本發(fā)明涉及一種微生物快速檢測(cè)培養(yǎng)基及檢測(cè)皿。
背景技術(shù)：
微生物普遍存在于自然界，與人們的生產(chǎn)、生活息息相關(guān)。食物污染微生物會(huì)造成食物的腐敗變質(zhì)，造成生產(chǎn)企業(yè)帶來(lái)極大的損失，給消費(fèi)者也帶來(lái)健康的威脅，因此，食品必須經(jīng)過(guò)一系列的微生物檢測(cè)，保證人們的飲食安全。傳統(tǒng)的微生物檢測(cè)方法一般為平皿檢測(cè)法等等，平皿中加入的是瓊脂培養(yǎng)基，這種方法操作復(fù)雜繁瑣且容易污染，市場(chǎng)上的即用型一次性平皿使用起來(lái)簡(jiǎn)單方便，但是瓊脂培養(yǎng)基中的水分容易散失，散失的水分凝結(jié)后積聚在培養(yǎng)皿壁，容易造成菌落污染，平皿法無(wú)法滿足日益增長(zhǎng)的檢測(cè)需求。
沙門氏菌是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患致病性微生物，屬腸桿菌科，能夠引起很多動(dòng)物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲感染致病。同時(shí)，沙門氏菌也是一種重要的食源性病原微生物，在細(xì)菌性引起的食物中毒中，是最為常見的一種，可導(dǎo)致人類惡心、腹痛、腹瀉等癥狀，致死率較高，因此，在對(duì)食品原料、食品加工過(guò)程、食品成品及加工環(huán)境監(jiān)控時(shí)，沙門氏菌是各類食品均要求控制的一種致病微生物。
CN101186891A公開了一種沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法，其檢測(cè)試劑盒由加入了0.1～0.5g細(xì)菌特異性酶的混合顯色底物M－galactoside的顯色培養(yǎng)基與增菌液A緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基、B四硫磺酸鈉煌綠增菌液組成。
CN102433373A公開了一種沙門氏菌特征顯色液體培養(yǎng)基，其主要成分是：胰蛋白胨、酵母粉、氯化鈉、氯化鋰、去氧膽酸鈉、磷酸氫二鉀、組合抑制劑、組合促進(jìn)劑、特征性酶解底物、助溶劑。
現(xiàn)有的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基存在一定的不足，如使用時(shí)需要現(xiàn)用現(xiàn)配，耗時(shí)費(fèi)力，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度，難以滿足快速、準(zhǔn)確、可靠的要求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種沙門氏菌快速檢測(cè)培養(yǎng)基及檢測(cè)皿。
本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：
一種沙門氏菌快速檢測(cè)培養(yǎng)基，每1000mL培養(yǎng)基中添加有吸水凝膠4～40g、胰蛋白胨5-50g、牛肉浸粉2-20g、酵母浸粉2-20g、氯化鈉3-10g、膽鹽1-10g、5-溴-6-氯-3-吲哚-辛酯0.1-1.0g、5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷0.01-1.0g、IPTG 0.001-0.1g、新生霉素0.02-0.2g和穩(wěn)定劑1～15g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有吸水凝膠4～40g、胰蛋白胨10-30g、牛肉浸粉5-10g、酵母浸粉5-10g、氯化鈉5-8g、膽鹽1-5g、5-溴-6-氯-3-吲哚-辛酯0.1-0.5g、5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷0.1-0.5g、IPTG 0.005-0.05g、新生霉素0.02-0.1g和穩(wěn)定劑3～8g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有吸水凝膠4～40g、胰蛋白胨15-20g、牛肉浸粉5-8g、酵母浸粉5g、氯化鈉5g、膽鹽2-3g、5-溴-6-氯-3-吲哚-辛酯0.2-0.3g、5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷0.1-0.2g、IPTG 0.01g、新生霉素0.05-0.08g和穩(wěn)定劑7.3～7.8g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，吸水凝膠由聚丙烯酸鈉、丙烯酸樹脂、聚乙烯醇、瓜爾膠、瓊脂、高嶺土組成，每1000mL培養(yǎng)基中添加有聚丙烯酸鈉2-16g、丙烯酸樹脂2-16g、聚乙烯醇2-10g、瓜爾膠2-16g、瓊脂1-5g、高嶺土0.5-5g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有聚丙烯酸鈉5-10g、丙烯酸樹脂5-10g、聚乙烯醇2-5g、瓜爾膠2-8g、瓊脂1-3g、高嶺土0.5-2g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有聚丙烯酸鈉6-8g、丙烯酸樹脂6-8g、聚乙烯醇3-3.5g、瓜爾膠4-5g、瓊脂1-1.2g、高嶺土0.8-1g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，穩(wěn)定劑由硼砂、抗壞血酸和吐溫組成，每1000mL培養(yǎng)基中添加有硼砂0-3g、抗壞血酸0-5g、吐溫1-10g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有硼砂0-1g、抗壞血酸1-3g、吐溫2-5g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有硼砂0.3g、抗壞血酸2-2.5g、吐溫5g。
一種沙門氏菌快速檢測(cè)皿，由下到上依次為底板、培養(yǎng)基層和上蓋膜，培養(yǎng)基的組成如上述的培養(yǎng)基，吸附在濾紙上。
本發(fā)明的有益效果是：
本發(fā)明的沙門氏菌快速檢測(cè)培養(yǎng)基，可以迅速吸收樣品液，然后在2min內(nèi)吸脹成果凍樣培養(yǎng)基凝膠。對(duì)含酒精的樣品稀釋液也具有很好地吸收作用，使樣品稀釋液更為均勻地分布在培養(yǎng)基表面，減少了因操作不當(dāng)產(chǎn)生的漏液，大大簡(jiǎn)化了操作過(guò)程。培養(yǎng)基吸收樣品稀釋液后形成一個(gè)固體凝膠，特異性顯色底物反應(yīng)產(chǎn)生的有色不溶物更好的留存在微生物周圍，不會(huì)發(fā)生擴(kuò)散和拖尾，更易于結(jié)果的觀察，其中陽(yáng)性的沙門氏菌菌落顯紫紅色，其他未被抑制的大腸菌群顯藍(lán)綠色點(diǎn)。
本發(fā)明的沙門氏菌快速檢測(cè)皿，相當(dāng)于一個(gè)簡(jiǎn)易的即用型顯色平板，但特點(diǎn)是培養(yǎng)皿里的培養(yǎng)基凝膠被干燥成一層膜，這樣更有利于保存和運(yùn)輸。使用時(shí)，撕開上蓋膜，將1mL樣品液加入凹槽內(nèi)，然后迅速將樣品液浸濕吸水凝膠層，然后在2min內(nèi)吸脹成果凍樣培養(yǎng)基凝膠。對(duì)含酒精的樣品稀釋液也具有很好地吸收作用，使樣品稀釋液更為均勻地分布在培養(yǎng)基表面，減少了因操作不當(dāng)產(chǎn)生的漏液，大大簡(jiǎn)化了使用時(shí)的操作。培養(yǎng)基吸收樣品稀釋液后形成一個(gè)固體凝膠，特異性顯色底物反應(yīng)產(chǎn)生的有色不溶物更好的留存在微生物周圍，不會(huì)發(fā)生擴(kuò)散和拖尾，更易于結(jié)果的觀察，其中陽(yáng)性的沙門氏菌菌落顯色紫紅色，其他未被抑制的大腸菌群顯色藍(lán)綠色點(diǎn)。
本發(fā)明的沙門氏菌快速檢測(cè)皿，使用方便，有利于微生物生長(zhǎng)，有助于更快更準(zhǔn)確地得到檢測(cè)結(jié)果。
附圖說(shuō)明
圖1是本發(fā)明沙門氏菌快速檢測(cè)皿的檢測(cè)結(jié)果示意圖。
具體實(shí)施方式
一種沙門氏菌快速檢測(cè)培養(yǎng)基，每1000mL培養(yǎng)基中添加有吸水凝膠4～40g、胰蛋白胨5-50g、牛肉浸粉2-20g、酵母浸粉2-20g、氯化鈉3-10g、膽鹽1-10g、5-溴-6-氯-3-吲哚-辛酯0.1-1.0g、5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷0.01-1.0g、IPTG 0.001-0.1g、新生霉素0.02-0.2g和穩(wěn)定劑1～15g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有吸水凝膠4～40g、胰蛋白胨10-30g、牛肉浸粉5-10g、酵母浸粉5-10g、氯化鈉5-8g、膽鹽1-5g、5-溴-6-氯-3-吲哚-辛酯0.1-0.5g、5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷0.1-0.5g、IPTG 0.005-0.05g、新生霉素0.02-0.1g和穩(wěn)定劑3～8g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有吸水凝膠4～40g、胰蛋白胨15-20g、牛肉浸粉5-8g、酵母浸粉5g、氯化鈉5g、膽鹽2-3g、5-溴-6-氯-3-吲哚-辛酯0.2-0.3g、5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷0.1-0.2g、IPTG 0.01g、新生霉素0.05-0.08g和穩(wěn)定劑7.3～7.8g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，吸水凝膠由聚丙烯酸鈉、丙烯酸樹脂、聚乙烯醇、瓜爾膠、瓊脂、高嶺土組成，每1000mL培養(yǎng)基中添加有聚丙烯酸鈉2-16g、丙烯酸樹脂2-16g、聚乙烯醇2-10g、瓜爾膠2-16g、瓊脂1-5g、高嶺土0.5-5g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有聚丙烯酸鈉5-10g、丙烯酸樹脂5-10g、聚乙烯醇2-5g、瓜爾膠2-8g、瓊脂1-3g、高嶺土0.5-2g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有聚丙烯酸鈉6-8g、丙烯酸樹脂6-8g、聚乙烯醇3-3.5g、瓜爾膠4-5g、瓊脂1-1.2g、高嶺土0.8-1g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，穩(wěn)定劑由硼砂、抗壞血酸和吐溫組成，每1000mL培養(yǎng)基中添加有硼砂0-3g、抗壞血酸0-5g、吐溫1-10g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有硼砂0-1g、抗壞血酸1-3g、吐溫2-5g。
作為上述快速檢測(cè)培養(yǎng)基的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000mL培養(yǎng)基中添加有硼砂0.3g、抗壞血酸2-2.5g、吐溫5g。
一種沙門氏菌快速檢測(cè)皿，由下到上依次為底板、培養(yǎng)基層和上蓋膜，培養(yǎng)基的組成如上述的培養(yǎng)基，吸附在濾紙上。
更進(jìn)一步的檢測(cè)皿是一種干燥的即用型顯色培養(yǎng)基，可分為三層，從上到下依次是：上蓋膜層，培養(yǎng)基凝膠層，中間有圓形凹槽的PET模具層。
特別的，上蓋膜層是不透明的白色或者銀色PET膜，一面有不干膠，貼附在PET模具層上，可以反復(fù)撕開不影響其黏性；吸水凝膠層是一層淡黃色或者棕色透明膜，緊緊附著在PET模具的中間圓形凹槽內(nèi)，三層形成一個(gè)密閉的微生物培養(yǎng)環(huán)境，基本不會(huì)出現(xiàn)漏液現(xiàn)象。
當(dāng)加入樣品液后，迅速吸附水分，溶脹，形成果凍樣凝膠，倒置放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，沙門氏菌可附著在上面生長(zhǎng)，與凝膠中特異性酶底物反應(yīng)，形成有顏色的不溶物被識(shí)別，進(jìn)而被確認(rèn)沙門氏菌陽(yáng)性。
下面結(jié)合實(shí)施例及實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。
培養(yǎng)基的制備方法為：
吸水凝膠板的制作：按照配方稱量培養(yǎng)基成分，然后溶解到水中制成培養(yǎng)基液，再加入穩(wěn)定劑，最后再加入吸水凝膠成分，快速攪拌均勻，進(jìn)行高溫滅菌后，冷卻后加入新生霉素，攪拌均勻后，定量分裝于不同的底板凹槽內(nèi)，抽濕干燥，貼上上蓋膜就成為一個(gè)干燥的沙門氏菌檢測(cè)皿了。
實(shí)施例1
實(shí)施例2
實(shí)施例3
實(shí)施例4
實(shí)施例5
使用時(shí)，將上蓋膜撕開，然后將1mL樣品液快速加入到干燥培養(yǎng)基凝膠上，然后迅速搖勻直至完全浸濕培養(yǎng)基凝膠層，蓋上上蓋膜。放置2min待樣品液完全被吸附后，透明干燥的培養(yǎng)基凝膠膜就吸脹成有一定厚度的固體培養(yǎng)基凝膠了，然后倒置放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15-24h。陽(yáng)性的沙門氏菌菌落顯色紫紅色，其他未被抑制的大腸菌群顯色藍(lán)綠色點(diǎn)(如圖1)。
不同培養(yǎng)基的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)：
特異性實(shí)驗(yàn)
將鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)CMCC50115、甲型副傷寒沙門氏菌(Salmonella paratyphiA)CMCC(B)50093、大腸桿菌(Escherichia coli)ATCC25922、肺炎克雷伯菌(Klebaiella pneumoniae)CMCC(B)46117、弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)ATCC43864、陰溝腸桿菌(E.cloacae)CMCC45301、糞鏈球菌(Streptococcifaecalis)CMCC32223、金黃色葡萄球菌(Staphylococci aureus)ATCC6538、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)CMCC(B)10104、痢疾志賀氏菌(Shigella Castellani)CMCC(B)51252和白色假絲酵母(Saccharomyces albicans)ATCC10231標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)活，用無(wú)菌生理鹽水制成102～103cfu/mL濃度的菌懸液，分別用沙門氏菌檢測(cè)皿、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基和NA平板檢測(cè)菌落濃度，37℃培養(yǎng)15-24h。
觀察結(jié)果如下表所示：
從表中可以看出，11個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株菌在顯色平板和檢測(cè)皿上檢測(cè)結(jié)果完全一致，特異性好。
自然樣品中沙門氏菌檢測(cè)的模擬實(shí)驗(yàn)
按照食品微生物檢測(cè)國(guó)標(biāo)方法，將食物樣品無(wú)菌操作稱取25g(mL)，加入到225mL無(wú)菌生理鹽水的樣品罐中，混勻做成樣品液。將鼠傷寒沙門氏菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和志賀氏菌的標(biāo)準(zhǔn)菌活化后，分別挑取單菌落充分混勻，做成適合濃度的混合菌懸液，然后人為混入到樣品液中，作為人工污染的陽(yáng)性樣品，放置4-5h后，對(duì)樣品液進(jìn)行檢測(cè)。然后觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如下：
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明的培養(yǎng)基具有很好的特異性，對(duì)自然樣品也具有很好的檢測(cè)效果。