沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基及其制備方法，該培養(yǎng)基的質(zhì)量組分包括：胰蛋白胨5-15份，酵母提取物2.5-7.5份，氯化鈉5-15份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二鈉1.5-3份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，蒸餾水1000份，pH值為7.2-7.5。將各組分加至蒸餾水中，攪拌溶解，高壓滅菌。沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌是我國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中需檢測的主要致病菌。使用本發(fā)明中的復(fù)合增菌培養(yǎng)基，能夠?qū)崿F(xiàn)上述三種菌的等速、快速增殖。增菌16小時，即可直接用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量檢測，實現(xiàn)上述三種病原菌的篩查。
【專利說明】沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基及 其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于致病菌的前增菌培養(yǎng)基，特別是涉及到一種同時對沙門氏菌、志賀氏 菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌的培養(yǎng)基及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)菌性微生物是我國食源性疾病發(fā)生的主要病因，嚴(yán)重危及人們的健康，造成重 大經(jīng)濟損失，成為目前較為突出的公共衛(wèi)生問題之一。沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球 菌是食源性疾病的主要致病菌，也是目前我國食品安全風(fēng)險監(jiān)測的重要指標(biāo)。中國食源性 疾病統(tǒng)計報告顯示，超過30%的相關(guān)案例都與這3種細(xì)菌有關(guān)，沙門氏菌更是高居首位。食 品安全問題日益被人們所重視的今天，這3種致病菌同時檢測方法的建立迫在眉睫。
[0003] 目前國際上檢測食源性致病菌的方法主要是依賴于基因的檢測方法。PCR技術(shù)發(fā) 展迅速，熒光定量PCR已經(jīng)成熟，同時檢測多種細(xì)菌的多重?zé)晒舛縋CR得到廣泛應(yīng)用。環(huán) 介導(dǎo)等溫擴增（LAMP)是一種新型的核酸擴增方法，LAMP技術(shù)和PCR擴增技術(shù)相比，其多 個引物的設(shè)計能帶來更高的特異性，即使高背景的微生物材料仍可準(zhǔn)確檢測，且其反應(yīng)快， 實驗操作簡單，可實現(xiàn)現(xiàn)場高通量的快速檢測。然而食品基質(zhì)復(fù)雜，目標(biāo)菌體濃度低，達到 目前技術(shù)檢測的需求，實現(xiàn)較高的靈敏度仍需要一個前增菌步驟。當(dāng)前前增菌培養(yǎng)基有很 多種，但大多成分復(fù)雜，配制繁瑣，所以研制出一種成分簡單，配制方便的培養(yǎng)基成為當(dāng)前 必要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種可同時培養(yǎng)沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù) 合增菌的培養(yǎng)基，適用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量檢測，用于沙門氏菌、志 賀氏菌和金黃色葡萄球菌三種病原菌的篩查。
[0005] 本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)： 一種沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基，以質(zhì)量份數(shù)計，其配方組 成為：胰蛋白胨5-15份，酵母提取物2. 5-7. 5份，氯化鈉5-15份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二 鈉1. 5-3. 5份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，蒸饋水1000份。pH值為 7. 2-7. 5。
[0006] 本發(fā)明的優(yōu)選配方為，以質(zhì)量份數(shù)計：胰蛋白胨10份，酵母提取物5份，氯化鈉 10 份，葡萄糖2份，磷酸氫二鈉 2. 5份，甘露醇2份，丙酮酸鈉 2份，甘氨酸2份，蒸餾水1000 份。pH值為7. 4。
[0007] 本發(fā)明的又一個目的是提供了沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌培 養(yǎng)基的制備方法，它是有以下步驟制成： (1)按照比例將胰蛋白胨，酵母提取物，氯化鈉，葡萄糖，磷酸氫二鈉，甘露醇，丙酮酸 鈉，甘氨酸加至蒸餾水中，攪拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH進行酸度矯正pH值至7· 2-7. 5 ; (3) 121°C高壓滅菌 15-20min，4°C保存。
[0008] 本發(fā)明通過選擇合適的組分，進行合理混配，經(jīng)攪拌溶解、高壓滅菌等步驟而獲得 一種沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌的培養(yǎng)基。本發(fā)明培養(yǎng)基中胰蛋白胨， 酵母提取物，氯化鈉作為基礎(chǔ)組分，為細(xì)菌提供生長必需的碳源、氮源、無機鹽和生長因子。 磷酸氫二鈉是緩沖劑。葡萄糖、甘氨酸促進細(xì)菌生長。甘露醇促進金黃色葡萄球菌的生長。 丙酮酸鈉用于修復(fù)損傷的細(xì)菌。
[0009] 相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下優(yōu)點： 本發(fā)明的沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基成分簡單，配制方便， 各組分無需分步添加。
[0010] 本發(fā)明按照配方組分及制備方法制備的復(fù)合增菌培養(yǎng)基能夠使沙門氏菌、志賀氏 菌和金黃色葡萄球菌三種細(xì)菌在復(fù)合培養(yǎng)過程中實現(xiàn)等速、快速的增殖。
[0011] 本發(fā)明增菌16小時，即可滿足直接用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量 檢測的需求，用于沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌三種病原菌的篩查。

【具體實施方式】
[0012] 實施例1 稱取胰蛋白胨5g，酵母提取物7. 5g，氯化鈉 15g，葡萄糖3g，磷酸氫二鈉 1. 5g，甘露醇 3g，丙酮酸鈉 lg，甘氨酸lg，蒸饋水1000ml,攪拌溶解后，用10 mol/L的NaOH進行酸度矯 正pH值至7.2，121°C高壓滅菌15min，4°C保存。
[0013] 將菌體濃度均為1〇9 CFU/mL的沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌培養(yǎng)液分別 稀釋1〇7倍，然后分別取100 μ?，接入10 mL制備好的用于沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡 萄球菌復(fù)合增菌的培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基中各菌體濃度為1 CFU/mL，37°C培養(yǎng)16h，取增菌培 養(yǎng)后的增菌液100 ML,適當(dāng)稀釋后涂布到XLD瓊脂和Baird-parker平板，進行分離培養(yǎng)。 根據(jù)沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌在平板上的特征菌落進行計數(shù)。結(jié)果見表1. 表1復(fù)合增菌培養(yǎng)基增菌效果

【權(quán)利要求】
1. 用于沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌的培養(yǎng)基，其特征在于，以質(zhì)量 份數(shù)計，其配方組成為：胰蛋白胨5-15份，酵母提取物2. 5-7. 5份，氯化鈉5-15份，葡萄糖 1-3份，磷酸氫二鈉1. 5-3份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，蒸餾水1000 份；pH 值為 7. 2-7. 5。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述用于沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌的培養(yǎng) 基，其特征在于：以質(zhì)量份數(shù)計，其配方為胰蛋白胨10份，酵母提取物5份，氯化鈉10份，葡 萄糖2份，磷酸氫二鈉2. 5份，甘露醇2份，丙酮酸鈉2份，甘氨酸2份，蒸餾水1000份；pH 值為7.4。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1、2所述用于沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌復(fù)合增菌的培養(yǎng) 基的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 按照比例將胰蛋白胨，酵母提取物，氯化鈉，葡萄糖，磷酸氫二鈉，甘露醇，丙酮酸 鈉，甘氨酸加至蒸餾水中，攪拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH進行酸度矯正pH值至7. 2-7. 5 ; (3) 121°C高壓滅菌 15-20min，4°C保存。
【文檔編號】C12R1/01GK104195081SQ201410426477
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月27日
【發(fā)明者】張巖, 劉銘, 李云, 葛少林, 邢婉麗 申請人:博奧生物集團有限公司, 清華大學(xué), 廣東粵檢生物科技有限公司