本發(fā)明屬于植物活性物質(zhì)提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種雙水相法提取印楝素的方法。

背景技術(shù)：

印楝素是楝樹果實中的活性成分，對害蟲具有顯著的拒食作用和生長抑制作用，而對脊椎動物安全無害，是發(fā)展綠色農(nóng)藥的新型物質(zhì)。

近年來，國內(nèi)外各大專家和機構(gòu)都在不斷加大對印楝素提取技術(shù)的研究。傳統(tǒng)提取印楝素的方法主要為常規(guī)浸提法、超聲提取法、微波法、快速萃取法等。但是，常規(guī)浸提法耗時長、完成一次抽提需要將近6天的時間；超聲提取法和微波法的設(shè)備投入大，生產(chǎn)效率有限，而且超聲和微波分別對人體會造成不同的傷害，要添加相應(yīng)的輔助設(shè)備，則會加大生產(chǎn)成本；快速萃取法相比于超聲提取法和微波提取法的設(shè)備成本降低，但是提取率較低，僅能達到0.3％左右。

因此，尋求一種成本低、投資小、安全性好且提取率高的印楝素提取方法即成為亟待解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)所存在的不足，本發(fā)明提供了一種成本較低、提取率高、可有效避免印楝素長時間接觸光、熱、堿，且提取條件溫和、有助于保持印楝素活性的表面活性劑協(xié)同雙水相提取印楝素的方法。

本發(fā)明為了實現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案是該表面活性劑協(xié)同雙水相提取印楝素的方法由以下步驟組成：

(1)將印楝種籽自然風干，去皮，種仁榨油，去油后的餅渣粉碎，過40～60目篩，得到去油種仁粉，備用；

(2)配制質(zhì)量分數(shù)為1％～10％的表面活性劑水溶液，按料液比為1:5～25g/mL的比例加入去油種仁粉，在超聲功率密度為5～10W/cm²、超聲頻率為28～50kHz、超聲輻射方式為10s～15s/20s的超聲條件下超聲處理15～20min，超聲波發(fā)射單元分布在提取腔的側(cè)壁和底部；

(3)按照質(zhì)量分數(shù)為5％～15％的比例向步驟(2)的提取體系中加入無機鹽，攪拌溶解，形成雙水相體系，目標產(chǎn)物印楝素富集在上層表面活性劑相，小分子雜質(zhì)和糖類富集在下層水相，取出上相，純化，得到印楝素。

進一步，所述步驟(2)的表面活性劑是非離子型表面活性劑或離子型表面活性劑。

更進一步，所述非離子型表面活性劑是Triton X-100、吐溫-20、吐溫-80、聚氧乙烯脂肪酸酯、十二醇聚氧乙烯醚以及壬基酚聚氧乙烯醚中任意一種或多種組合。

更進一步，所述離子型表面活性劑是十二烷基苯基磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基二甲基芐基氯化銨以及辛基酚聚氧乙烯醚硫酸鹽中任意一種或多種的組合。

更進一步，所述無機鹽是磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、硝酸鈉以及磷酸二氫鉀中任意一種或任意組合。

進一步，所述步驟(3)的純化方法為：將上層表面活性劑相裝入截留分子量為600～1000Da的透析袋中，用去離子水透析，得到純化的印楝素。

進一步，步驟(2)所述超聲波發(fā)射單元對稱分布在提取腔的側(cè)壁，并且相對設(shè)置的兩個超聲波發(fā)射單元之間的距離是超聲波長的整數(shù)倍。

進一步，所述步驟(2)具體是：配制質(zhì)量分數(shù)為5％～8％的表面活性劑水溶液，按料液比為1:10～20g/mL的比例加入去油種仁粉，在超聲功率密度為5～10W/cm²、超聲頻率為28～50kHz、超聲輻射方式為10s～15s/20s的超聲條件下超聲處理15～20min，超聲波發(fā)射單元分布在提取腔的側(cè)壁和底部，在側(cè)壁上是對稱分布，且相對設(shè)置的兩個超聲波發(fā)射單元之間的距離是超聲波長的整數(shù)倍，形成諧振和駐波來促使表面活性劑水溶液在濁化狀態(tài)下充分溶解原料中的印楝素。

本發(fā)明的表面活性劑協(xié)同雙水相提取印楝素的方法，利用表面活性劑作為提取液，充分利用其既具有親油性又具有親水性的獨特理化性質(zhì)而作為良好的增溶劑，并且與無機鹽配合形成雙水相，在超聲波的協(xié)同作用下，有效破碎細胞組織，從而使印楝素充分溶解在溶劑中，大大提高印楝素的提取率，尤其是活性成分印楝素A的提取率，有效解決了傳統(tǒng)提取技術(shù)提取時間長、提取效率低的問題，此外本發(fā)明的操作方便、成本低、回收率高，沒有使用有機溶劑，避免了有機溶劑造成的環(huán)境問題、健康問題，具有良好的生態(tài)效益，還可以有效避免印楝素長時間接觸到光、熱、堿，提取條件溫和，有助于保持印楝素的活性，且能實現(xiàn)提取過程中一步除雜，簡化工藝，適于工業(yè)化推廣。

附圖說明

圖1為印楝素標品的色譜圖。

圖2為實施例1的提取物色譜圖。

具體實施方式

現(xiàn)結(jié)合實驗和實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行進一步說明，但是本發(fā)明不僅限于下述的實施情形。

本發(fā)明提取印楝素的方法是由以下步驟實現(xiàn)：

(1)印楝種籽自然風干，去皮，種仁榨油，去油后的餅渣粉碎，過40～60目篩，備用。

(2)配制質(zhì)量分數(shù)為1％～10％的表面活性劑水溶液，加入去油種仁粉，在超聲功率密度為2～10W/cm²、超聲頻率為25～60kHz、超聲輻射方式為10s～15s/20s的超聲條件下超聲處理15～20min，超聲波發(fā)射單元分布在提取腔的側(cè)壁和底部，在側(cè)壁上是對稱分布，且相對設(shè)置的兩個超聲波發(fā)射單元之間的距離是超聲波長的整數(shù)倍，形成諧振和駐波來促使表面活性劑水溶液在濁化狀態(tài)下充分溶解原料中的印楝素；

(3)按照一定的比例向步驟(2)的提取體系中加入無機鹽，攪拌溶解，形成雙水相體系，目標產(chǎn)物印楝素富集在上層表面活性劑相，小分子雜質(zhì)和糖類富集在下層水相，取出上相，所得提取液裝入截留600～1000Da的透析袋中，用去離子水進行透析，得到初步純化的印楝素。

具體的工藝條件及提取率對應(yīng)如下表1：

表1為本發(fā)明各實施例的工藝條件及提取率

上述各實施例中所用的表面活性劑是非離子型表面活性劑或者離子型表面活性劑均可，非離子型表面活性劑是Triton X-100、吐溫-20、吐溫-80、聚氧乙烯脂肪酸酯、十二醇聚氧乙烯醚以及壬基酚聚氧乙烯醚中任意一種或任意組合，均可。離子型表面活性劑可以是十二烷基苯基磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基二甲基芐基氯化銨以及辛基酚聚氧乙烯醚硫酸鹽中任意一種或任意組合，均可。

由此也可說明，本發(fā)明所涉及的非離子型表面活性劑的作用與離子型表面活性劑的作用相同，其效果相近，對于提取率的提高均可與無機鹽溶液形成雙水相，并且在超聲條件下產(chǎn)生協(xié)同效果，保證提取率在0.5％以上。

用高效液相色譜儀對上述各實施例所提取的產(chǎn)物進行鑒定，所得產(chǎn)物的色譜圖如圖2所示，將其與市售的印楝素A標品的色譜圖圖1進行比較，結(jié)果可以看出：印楝素A標品液相檢測峰的保留時間為13.937min；在相同液相條件下，所得產(chǎn)物在13.961min處有最大檢測峰，且峰形尖銳、無拖尾，說明產(chǎn)物中含有含量較高的印楝素A，即本發(fā)明可以有效提取、分離印楝素A。

為了驗證本發(fā)明的技術(shù)效果，申請人做了大量的實驗進行驗證，現(xiàn)以下述實驗為例進行說明。

對比例1

傳統(tǒng)超聲-有機溶劑提取法：乙醇做提取劑；料液比1:2；超聲功率密度為2.5W/cm²，超聲時間為50min，提取率為0.36％。

對比例2

傳統(tǒng)超聲-乙醇雙水相提取法：乙醇雙水相組成為75％乙醇中加入0.62g/mL的硫酸銨，料液比為1:10(g:mL)；功率密度為2.4w/cm²；超聲時間為60min，提取率為0.32％。

相比較而言，本發(fā)明的印楝素A提取率可達0.5％以上，而且本發(fā)明的成本低，副產(chǎn)物少。