本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型及其制備方法。

背景技術(shù)：

伊曲康唑是目前療效較好，副作用較小的一種三唑類廣譜抗真菌藥物，其體外抗菌譜較廣，注射劑可達(dá)到肺部感染部位，用于治療肺部曲霉菌感染。其英文名稱為Itraconazole，中文化學(xué)名：順-4-[4-[4-[4-[[-2-(2,4-二氯苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)-1,3-二氧戊環(huán)-4-基]甲氧基]苯基]哌嗪-1-基]苯基]-2-[(2’S)-1-甲基丙基]-1,2,4-三唑-3-酮。其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：

伊曲康唑有3個(gè)手性碳原子，共有8種光學(xué)異構(gòu)體，臨床使用的是其結(jié)構(gòu)中二氧戊烷環(huán)上4個(gè)順式異構(gòu)體的混合物，對應(yīng)為2S，4R，2’R-伊曲康唑(A)、2S,4R,2’S-伊曲康唑(C)、2R,4S,2’R-伊曲康唑(B)及2R,4S,2’S-伊曲康唑(D)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：

研究發(fā)現(xiàn)，伊曲康唑各異構(gòu)體的生物活性及毒副作用存在較大差異，如CN103263417A公開了伊曲康唑異構(gòu)體組合能夠提高對真菌和內(nèi)皮細(xì)胞的選擇性，同時(shí)也是具有治療真菌及血管新生相關(guān)疾病潛力的候選藥物，單一構(gòu)型的光學(xué)純伊曲康唑還能顯著降低肝細(xì)胞毒性，可避免伊曲康唑引起的副作用。

文獻(xiàn)ChemBiol,2007(2)：263-70報(bào)道了伊曲康唑具有潛在的抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增生作用，而其他抗真菌藥物如氟康唑、酮康唑等卻對血管內(nèi)皮細(xì)胞無影響；CN101711156 A公開了一種伊曲康唑單一手性純異構(gòu)體預(yù)防和治療血管新生相關(guān)疾病的方法，伊曲康唑異構(gòu)體可以抑制腫瘤新生血管，是抗腫瘤的候選化合物。

消旋的伊曲康唑在臨床上的嚴(yán)重不良反應(yīng)包括胃腸道不適，如厭食、惡心、腹痛和便秘，少見的副作用包括頭痛、可逆性氨基轉(zhuǎn)移酶升高、月經(jīng)紊亂、頭暈和過敏反應(yīng)(如瘙癢、紅斑、風(fēng)團(tuán)和血管性水腫)，尤其是肝毒性，一般一個(gè)療程為半個(gè)月，對肝臟的損傷非常明顯，嚴(yán)重者會發(fā)生肝功能衰竭導(dǎo)致死亡，在治療過程中通常不被作為一線用藥。文獻(xiàn)DRUG METABOLISM AND DISPOSITION.2006,34:583-590.報(bào)道了伊曲康唑四個(gè)順式異構(gòu)體的人體內(nèi)代謝研究結(jié)果表明，只有2R,4S,2’R和2R,4S,2’S能夠被CYP3A4代謝成羥基伊曲康唑、酮基伊曲康唑和N-脫烷基伊曲康唑，而2S,4R,2’R和2S,4R,2’S不能被代謝，因而具有更高的生物利用度，肝細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)測試也表明，伊曲康唑異構(gòu)體2S,4R,2’S和2R,4S,2’S具有更高的安全性。

專利CN201510350844.3公開了光學(xué)異構(gòu)體2S,4R,2’S-伊曲康唑晶型，因此，制備單一異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑的穩(wěn)定結(jié)晶，對于進(jìn)一步研究該化合物的物理化學(xué)性質(zhì)，研究其藥物組合及臨床應(yīng)用，具有十分重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種新的光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型，具有很好的穩(wěn)定性，具有較好的藥物活性。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種伊曲康唑晶型化合物，其特征在于：所述化合物為光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型化合物，其以2θ±0.2°衍射角表示的X-射線粉末衍射圖譜在2.21°、3.37°、4.97°、5.38°、6.74°、8.21°、9.75°、11.07°、12.84°、13.86°、14.28°、15.05°、15.75°、18.27°、20.86°、21.34°、24.72°、25.28°、25.85°、28.34°、28.72°、29.12°和30.55°處顯示有特征衍射峰。

作為優(yōu)選的，所述的伊曲康唑晶型化合物，其特征在于，使用Cu-Kα射線測量得到的X-射線粉末衍射譜圖如圖1所示。

本發(fā)明還公開了所述的伊曲康唑晶型化合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

a)將2R,4S,2’S-伊曲康唑溶解在40～60℃有機(jī)溶劑中，所述的有機(jī)溶劑為乙酸丙酯和石油醚的混合溶劑，石油醚和乙酸丙酯的體積比為1:4～6；

b)邊攪拌，邊降溫，降溫至10℃～15℃，析出晶體，繼續(xù)降溫至-5℃～0℃，保溫?cái)嚢桊B(yǎng)晶至析晶完全；

c)抽濾，收集晶體，少量乙醇洗滌，真空干燥，得到2R,4S,2’S-伊曲康唑結(jié)晶。

作為優(yōu)選的，步驟a)中，溶質(zhì)和溶劑的質(zhì)量體積比為1:10～1:20。

作為優(yōu)選的，步驟b)中，降溫幅度為每分鐘1℃～5℃，養(yǎng)晶溫度為-5℃～0℃，養(yǎng)晶時(shí)間為0.5～10h。

作為優(yōu)選的，步驟c)中，干燥溫度為40℃～60℃。

本發(fā)明還公開了上述光學(xué)異構(gòu)體2S,4R,2’S-伊曲康唑晶型在制備用于抗真菌感染和治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。

相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下的有益效果：

1、本發(fā)明所述的光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型晶體單一，純度更高，穩(wěn)定性更好，溶解度較高，具有很好的藥物活性和較高的生物利用率。

2、本發(fā)明的晶型穩(wěn)定性高，即使在較苛刻的儲存條件下，也能夠保持穩(wěn)定，在隨后的制劑制備和儲存中不會改變。

3、本發(fā)明的制備方法簡單，成本較低，容易實(shí)現(xiàn)規(guī)?；⒐I(yè)化生產(chǎn)。

4、本發(fā)明所述的光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型，以及含有該晶型的藥物組合物，不僅可用于抗真菌感染，還是一種有效的mTOR抑制劑，因此還可用于各種腫瘤(如非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌等)的治療。

附圖說明

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。

圖1是光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型的X-射線粉末衍射(XRD)譜圖。

圖2是光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型的TG-DSC圖譜。

具體實(shí)施方式

為了更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面結(jié)合具體實(shí)施例來做進(jìn)一步的說明，但具體的實(shí)施方式并不是對本發(fā)明的內(nèi)容所做的限制。

實(shí)施例1：

取光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑15g于反應(yīng)瓶中，加入300ml石油醚和乙酸丙酯的混合溶液(體積比為1:5)，加熱至40℃，攪拌溶清，邊攪拌，邊降溫至10℃，析出固體，繼續(xù)降溫至0℃攪拌10h。真空抽濾，濾餅于50℃真空干燥6h，得13.5g白色針狀固體，收率90.3％。

相關(guān)分析試驗(yàn)：

1、X-射線粉末衍射測試：

儀器型號：Bruker D8ADVANCE；光源Cu-Ka 40kV 40mA；石墨單色器；發(fā)散狹縫(DS)：1°；LynxEye陣列探測器，掃描方式：θ/θ,連續(xù)掃描；掃描范圍：0°～40°。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：其X-射線粉末衍射譜圖如圖1所示，所述晶型以2θ±0.2°衍射角表示的X-射線粉末衍射譜圖譜在2.21°、3.37°、4.53°、4.97°、5.38°、6.74°、8.21°、9.75°、11.07°、12.84°、13.86°、14.28°、15.05°、15.75°、18.27°、20.86°、21.34°、24.72°、25.28°、25.85°、28.34°、28.72°、29.12°和30.55°處顯示出特征衍射峰。與市售伊曲康唑樣品和專利CN201510350844.3公開的光學(xué)異構(gòu)體2S,4R,2’S-伊曲康唑晶型的X-射線粉末衍射譜圖譜比較，其圖譜中衍射峰位置和強(qiáng)度完全不同，故其為一種新的晶型。

2、水分測定：用卡爾-費(fèi)休氏法測得該物質(zhì)中水分為0.23％，由水分結(jié)果可以看出該物質(zhì)不含有結(jié)晶水，不是水合物，其水分只是吸附水。

3、差熱分析和熔點(diǎn)測定：

對本發(fā)明制備的2R,4S,2’S-伊曲康唑晶體進(jìn)行差熱和熱重分析，結(jié)果如附圖2所示；結(jié)果表明，本品在150℃前沒有吸收峰，說明樣品中無結(jié)晶水或結(jié)晶溶劑；本品在157.5℃處有放熱峰。本品經(jīng)熔點(diǎn)測定：157～159℃。由現(xiàn)有技術(shù)可知伊曲康唑的熔點(diǎn)為165～169℃，從側(cè)面證明了其為一種不同的晶型。

實(shí)施例2：

取光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑15g于反應(yīng)瓶中，加入150ml石油醚和乙酸丙酯的混合溶液(體積比為1:4)，加熱至60℃，攪拌溶清，邊攪拌，邊降溫至15℃，析出固體，繼續(xù)降溫至-5℃攪拌6h。真空抽濾，濾餅于40℃真空干燥10h，得13.3g白色針狀固體，收率88.5％。所制得晶體的使用Cu-Kα射線測量得到的X-射線粉末衍射譜圖與實(shí)施例1相似。

實(shí)施例3：

取光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑15g于反應(yīng)瓶中，加入225ml石油醚和乙酸丙酯的混合溶液(體積比為1:5)，加熱至50℃，攪拌溶清，邊攪拌，邊降溫至15℃，析出固體，繼續(xù)降溫至-5℃攪拌4h。真空抽濾，濾餅于60℃真空干燥4h，得13.8g白色針狀固體，收率91.8％。所制得的2R,4S,2’S-伊曲康唑晶體使用Cu-Kα射線測量得到的X-射線粉末衍射譜圖與實(shí)施例1相似。

實(shí)施例4：光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型的光照實(shí)驗(yàn)

將實(shí)施例3所提供的光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型均勻分?jǐn)傊脸谂囵B(yǎng)皿中，厚度≤5mm，調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度為4500±500Lx，30天后取樣檢測，并于0天的結(jié)果進(jìn)行比照。結(jié)果見表1。

表1 光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑結(jié)晶的光照實(shí)驗(yàn)

結(jié)果表明：未發(fā)生顯著變化，在此條件下保持穩(wěn)定。

實(shí)施例5：光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型的高溫實(shí)驗(yàn)

將本發(fā)明實(shí)施例3所提供的光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型放置于密封鋁箔袋中，置于60℃恒溫干燥箱中，30天后進(jìn)行檢測，并于0天的結(jié)果進(jìn)行比照。結(jié)果見表2。

表2 光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑結(jié)晶高溫實(shí)驗(yàn)

結(jié)果表明：未發(fā)生顯著變化，在此條件下保持穩(wěn)定。

實(shí)施例6：光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型的高濕實(shí)驗(yàn)

將本發(fā)明實(shí)施例3所提供的光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型開口置恒濕密閉容器中，在25℃于相對濕度(90±5)％條件下放置十天，于五、十天取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目要求檢測，同時(shí)準(zhǔn)確稱量試驗(yàn)前后供試品的重量，以考察供試品的吸濕潮解性能。結(jié)果見表3。

表3 光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型結(jié)晶高濕實(shí)驗(yàn)

結(jié)果表明：未發(fā)生顯著變化，在此條件下保持穩(wěn)定，無引濕性。

實(shí)施例7：光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型的加速實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)方法：按照《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄XIX C原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則中的方法進(jìn)行。將本發(fā)明實(shí)施例3所提供的光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶體放置于鋁箔袋中，置于40±2℃，相對濕度為75±5％的恒溫干燥箱中，1月、2月、3月和6月后分別進(jìn)行取樣檢測，以考察其穩(wěn)定性。結(jié)果見表4。

表4 光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑結(jié)晶加速實(shí)驗(yàn)

結(jié)果表明，經(jīng)6個(gè)月的加速試驗(yàn)，本發(fā)明實(shí)施例3所提供的2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均符合中國藥典2010版標(biāo)準(zhǔn)要求，有關(guān)物質(zhì)含量低，各指標(biāo)均無明顯變化，本品質(zhì)量穩(wěn)定性好。

實(shí)驗(yàn)例8：25℃下本發(fā)明伊曲康唑晶體化合物與現(xiàn)有技術(shù)晶型在水中的溶解度對比

試驗(yàn)品：本發(fā)明實(shí)施例1-3所制備的樣品；

對照品1是市售伊曲康唑原料藥；

對照品2是參照專利201510350844.3實(shí)施例2制備的光學(xué)異構(gòu)體2S,4R,2’S-伊曲康唑晶型。

測定方法：將過量的試驗(yàn)品和對照品置于50ml錐形瓶中，加入30ml蒸餾水，25℃恒溫?cái)嚢?2小時(shí)，取樣5ml。樣品經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液20μL測定藥物含量即為水中溶解度(mg/ml)。結(jié)果見表5：

表5 本發(fā)明晶型與現(xiàn)有技術(shù)晶型在水中的溶解度對比

從表55可以看出，25℃下，本發(fā)明所提供的2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型在水中的溶解度與現(xiàn)有技術(shù)相比，有顯著提高。

實(shí)施例9：光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型的藥物活性試驗(yàn)

將本發(fā)明實(shí)施例3所提供的光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型與伊曲康唑?qū)φ掌贩謩e與HUVEC細(xì)胞和人原代肝細(xì)胞進(jìn)行孵育，得到兩種藥物對細(xì)胞活性的抑制作用，其中試驗(yàn)品為本發(fā)明實(shí)施例3所制備的樣品；對照品1是市售伊曲康唑原料藥；對照品2是參照專利201510350844.3實(shí)施例2制備的光學(xué)異構(gòu)體2S,4R,2’S-伊曲康唑晶型。結(jié)果見表6所示。

表6 光學(xué)異構(gòu)體2R,4S,2’S-伊曲康唑伊曲康唑晶型的藥物活性試驗(yàn)

由研究結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例3所提供的2R,4S,2’S-伊曲康唑晶型對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的抑制作用優(yōu)于消旋體伊曲康唑，而對人原代肝細(xì)胞的抑制低于消旋體伊曲康唑，說明2R,4S,2’S-伊曲康唑晶體具有較高的抗腫瘤活性和較低的肝毒性。