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一種用于檢測羊奶粉中牛奶粉摻假比例的特征肽組合及方法與流程

文檔序號:12399332閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種用于檢測羊奶粉中牛奶粉摻假比例的特征肽組合,其特征在于,包括牛奶特征肽和羊奶特征肽,其中牛奶特征肽氨基酸序列為LSFNPTQLEEQCHI,羊奶特征肽氨基酸序列為LAFNPTQLEGQCHV。

2.一種用于檢測羊奶粉中牛奶粉摻假比例的內標特征肽組合,其特征在于,包括內標牛奶特征肽和內標羊奶特征肽,所述內標牛奶特征肽的氨基酸序列為LSFNPTQL*EEQCHI*,內標羊奶特征肽的氨基酸序列為LAFNPTQL*EGQCHV*,其中L*、I*和V*為碳氮全同位素標記的氨基酸殘基。

3.一種檢測羊奶粉中牛奶粉摻假比例的方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)向待檢測樣品中加入內標羊奶特征肽和內標牛奶特征肽;

(2)將添加內標特征肽的待檢測樣品經蛋白變性處理后,使用胰蛋白酶酶解;

(3)酶解產物用高效液相色譜-質譜聯(lián)用技術進行檢測;

(4)計算待檢測樣品中如權利要求1所述的羊奶特征肽和牛奶特征肽與對應的內標特征肽的峰面積比;

(5)將所述峰面積比代入標準曲線中,計算得到其中羊奶比例和牛奶比例,

所述內標羊奶特征肽和內標牛奶特征肽分別為權利要求1中所述羊奶特征肽和牛奶特征肽經同位素標記所得。

4.如權利要求3所述的方法,其特征在于,所述內標牛奶特征肽的氨基酸序列為LSFNPTQL*EEQCHI*,內標羊奶特征肽的氨基酸序列為LAFNPTQL*EGQCHV*,其中L*、I*和V*為碳氮全同位素標記的氨基酸殘基。

5.如權利要求3或4所述的方法,其特征在于,所述標準曲線由以下方法獲得:

將標準羊奶粉與標準牛奶粉按不同比例混合獲得一系列標準品,重復權利要求3的步驟(1)~(4),計算得到各個標準品中內標羊奶特征肽和牛奶特征肽與對應的內標特征肽的峰面積比,最后繪制得到標準曲線。

6.如權利要求3或4所述的方法,其特征在于,所述內標羊奶特征肽和內標牛奶特征肽的添加比例分別為8~12μmol/L。

7.如權利要求6所述的方法,其特征在于,所述內標羊奶特征肽和內標牛奶特征肽按質量比1∶1進行添加。

8.如權利要求3或4所述的方法,其特征在于,使用DTT進行蛋白變性。

9.如權利要求3或4所述的方法,其特征在于,高效液相色譜的條件為:

色譜柱:Acquity BEH 300 C18柱,1.7μm,2.1×100mm;柱溫:40℃;進樣體積:10μL;流動相A:0.1%甲酸/水;流動相B:0.1%甲酸/乙腈;流速:0.3mL/min。

10.如權利要求3或4所述的方法,其特征在于,質譜的條件為:

電噴霧離子源電離模式:ESI+,毛細管電壓:3.5kv,錐孔電壓:35kv,脫溶劑溫度:500℃,脫溶劑氣流量:900L/min,錐孔反吹氣流量:30L/hr,碰撞室壓力:3.0×10-3Mbar;低端分辨率1:2.5V,高端分辨率1:15.0V,離子能量1:0.5;低端分辨率2:2.8V,高端分辨率2:15.0V,離子能量2:1.0;離子源溫度:150℃,提取器電壓:3.0V,入口透鏡電壓:0.5V,出口電壓:0.5V,碰撞梯度:1.0。

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