1.一種利用多重PCR檢測(cè)多種胰腺癌腫瘤標(biāo)記物的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)設(shè)計(jì)引物和探針：根據(jù)檢測(cè)基因Claudin-4和P53，選擇18sRNA作為定量內(nèi)參，使用Beacon Designer 7軟件設(shè)計(jì)引物和探針序列；
P53 Forward primer：5’-CAAAAGTCTAGAGCCACC-3’；
P53 Reverse primer：5’-AATGTTTCCTGACTCAGAG-3’；
P53 probe：5’FAM-TCTGACTGCGGCTCCTCC-3’DABCYL；
Claudin-4 Forward primer：5’-GCCAGCAACTACGTGTAA-3’；
Claudin-4 Reverse primer：5’-CTCAGTCCAGGGAAGAAC-3’；
Claudin-4 probe：5’HEX-ACGGCTCCACTCTGTTCCTC-3’DABCYL；
18sRNA Forward primer：5’-GCAGCTAGGAATAATGGA-3’；
18sRNA Reverse primer：5’-GAATTTCACCTCTAGCGGCG-3’；
18sRNA probe：5’CY5-CCGAAAACCAACAAAATAGAACCGC-3’BHQ2；
(2)提取胰腺組織總RNA：采用液氮研磨的方式破碎胰腺組織，然后取1g研磨后的粉末，加入500μL裂解液，混勻，再加入裂解體系1/10倍體積的miRNA Homogenate Additive，冰上裂解10min，最后加入與裂解后溶液等體積的酚氯仿異戊醇(V:V:V＝25:24:1)抽提，接著于13500r/min離心5min，轉(zhuǎn)移上清至新管，再加入1/3上清液體積的無水乙醇沉淀兩次后過柱純化得總RNA；
(3)RNA濃度及純度鑒定：用酶標(biāo)儀測(cè)定RNA濃度，15％聚丙烯酰胺變性凝膠電泳鑒定RNA完整性；
(4)去除DNA以及合成cDNA：總RNA經(jīng)gDNA Eraser處理去除基因組DNA，采用Random primer和Oligo dT Primer混合的RT Primer作為反轉(zhuǎn)錄引物，加入1.5μg總RNA進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)程序依次為37℃，15min，85℃，5s；
(5)real-time PCR：根據(jù)步驟(1)中設(shè)計(jì)的引物和探針進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用多重PCR檢測(cè)多種胰腺癌腫瘤標(biāo)記物的方法，其特征在于，步驟(5)中熒光定量PCR檢測(cè)的反應(yīng)體系為20μL，包括P53上下游引物各0.4μL、P53 probe 0.3μL、Claudin-4上下游引物各0.4μL、Claudin-4probe 0.3μL、18sRNA上下游引物各0.3μL、18sRNA probe 0.2μL、DNA模板3μL，去離子水補(bǔ)至20μL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用多重PCR檢測(cè)多種胰腺癌腫瘤標(biāo)記物的方法，其特征在于，步驟(5)中熒光定量PCR檢測(cè)的擴(kuò)增程序?yàn)?5℃預(yù)變性3min，95℃變性5s，61℃退火30s，共40個(gè)循環(huán)。
4.利用多重PCR檢測(cè)多種胰腺癌腫瘤標(biāo)記物的2種引物，其特征在于，該2種引物序列分別為：
P53 Forward primer：5’-CAAAAGTCTAGAGCCACC-3’；
P53 Reverse primer：5’-AATGTTTCCTGACTCAGAG-3’；
Claudin-4Forwardprimer：5’-GCCAGCAACTACGTGTAA-3’；
Claudin-4 Reverse primer：5’-CTCAGTCCAGGGAAGAAC-3’。
5.利用多重PCR檢測(cè)多種胰腺癌腫瘤標(biāo)記物的2種探針，其特征在于，該2種探針序列分別為：
P53 probe：5’FAM–TCTGACTGCGGCTCCTCC-3’DABCYL；
Claudin-4 probe：5’HEX-ACGGCTCCACTCTGTTCCTC-3’DABCYL。