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一種植物染色體的滴片制備方法與流程

文檔序號:12743913閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種植物染色體的滴片制備方法,其特征在于,先將植物器官置于一氧化二氮氣體中進(jìn)行預(yù)處理,隨后采用固定液對預(yù)處理后的植物器官進(jìn)行固定處理,再采用酶對植物器官的細(xì)胞壁進(jìn)行酶解,將酶解后的植物器官破碎并配制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液滴加到載玻片或蓋玻片上,制成植物染色體標(biāo)本。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述植物染色體的滴片制備方法,其特征在于,具體包括如下步驟:

1)將植物器官用水清洗后,置于壓力為0.5~1個大氣壓的一氧化二氮氣體中進(jìn)行預(yù)處理2~3 h;

2)將步驟1)預(yù)處理后的植物器官用固定液固定處理2~3h;

3)將步驟2)固定處理后的植物器官用水清洗后,置于復(fù)合酶液中在37~42℃下酶解2~3 h;其中,所述復(fù)合酶液為將質(zhì)量濃度為4~6 %的纖維素酶溶液和質(zhì)量濃度為4~6%的果膠酶溶液按照1:1的體積比混合制得;

4)使用乙醇對步驟3)酶解后的植物器官清洗至少2次;

5)對步驟4)清洗后的植物進(jìn)行至少2次離心清洗,每一次離心清洗步驟為向植物器官中加入乙醇并以5000~6000 r/min的離心速度離心1~5 min后棄去上清液;

6)向步驟5)離心清洗后的植物器官中加入醋酸溶液并進(jìn)行破碎處理,向破碎處理后的植物器官中補加醋酸溶液至植物器官與醋酸溶液的質(zhì)量體積比為1 g:50~100 mL,制得細(xì)胞懸液;

7)將步驟6)制得的細(xì)胞懸液滴加到載玻片或蓋玻片,制得所述植物染色體標(biāo)本。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述植物染色體的滴片制備方法,其特征在于,步驟2)中所述固定液為質(zhì)量濃度90%的醋酸水溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述植物染色體的滴片制備方法,其特征在于,步驟3)中所述纖維素酶溶液的溶劑為pH 4.6的檸檬酸鈉緩沖液,所述果膠酶溶液的溶劑為pH 4.6的檸檬酸鈉緩沖液。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述植物染色體的滴片制備方法,其特征在于,步驟7)中從載玻片或蓋玻片上方20~30cm高度處將所述細(xì)胞懸液滴加到載玻片或蓋玻片上。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述植物染色體的滴片制備方法,其特征在于,步驟4)和步驟5)中采用體積濃度為70%的乙醇水溶液對植物器官進(jìn)行清洗和離心清洗。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述植物染色體的滴片制備方法,其特征在于,所述植物器官為植物根尖。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述植物染色體的滴片制備方法,其特征在于,所述植物器官為玉米根尖。

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