋，三副孔，并加入96孔實(shí)驗(yàn)板中。細(xì)胞培養(yǎng)液中DMSO終濃度為0.5%。

表2. 化合物列表

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3.2 細(xì)胞處理：在上述96孔細(xì)胞板中種入HCV-1b復(fù)制子細(xì)胞（8,000 細(xì)胞/孔），隨后置于37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天。

3.3 細(xì)胞活性檢測(cè)：每孔加入細(xì)胞生長(zhǎng)熒光滴定檢測(cè)試劑，37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)細(xì)胞1小時(shí)后，用分光光度儀檢測(cè)系統(tǒng)Envision檢測(cè)Luminescence信號(hào)值，原始數(shù)據(jù)（RFU）用于化合物細(xì)胞毒性計(jì)算。

3.4 抗HCV復(fù)制子活性檢測(cè)：每孔加熒光素酶發(fā)光底物Bright-Glo，5分鐘內(nèi)用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)Envision檢測(cè)Luminescence信號(hào)值，原始數(shù)據(jù)（RLU）用于化合物抑制活性計(jì)算。

3.5 數(shù)據(jù)處理：使用如下公式將原始數(shù)據(jù)處理為細(xì)胞活力百分比：

使用如下公式將原始數(shù)據(jù)處理為抑制百分?jǐn)?shù)：

CPD：化合物孔的信號(hào)值

HPE (Hundred percent effect): 100% 有效作用對(duì)照孔信號(hào)值，孔中只有DMEM培養(yǎng)液

ZPE (Zero percent effect): 無效作用對(duì)照孔信號(hào)值，用0.5%DMSO代替化合物

將細(xì)胞活力百分?jǐn)?shù)、抑制百分?jǐn)?shù)分別導(dǎo)入GraphPad Prism軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理得出化合物對(duì)應(yīng)的曲線及其細(xì)胞毒性（CC₅₀）和對(duì)HCV復(fù)制子的抑制活性（EC₅₀）數(shù)值。

4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

表3. 化合物抗HCV GT1b復(fù)制子細(xì)胞的EC₅₀和CC₅₀值

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在測(cè)試濃度范圍內(nèi)，化合物BG40202、BG40203對(duì)HCV復(fù)制子顯示出不同程度的抑制活性，其EC₅₀值分別為0.035 μM、0.357 μM。且所有受試化合物在測(cè)定濃度范圍內(nèi)均沒有顯示出細(xì)胞毒性，CC₅₀值均大于最高檢測(cè)濃度。

附圖顯示受試化合物及陽性對(duì)照對(duì)HCV GT1b復(fù)制子細(xì)胞的毒性及對(duì)HCV復(fù)制子劑量依賴性抑制活性擬合曲線。

從結(jié)果可知，本發(fā)明BG40202的活性遠(yuǎn)大于其異構(gòu)體BG40203（EC₅₀ 0.035 vs 0.357），而且也優(yōu)于索非布韋（EC₅₀ 0.035 vs 0.097），且在測(cè)定濃度范圍內(nèi)均沒有顯示出細(xì)胞毒性，CC₅₀值均大于最高檢測(cè)濃度。