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一種破骨細胞培養(yǎng)試劑盒及其制備方法與流程

文檔序號:12411412閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種破骨細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,所述試劑盒中含有平衡鹽溶液、1,25(OH)2D3、α-MEM培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素、鏈霉素、胰蛋白酶、EDTA、Ficoll-Paque PREMRUM細胞分離液、鏈蛋白酶E和PBS沖洗液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的破骨細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,所述平衡鹽溶液為D-Hanks液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的破骨細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,所述試劑盒中還包括牙片、玻片;且所述平衡鹽溶液中含有青霉素和鏈霉素,青霉素和鏈霉素的濃度為100-1200微克/毫升。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的破骨細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,所述牙片和所述玻片的尺寸均為1-2cm2

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的破骨細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包括盒體以及用于固定裝有試劑的試劑瓶的支撐物,所述支撐物設置于所述盒體內(nèi)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的破骨細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還含有TRAP染色試劑。

7.一種權(quán)利要求1-6任一項所述的破骨細胞培養(yǎng)試劑盒的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

將各試劑或者載片分別封裝于單獨的封裝裝置內(nèi),再將封裝裝置設置于支撐物后裝于盒體中。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的的制備方法,其特征在于,所述方法還包括制備牙片和玻片步驟,具體包括:

將新鮮人牙縱切成110-120μm,用金剛砂石磨薄至12-15μm,超聲波清洗后浸泡于含青霉素1200-1400μg/ml、鏈霉素700-900μg/ml的D-Hanks液中,換液2-4次后置入含青霉素80-90μg/ml、鏈霉素70-80μg/ml的D-Hanks液置換2-4次,再置于α-MEM培養(yǎng)液中浸泡后,得到牙片;

將1-2cm2的玻片于酸中浸泡10-12小時后用自來水沖洗干凈,再用蒸餾水洗4-6遍,干熱消毒滅菌后得到玻片。

9.一種根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的破骨細胞培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)破骨細胞的方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)、取新生兔的四肢長骨后于平衡鹽溶液中去除軟組織和軟骨骺,得到骨干;

2)、將所述骨干置于α-MEM培養(yǎng)基,并在該培養(yǎng)基中加入胎牛血清、青霉素和鏈霉素,將所述骨干縱行剖開,輕刮骨的髓腔表面直至顏色變白,用吸管反復多次吹洗骨髓腔和骨干的內(nèi)表面,取出骨片,吸取懸液置離心管內(nèi),離心后取沉淀物并加入α-MEM培養(yǎng)液吹打均勻,接種并孵育,將得到的孵育液用D-Hanks液沖洗后,加入至Ficoll-Paque PREMRUM細胞分離液后于800-900轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心6-8分鐘,所得含有目的細胞的懸液層利用α-MEM培養(yǎng)重懸;

3)、將重懸后的細胞用鏈蛋白酶E處理后,利用胰蛋白酶和EDTA消化之后,使用D-Hanks液沖洗后,使用PBS沖洗液,再利用胰蛋白酶和EDTA進行消化處理,得到待誘導細胞;

4)、將所述待誘導細胞利用1,25(OH)2D3誘導,得到體外培養(yǎng)的破骨細胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的培養(yǎng)破骨細胞的方法,其特征在于,在步驟4)中,具體包括:

將步驟3)中所得的待誘導細胞收集于離心管內(nèi),在3-5℃,1200-1400r/min下離心8-9min,棄上清,加α-MEM培養(yǎng)基稀釋接種于細胞培養(yǎng)板中,并向細胞培養(yǎng)板內(nèi)加入1,25(OH)2D3,置35-38℃,3-6%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),隔天換液1次;

其中,細胞培養(yǎng)板內(nèi)分別置玻片和牙片。

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