本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從植物中提取、分離純化具有抗炎止癢活性的化合物，尤其涉及一種從疏毛羅勒(Ocimum basilicum L.)全草中提取、分離純化出的具有抗炎止癢活性的脂肪腈化合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

羅勒葉子呈橢圓尖狀，花朵為紫白色，蒸餾其葉子及花朵可得透明無色的精油，香味很像丁香、松針之綜合體。是一個(gè)龐大的家族。不同種的羅勒因特色或獨(dú)特香氣而命名。羅勒的很多研究著重于香料的提取和成分分析方面。其主要用于意式、法式希臘料理，在東方的印度及泰國烹調(diào)也經(jīng)常使用。羅勒在中國國內(nèi)一般作為蔬菜而栽培，其作為一種新型的特種蔬菜具有很大的發(fā)展空間。羅勒含揮發(fā)油0.02～0.04％，油的比重(15℃)0.900～0.930，折光度(20℃)1.4800～1.4950，旋光度(20℃)-6°～20°，主要成分為羅勒烯、α-蒎烯、1,8-桉葉素、芳樟醇、牻牛兒醇、檸檬烯，3-蒈烯、甲基胡椒酚、丁香油酚、丁香油酚甲醚、茴香醚、桂皮酸甲酯、3-己烯-1-醇、3-辛酮及糠醛等，純羅勒精油殺菌率百分百之九十九。主要用作調(diào)香原料，配制化妝品、皂用及食用香精，亦用于制牙膏、漱口劑中作矯味劑。全草入藥，有治療頭痛，偏頭痛，耳痛，鼻竇炎，支氣管炎，袪痰，傷風(fēng)感冒，氣喘，打嗝，脹氣，胃痛，胃痙攣、胃腸脹氣、消化不良、腸炎腹瀉、尿酸過多，肌肉酸痛，皮膚松軟，胸痛、跌打損傷、瘀腫、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、小兒發(fā)熱、腎臟炎、蛇咬傷，煎水洗濕疹及皮炎面皰，粉刺，羊癲瘋，月經(jīng)不順，乳汁分泌少，乳房充血發(fā)炎，激勵(lì)情緒，減輕壓力，減輕憂郁不安，催情，補(bǔ)身，抗菌，蟲咬傷。有消暑、解毒、去痛健胃、益力添精、通力血脈等功效。莖葉為產(chǎn)科用藥，可使分娩前血行良好；種子名光明子，主治目翳，并試用于避孕。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

解決的技術(shù)問題：本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供從疏毛羅勒全草中提取分離得到的一種新的脂肪腈化合物羅勒素。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述脂肪腈化合物羅勒素的制備方法。

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供上述倍脂肪腈化合物羅勒素在制備抗炎止癢抗過敏藥物和在抗炎止癢抗過敏相關(guān)產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)方案：一種抗炎止癢天然活性化合物，命名為羅勒素，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

其中n為不超過20的正整數(shù)，R為不超過6個(gè)碳的烷基取代基。

抗炎止癢天然活性化合物優(yōu)選的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

分子式為C₂₈H₄₁NO₂，分子量423.3，化學(xué)名為17-[4-(2-腈基-乙烯基)苯基]-15-烯-十七酸乙酯。

上述抗炎止癢天然活性化合物的制備方法，制備步驟為：(1)提取：以疏毛羅勒全草為原料，經(jīng)粉碎后，加入10-20倍原料質(zhì)量的甲醇、乙醇或醇水混合溶液進(jìn)行回流或超聲輔助提取，共提取2-5次，每次30-60min，合并提取液，減壓濃縮至干，得到疏毛羅勒全草提取物；(2)混懸液液萃?。簩⑹杳_勒全草提取物分散于10-20倍其質(zhì)量的30-50℃溫水中，分別用與水等體積的石油醚、乙醚或環(huán)己烷進(jìn)行液液萃取3-4次，合并提取液，濃縮至無溶劑，得到疏毛羅勒萃取物；(3)柱層析分離：將疏毛羅勒萃取物用乙酸乙酯溶解，加入與乙酸乙酯等質(zhì)量300-400目的柱層析硅膠拌勻，50℃減壓蒸干，預(yù)先稱取疏毛羅勒萃取物8-25倍質(zhì)量的300-400目的柱層析硅膠，采用石油醚濕法裝柱，將拌好的硅膠裝入層析柱內(nèi)，以體積比為10:1-1:1的石油醚-乙酸乙酯混合液梯度洗脫，薄層層析檢查，合并化合物羅勒素的餾分，濃縮至無溶劑，得到羅勒素粗品；(4)純化：將羅勒素粗品用乙酸乙酯溶解，加入與乙酸乙酯等質(zhì)量200-300目的柱層析硅膠拌勻，50℃減壓蒸干，預(yù)先稱取羅勒素粗品10倍質(zhì)量的200-300目的柱層析硅膠，采用石油醚濕法裝柱，將拌好的硅膠裝入層析柱內(nèi)，以體積比為10:1-1:1的石油醚-氯仿混合液梯度洗脫，薄層層析檢查，合并化合物羅勒素的餾分，濃縮至無溶劑，得到羅勒素純品。

上述化合物在制備用于由蚊蟲叮咬的商用抗炎止癢產(chǎn)品中的應(yīng)用。

上述化合物在制備由異性蛋白引起的過敏及炎癥的抗過敏藥物中的應(yīng)用。

一種用于由蚊蟲叮咬的抗炎止癢藥物，有效成分為上述化合物。

一種由異性蛋白引起的過敏及炎癥的抗過敏藥物，有效成分為上述化合物。

有益效果：1.本發(fā)明中的羅勒素進(jìn)行抗炎、止癢活性檢測，結(jié)果顯示該化合物具有良好的抗炎、止癢活性，可為醫(yī)藥工業(yè)提供有藥用價(jià)值的新化合物或先導(dǎo)化合物。2.該方法簡單易行，周期短，可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。3.產(chǎn)品得率高、純度高。

附圖說明

圖1羅勒素的¹H-NMR圖；

圖2羅勒素的¹³C-MNR圖；

圖3羅勒素的¹³C-MNR(局部)圖；

圖4羅勒素的COSY圖；

圖5羅勒素的HSQC圖；

圖6羅勒素的HMBC圖；

圖7羅勒素的質(zhì)譜圖。

具體實(shí)施方式

下面的實(shí)施例可使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。在不背離發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改和替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。

實(shí)施例1：

脂肪腈化合物羅勒素的提取和分離

稱取疏毛羅勒全草4.0kg，粉碎后，加入50升80wt.％乙醇水溶液進(jìn)行熱回流提取，共提取3次，每次50min。合并提取液，減壓濃縮，得乙醇提取物150g。將乙醇提取物分散于3升40℃溫水中，用環(huán)己烷負(fù)壓空化混懸液液萃取4次，每次3升。萃取后的水相再用乙酸乙酯負(fù)壓空化混懸液液萃取3次，每次3升，合并環(huán)己烷萃取液，減壓濃縮得到環(huán)己烷萃取物4g。將環(huán)己烷萃取物用4g乙酸乙酯溶解，加入4g目數(shù)為300～400的層析硅膠拌勻、50℃減壓蒸干，預(yù)先稱取100g 300～400目層析硅膠，采用石油醚濕法裝柱，將拌好的硅膠裝入層析柱內(nèi)，以體積比為10:1-1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，薄層層析檢測，合并含化合物羅勒素的流份，濃縮至干，得到羅勒素粗品。

將羅勒素粗品用乙酸乙酯溶解，加入與乙酸乙酯等質(zhì)量的目數(shù)為200～300的柱層析硅膠拌勻，50℃減壓蒸干，預(yù)先稱取羅勒素粗品8-10倍質(zhì)量的200～300目的柱層析硅膠，采用石油醚濕法裝柱，將拌好的硅膠裝入層析柱內(nèi)，以體積比為10:1-1:1的石油醚-氯仿混合液梯度洗脫，薄層層析檢查，合并化合物羅勒素的餾分，濃縮至無溶劑，得到羅勒素純品156.6mg。

脂肪腈化合物羅勒素結(jié)構(gòu)鑒定

實(shí)施例1化合物羅勒素為淡黃色油狀液體，易溶于環(huán)己烷、正己烷、石油醚、氯仿等有機(jī)試劑；經(jīng)¹H NMR和¹³C MNR數(shù)據(jù)見表1，結(jié)合H–H COSY、ROESY、HSQC、HMQC以及HMBC，確定了該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。該化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

表1化合物羅勒素的¹H NMR和¹³C NMR數(shù)據(jù)

(1)抗炎作用

選取昆明雌性小鼠50只，每只體重23-27克，隨機(jī)分成5組，每組10只。生理鹽水組N，陽性對(duì)照組A(地塞米松磷酸鈉注射液5mg/mL)，羅勒素高劑量組20mg/kg，羅勒素中劑量組10mg/kg，羅勒素低劑量組5mg/kg；生理鹽水組、陽性對(duì)照組和受試藥物組均采用腹腔給藥并注射相同體積0.25mL，給藥后30min，于小鼠右后足掌心進(jìn)針至踝關(guān)節(jié)處，皮下注射新鮮蛋清0.1mL，60min后腫脹度達(dá)最大，測量踝關(guān)節(jié)處周長，計(jì)算腫脹度，腫脹度＝(致炎后周長－給藥前周長)/給藥前周長×100％。

表2羅勒素對(duì)蛋清所致小鼠足腫脹的抑制

注：*表示與NS組比較*P＜0.05

結(jié)果表明：羅勒素對(duì)蛋清致小鼠足腫脹有抑制作用，受試各組與模型組比較，足腫脹度差異有統(tǒng)計(jì)意義，可見羅勒素對(duì)蛋清致大鼠足腫脹有明顯抑制效果。

(2)對(duì)小鼠皮膚瘙癢的影響

將昆明雌性小鼠50只,每只體重23-27克，隨機(jī)分為5組，每組10只，生理鹽水組N，陽性對(duì)照組A(氟輕松軟膏2.5mg/10g)，羅勒素供試液組共3組，羅勒素高劑量組40mg/kg，羅勒素中劑量組20mg/kg，羅勒素低劑量組10mg/kg。將藥膏均勻涂抹于小鼠左后足，生理鹽水組和受試藥物組均采用皮下給藥并注射相同體積0.25mL，給藥后30min，向各組小鼠左后足墊注射4-氨基吡啶(1.25mg/mL)0.05mL,自小鼠開始舔后足作為瘙癢特征，無人情況下用攝像機(jī)記錄15min，小鼠的瘙癢行為并進(jìn)行計(jì)數(shù)，連續(xù)添足后抬頭為一次；發(fā)現(xiàn)羅勒素具有發(fā)現(xiàn)羅勒精油具有減輕小鼠瘙癢癥狀的功能。

表2羅勒素對(duì)4-氨基吡啶所致小鼠瘙癢的抑制

注：*表示與NS組比較*P＜0.05**P＜0.01

臨床試驗(yàn)病例：

受試者10人18-23周歲，均為志愿者。分別取羅勒素0.5wt.‰的乙醇水溶液，及時(shí)均勻涂于蚊蟲叮咬處，隨時(shí)觀后止癢時(shí)間、由蚊蟲叮咬引起風(fēng)斑大小和受試后風(fēng)斑消失時(shí)間。風(fēng)斑消失時(shí)間為2-6min，瘙癢消失時(shí)間1-10s，實(shí)施結(jié)果表明含羅勒素0.5wt.‰的乙醇水溶液具有快速止癢、抗炎作用。

表4羅勒素對(duì)蚊蟲叮咬所致瘙癢和風(fēng)斑的抑制