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新型慢病毒包裝方法與流程

文檔序號(hào):12108662閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種新型慢病毒包裝方法,其特征在于,由下述步驟組成:

(1)10cm的組織培養(yǎng)板上,12ml培養(yǎng)基,接種2×106個(gè)293T細(xì)胞,37度,5%二氧化碳條件下培養(yǎng),準(zhǔn)備用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞;

(2)轉(zhuǎn)染的混合物培養(yǎng)12-15小時(shí);

(3)在聚丙烯離心管中,加入以下質(zhì)粒,然后混勻,

10ug小片段RNA質(zhì)粒,

40ug包裝質(zhì)粒,

20ug包膜蛋白質(zhì)粒,

用100mM氯化鈉補(bǔ)足體積100μL;

(4)用氯化鈉混合好Biomiga Genetran Ⅲ轉(zhuǎn)染試劑,配置Biomiga Genetran Ⅲ和氯化鈉的混合液;

(5)加80μL的Biomiga Genetran Ⅲ和氯化鈉混合物到轉(zhuǎn)染離心管中,總體積180μL,輕輕旋轉(zhuǎn)離心管;

(6)室溫放置20-30分鐘;

(7)從培養(yǎng)板中吸走培養(yǎng)基,然后加8ml的新鮮培養(yǎng)基,半個(gè)小時(shí)內(nèi)加50μL仲丁巴比安,混勻;

(8)37度,5%二氧化碳培養(yǎng)48-60小時(shí);

(9)72小時(shí)后,收集病毒,3000轉(zhuǎn),4度離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到15ml的離心管中。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型慢病毒包裝方法,其特征在于:所述每個(gè)轉(zhuǎn)染離心管反應(yīng)需要6μL的Biomiga Genetran Ⅲ和74μL的氯化鈉。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的新型慢病毒包裝方法,其特征在于:所述Biomiga Genetran Ⅲ和氯化鈉的混合方法為,在一個(gè)聚丙烯管中,先加氯化鈉,直接吸氯化鈉,被稀釋之前的Biomiga Genetran Ⅲ不能接觸到管壁,然后輕輕旋轉(zhuǎn)移動(dòng)離心管,室溫放5分鐘。

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