本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，涉及咖啡酸-賴氨酸及其衍生物，以及咖啡酸-賴氨酸及其衍生物在抗糖尿病等相關(guān)藥物中的用途。
背景技術(shù)：
糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是由于胰島素的分泌不足，導(dǎo)致機體出現(xiàn)糖、脂及蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)紊亂的一類代謝性疾病，也是當(dāng)今社會危害人類健康的主要疾病之一。根據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟2009年公布的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，目前全球有糖尿病患者2.85億，并且預(yù)計到2030年全球?qū)⒂?億糖尿病患者。中國的糖尿病患病率自20世紀(jì)80年代至今已增加了5-6倍，2012年統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，現(xiàn)有糖尿病病人已超過1億人，是我國主要的和醫(yī)療費用開支最大的疾病之一。隨著糖尿病病程的延長可出現(xiàn)各種大血管及微血管慢性并發(fā)癥，如糖尿病腎病、眼病、足病、心血管并發(fā)癥、神經(jīng)病變等。肥胖型糖尿病是我國近年來出現(xiàn)的典型且比例最大的一類糖尿病，高血糖并伴隨高血脂是該類糖尿病的顯著臨床特點。因此，防治糖尿病不僅是科研工作的需要，同時也是整個社會的需要。到目前為止，皮下注射胰島素和口服降糖藥物仍然是糖尿病人的主要治療手段，其中，口服降糖藥物在早期的糖尿病防治中仍然是非常重要的臨床治療方法。
目前用于糖尿病治療的口服藥物主要有磺脲類、噻唑烷二酮類、α-葡萄糖苷酶抑制劑類、DPP-IV抑制劑類、SGLT2抑制劑類等，但這些口服降糖藥往往伴發(fā)嚴(yán)重的副作用，同時，該類藥物只針對糖尿病的治療，即對已經(jīng)發(fā)病的糖尿病有降糖效果，而對糖尿病的防治關(guān)注較少。此外，除雙胍類藥物外，其他藥物在服藥期間，降糖效果較好而降脂效果不明顯。因此，研究和開發(fā)新型的降糖或降糖降脂藥物或候選化合物在當(dāng)前形勢下具有積極的意義。
咖啡酸，化學(xué)名稱3,4-二羥基肉桂酸，是一類廣泛存在于自然界，如咖啡豆、藍(lán)桉樹、魁葉萍、大麥等中的活性小分子化合物；具有抗菌、抗病毒、抗蛇毒、興奮中樞神經(jīng)等多種生理活性，臨床主要作為止血升白細(xì)胞藥物，具有收縮增固微血管、提高凝血因子的功能、升高白細(xì)胞和血小板的作用。但是，非專一性且活性較低、毒性較大的副作用，限制了它的進(jìn)一步使用。通過結(jié)構(gòu)改造，合成或半合成咖啡酸的衍生物，如咖啡酸苯乙酯等是該類化合物在藥物研究和開發(fā)中的主要途徑之一。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供咖啡酸-賴氨酸及其衍生物、制備方法和用途。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
咖啡酸-賴氨酸及其衍生物，結(jié)構(gòu)如式I所示：
其中，R1和R2為H、OH、OCH3、OCOCH3、3-methylbut-2-enyl或異戊烯基；R3為H、CH3、Bn、OCH3、OCOCH3、BnCH2、i-Pr、t-Bu或金剛烷基。
上述咖啡酸-賴氨酸及其衍生物的制備方法，包括以下步驟：
1)將原料A溶解于有機溶劑中得溶液I，所述原料A為咖啡酸或咖啡酸衍生物；
2)向溶液I中加入有機胺，然后置于冰水浴中攪拌冷卻至0℃，得溶液II；
3)在冰水浴以及攪拌條件下向溶液II中依次加入縮合劑以及原料B，得反應(yīng)液，加入縮合劑與加入原料B之間間隔10～30min(旨在使縮合劑與原料A反應(yīng)生成更加活潑的中間產(chǎn)物)，所述原料B為賴氨酸或賴氨酸衍生物，將反應(yīng)液升溫后于20～25℃反應(yīng)12～24小時，反應(yīng)結(jié)束后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑；
4)向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑后所得剩余物中加入乙酸乙酯，然后混合均勻并抽濾，對抽濾所得濾液中的有機相進(jìn)行洗滌后用無水硫酸鈉干燥，然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑得固體粗產(chǎn)物，所述粗產(chǎn)物通過柱層析純化得到目的產(chǎn)物。
所述有機溶劑選自非質(zhì)子性有機溶劑，如二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氫呋喃、甲苯等；所述有機胺選自二級胺或三級胺，如三乙胺、二異丙基胺、二異丙基乙基胺等；所述縮合劑選自活潑酯類縮合劑中的兩種(物質(zhì)的量比為1:1～1:4，即其中一種是另一種用量的1～4倍)，如DCC和DMAP、NMM和IBCF、EDCI和HOBt、EDCI和DMAP等。
所述咖啡酸衍生物的結(jié)構(gòu)為：
其中，R1和R2為H、OH、OCH3、OCOCH3、3-methylbut-2-enyl或異戊烯基；
所述賴氨酸衍生物的結(jié)構(gòu)如以下結(jié)構(gòu)式所示或者所述賴氨酸衍生物的結(jié)構(gòu)為以下結(jié)構(gòu)式的鹽的形式，所述鹽的形式為鹽酸鹽或硫酸鹽：
其中，R3為H、CH3、CH2CH3、i-Pr、t-Bu、Bn、OCH3、OCOCH3或金剛烷基。
按物質(zhì)的量比計，所述原料A與有機胺的用量比例為1:1～1:4，原料A與縮合劑(以兩種活潑酯類縮合劑的總和計)的用量比例為1:1～1:8，原料A與原料B的用量比例為1:1～1:4。
所述洗滌的具體步驟為：依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水對濾液中的有機相進(jìn)行洗滌。
所述柱層析中，按照石油醚:乙酸乙酯＝10:1～1:1進(jìn)行梯度洗脫，柱層析具體條件為：
柱層析硅膠型號是100～300目；用量為固體粗產(chǎn)物質(zhì)量的5～50倍；
流動相：石油醚沸程為60～90℃，乙酸乙酯為分析純；
粗產(chǎn)物中加入兩倍(質(zhì)量比)的柱層析硅膠，攪拌均勻后裝柱。
梯度洗脫為：
梯度I,石油醚:乙酸乙酯＝10:1(體積比)，總體積(單位：毫升)為固體粗產(chǎn)物質(zhì)量(單位：克)的5～10倍；
梯度II,石油醚:乙酸乙酯＝7:1(體積比)，總體積(單位：毫升)為固體粗產(chǎn)物質(zhì)量(單位：克)的8～16倍；
梯度III,石油醚:乙酸乙酯＝1:1(體積比)，總體積(單位：毫升)為固體粗產(chǎn)物質(zhì)量(單位：克)的5～10倍；
每試管收集5mL，GF254鑒定同一色譜峰后，收集、合并，-0.08MPa，45℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。
所述總體積對固體粗產(chǎn)物質(zhì)量的倍數(shù)因目的產(chǎn)物的不同而不同。
所述制備方法還包括以下步驟：所述R1以及R2為羥基時，在步驟1)前，對R1以及R2進(jìn)行保護，并且在步驟4)后進(jìn)行脫保護。所用的保護基，如芐基、硅醚基、烷氧基等均可，以消除活潑氫可能產(chǎn)生的副反應(yīng)。
上述咖啡酸-賴氨酸及其衍生物在制備防治糖尿病的藥物中的用途。
上述咖啡酸-賴氨酸及其衍生物在制備糖尿病并發(fā)癥輔助治療藥物中的用途。
本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：
本發(fā)明所述咖啡酸-賴氨酸及其衍生物制備方法簡單，原料易得，產(chǎn)物容易分離純化，產(chǎn)率高，且所述咖啡酸-賴氨酸及其衍生物具有體內(nèi)降糖活性，可作為藥物活性成分制備防治糖尿病、改善糖代謝及輔助治療糖尿病并發(fā)癥的藥物。
附圖說明
圖1為肝臟組織切片；(a)C5組，(b)高組。
具體實施方式
下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作詳細(xì)說明。
本發(fā)明所述咖啡酸-賴氨酸及其衍生物的合成是以咖啡酸(或咖啡酸衍生物)和賴氨酸(或賴氨酸衍生物)通過縮合反應(yīng)(例如EDCl/DMAP/Et3N)得到。該咖啡酸-賴氨酸及其衍生物的結(jié)構(gòu)如式I所示：
其中，R1和R2為H、OH、OCH3、OCOCH3、3-methylbut-2-enyl或異戊烯基；R3為H、CH3、Bn、OCH3、OCOCH3、BnCH2、i-Pr、t-Bu或金剛烷基。
本發(fā)明采用小鼠口服葡萄糖耐量實驗?zāi)Ｐ停?h內(nèi)測定血糖(BG)的變化，評價所述咖啡酸-賴氨酸及其衍生物對小鼠體內(nèi)糖代謝的影響，進(jìn)而評價其在抗糖尿病以及相關(guān)藥物中的應(yīng)用。
(一)咖啡酸-賴氨酸及其衍生物的制備實例
實例1 咖啡酸-賴氨酸(簡稱C1，如式II-1所示)的合成
1)稱取咖啡酸90mg(0.5mmol)加入10mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加4mL DCM(二氯甲烷)，將咖啡酸溶解；
2)向圓底燒瓶中再加入280μL(約2mmol)三乙胺，冰水浴下攪拌冷卻至0℃；
3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入EDCI(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽)190mg(1mmol)和DMAP(4-二甲胺基吡啶)122mg(1mmol)，30min后向圓底燒瓶中再加入L-賴氨酸鹽酸鹽91mg(0.5mmol)，溫度升至室溫(25℃)，繼續(xù)于攪拌條件下反應(yīng)24小時；
4)反應(yīng)結(jié)束后減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入8mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得淡黃色固體粗產(chǎn)物，柱層析(所述總體積對固體粗產(chǎn)物質(zhì)量的倍數(shù)：梯度I為10倍，梯度II為16倍，梯度III為5倍)后得咖啡酸-賴氨酸(80.2mg,產(chǎn)率52％)。結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下：LC-MS:309.1(M+1+)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.70(d,1H,J＝16Hz),7.43-7.48(m,2H),7.33(d,1H,J＝8Hz),6.40(d,1H,J＝16Hz),4.08(dd,1H,J＝5Hz,J＝8Hz),3.06(t,2H,J＝8Hz),2.07(m,2H),1.68(m,2H),1.45(m,2H)。
實例2 咖啡酸-賴氨酸甲酯(簡稱C2，如式II-2所示)的合成
1)稱取咖啡酸90mg(0.5mmol)加入10mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加5mL氯仿，將咖啡酸溶解；
2)向圓底燒瓶中再加入140μL(約1mmol)二異丙基乙基胺，冰水浴下攪拌冷卻至0℃；
3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入DCC(二環(huán)己基碳二亞胺)154mg(0.75mmol)和DMAP(4-二甲胺基吡啶)91.5mg(0.75mmol)，10min后向圓底燒瓶中再加入L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽196mg(1mmol)，溫度升至25℃，繼續(xù)于攪拌條件下反應(yīng)24小時；
4)反應(yīng)結(jié)束后減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入10mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得白色固體粗產(chǎn)物，柱層析(所述總體積對固體粗產(chǎn)物質(zhì)量的倍數(shù)：梯度I為5倍，梯度II為8倍，梯度III為10倍)后得咖啡酸-賴氨酸甲酯(104.6mg,產(chǎn)率65％)。結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下：LC-MS:323.1(M+1+)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.64(d,1H,J＝16Hz),7.42-7.47(m,2H),7.31(d,1H,J＝8Hz),6.42(d,1H,J＝16Hz),4.08(dd,1H,J＝5Hz,J＝8Hz),3.76(s,3H),3.09(t,2H,J＝8Hz),2.05(m,2H),1.66(m,2H),1.43(m,2H)。
實例3 阿魏酸-賴氨酸異丙酯(簡稱C3，如式Ⅲ所示)的合成
1)稱取阿魏酸97mg(0.5mmol)加入10mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加3mL THF(四氫呋喃)，將阿魏酸溶解；
2)向圓底燒瓶中再加入210μL(約1.5mmol)二異丙基胺，冰水浴下攪拌冷卻至0℃；
3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入NMM(N-甲基嗎啡啉)202mg(2mmol)和IBCF(氯甲酸異丁酯)269mg(2mmol)，20min后向圓底燒瓶中再加入L-賴氨酸異丙酯鹽酸鹽376mg(2mmol)，溫度升至25℃，繼續(xù)于攪拌條件下反應(yīng)18小時；
4)反應(yīng)結(jié)束后減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入15mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得棕色固體粗產(chǎn)物，柱層析(所述總體積對固體粗產(chǎn)物質(zhì)量的倍數(shù)：梯度I為7倍，梯度II為10倍，梯度III為10倍)后得阿魏酸-賴氨酸異丙酯(109.6mg,產(chǎn)率60％)。結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下：LC-MS:365.2(M+1+)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.35(d,1H,J＝16Hz),7.00-7.04(m,1H),6.98(m,1H),6.86(m,1H),6.44(d,1H,J＝16Hz),4.92(m,1H),4.08(dd,1H,J＝5Hz,J＝8Hz),3.05(t,2H,J＝8Hz),1.92(m,2H),1.77(m,2H),1.53(m,2H),1.42(d,3H,J＝6.7Hz),1.39(d,3H,J＝6.7Hz)。
實例4 3-乙?；?咖啡酸-賴氨酸芐酯(簡稱C4，如式Ⅳ所示)的合成
1)稱取原料3-乙?；?咖啡酸(結(jié)構(gòu)式如下)111mg(0.5mmol)加入10mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加3mL甲苯，將原料溶解；
2)向圓底燒瓶中再加入280μL(約2mmol)三乙胺，冰水浴下攪拌冷卻至0℃；
3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入EDCI 143mg(0.75mmol)和HOBt101.3mg(0.75mmol)，30min后向圓底燒瓶中再加入L-賴氨酸芐酯141.6mg(0.6mmol)，溫度升至室溫，繼續(xù)于攪拌條件下反應(yīng)24小時；
4)反應(yīng)結(jié)束后減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入10mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得褐色固體粗產(chǎn)物，柱層析(所述總體積對固體粗產(chǎn)物質(zhì)量的倍數(shù)：梯度I為10倍，梯度II為8倍，梯度III為10倍)后得3-乙?；?咖啡酸-賴氨酸芐酯(92.4mg,產(chǎn)率42％)。結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下：LC-MS:441.2(M+1+)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.68(d,1H,J＝16Hz),7.44-7.54(m,2H),7.30-7.35(m,6H),6.40(d,1H,J＝16Hz),5.08-5.12(m,2H),4.08(dd,1H,J＝5Hz,J＝8Hz),3.07(t,2H,J＝8Hz),2.28(s,3H),2.04(m,2H),1.69(m,2H),1.46(m,2H)。
實例5 3-(3,5-二(3-甲基丁-2-烯)苯基)丙烯酸-賴氨酸(簡稱C5，如式Ⅴ所示)的合成
1)稱取原料3-(3,5-二(3-甲基丁-2-烯)苯基)丙烯酸(結(jié)構(gòu)式如下)150mg(0.5mmol)加入10mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加5mL丙酮，將原料溶解；
2)向圓底燒瓶中再加入280μL(約2mmol)三乙胺，冰水浴下攪拌冷卻至0℃；
3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入EDCI 143mg(0.75mmol)和DMAP91.5mg(0.75mmol)，15min后向圓底燒瓶中再加入L-賴氨酸鹽酸鹽109mg(0.6mmol)，溫度升至室溫，繼續(xù)于攪拌條件下反應(yīng)20小時；
4)反應(yīng)結(jié)束后減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入10mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得褐色固體粗產(chǎn)物，柱層析(所述總體積對固體粗產(chǎn)物質(zhì)量的倍數(shù)：梯度I為5倍，梯度II為10倍，梯度III為10倍)后得3-(3,5-二(3-甲基丁-2-烯)苯基)丙烯酸-賴氨酸(75mg,產(chǎn)率35％)。結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下：LC-MS:429.3(M+1+)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.54(d,1H,J＝16Hz),7.15-7.20(m,2H),6.30(d,1H,J＝16Hz),5.30-5.34(m,2H),4.05(dd,1H,J＝5Hz,J＝8Hz),3.28-3.42(m,4H),3.05(t,2H,J＝8Hz),2.02(m,2H),1.90(m,6H),1.80(m,6H),1.65(m,2H),1.40(m,2H)。
實例6 3-(4-羥基-3-異戊烯基苯基)丙烯酸-賴氨酸(簡稱C6，如式Ⅵ所示)的合成
1)稱取原料3-(4-羥基-3-異戊烯基苯基)丙烯酸(結(jié)構(gòu)式如下)116mg(0.5mmol)加入10mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加4mL DCM，將原料溶解；
2)向圓底燒瓶中再加入280μL(約2mmol)三乙胺，冰水浴下攪拌冷卻至0℃；
3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入EDCI 143mg(0.75mmol)和DMAP91.5mg(0.75mmol)，30min后向圓底燒瓶中再加入L-賴氨酸鹽酸鹽109mg(0.6mmol)，溫度升至室溫，繼續(xù)于攪拌條件下反應(yīng)24小時；
4)反應(yīng)結(jié)束后減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入10mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得褐色固體粗產(chǎn)物，柱層析(所述總體積對固體粗產(chǎn)物質(zhì)量的倍數(shù)：梯度I為10倍，梯度II為8倍，梯度III為10倍)后得3-(4-羥基-3-異戊烯基苯基)丙烯酸-賴氨酸(59mg,產(chǎn)率33％)。結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)如下：LC-MS:361.2(M+1+)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.55(d,1H,J＝16Hz),7.19-7.25(m,2H),6.79(d,1H,J＝8Hz),6.25(d,1H,J＝16Hz),5.30-5.34(m,1H),4.09(dd,1H,J＝5Hz,J＝8Hz),3.26-3.33(m,2H),3.01(t,2H,J＝8Hz),2.05(m,2H),1.73(m,3H),1.69(m,6H),1.60(m,2H),1.44(m,2H)。
(二)正常小鼠的口服葡萄糖耐量試驗
測定方法參考文獻(xiàn)報道的標(biāo)準(zhǔn)方法，簡述為：實驗前雌雄各半的C57BL/6小鼠禁食12h，以1.75g/kg(濃度為0.35g/mL)體重量的葡萄糖劑量灌胃。用血糖儀分別在0、0.5、1、1.5、2h測定血糖(BG)。每組實驗動物7只，共56只。
給藥方式
(1)空白對照組(簡稱空白組)：與其他組等體積生理鹽水(20mL/kg)；
(2)C1～C6實驗組(簡稱C組，C1～C6濃度相同，生理鹽水溶解，少量DMSO助溶)：按照50μmol/kg灌胃給藥；
(3)陽性對照藥物組(簡稱陽性組)：二甲雙胍溶解于超純水中，終濃度是10g/L，按照50μmol/kg灌胃給藥；
羅氏血糖儀(逸動型，已校正)尾靜脈采血測定；每組實驗數(shù)據(jù)取平均值。
測試結(jié)果及數(shù)據(jù)分析(結(jié)果見表1)
(1)相較于空白組(7.4，12.0，9.5，8.0，6.9)，C組和陽性組均可不同程度的降低血糖，陽性組(即二甲雙胍7.6，9.5，8.0，7.6，7.2)降糖效果最好；
(2)與陽性組相比，上述實例所制備的化合物的降糖能力低于或接近二甲雙胍，其中C5和C6的降糖能力與二甲雙胍非常接近，同時不會造成血糖過低現(xiàn)象(2h后，二甲雙胍為6.2，C5為7.7，C6為7.8)。
(3)C5和C6相比具有更加平穩(wěn)的降糖能力。
對于正常小鼠模型，所制備的咖啡酸-苯丙氨酸及其衍生物具有明顯的降糖能力。
表1.正常小鼠的口服葡萄糖耐量實驗結(jié)果
(三)肥胖型糖尿病小鼠模型及藥物的降糖作用
模型構(gòu)建及藥物篩選方法參考文獻(xiàn)報道的標(biāo)準(zhǔn)方法，簡述為：取昆明小鼠40只，抽簽法分為模型組(n＝35)和空白對照組(n＝5)。均以高脂高糖飼料飼喂，飼喂量為：小鼠自由取食，一天6g左右，不限飲水。高脂高糖飼料的組分及質(zhì)量配比如下：豬油18％，蔗糖20％，雞蛋黃3％以及實驗小鼠日常維持型飼料59％。8周喂養(yǎng)后，對各組小鼠禁食12小時，給藥，后尾靜脈取血，測量其空腹血糖。
藥物篩選及測定方法同上，給藥方式為：
(1)空白對照組(簡稱空白組)：與其他組等體積的生理鹽水(20mL/kg)。
(2)C組：對6個模型組小鼠給予C1～C6(50μmol/kg灌胃給藥)。
(3)陽性組：對第7個模型組小鼠給予二甲雙胍(50μmol/kg灌胃給藥)。
表2.C1～C6對肥胖型糖尿病小鼠的降糖實驗結(jié)果
測試結(jié)果及數(shù)據(jù)分析(結(jié)果見表2)
(1)相較于空白組(21.1，43.9，34.2，28.0，25.4)，C組和陽性組均可不同程度的降低血糖，2h內(nèi)，C4和C5的降糖效果最好；
(2)與陽性組相比，上述實例所制備化合物的降糖能力低于或接近二甲雙胍，其中C4(3-乙酰基-咖啡酸-賴氨酸芐酯)和C5(3-(3,5-二(3-甲基丁-2-烯)苯基)丙烯酸-賴氨酸)的降糖能力與二甲雙胍非常接近，同時對原有的高血糖現(xiàn)象有一定的緩解作用。
(四)藥物對預(yù)防肥胖型糖尿病作用
模型構(gòu)建方法和藥物篩選方法同本發(fā)明中的(三)，不同的是給藥方式，且只測定初始空腹血糖值，血糖測定方法同上；總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)的測定采用全自動生化分析儀(德國Siemens ADVIA2400)；同時透射電鏡(美國FEI Tecnai G2F20S-TWIN)觀察肝臟的組織形態(tài)學(xué)變化，并記錄相應(yīng)的體重。具體如下：
(1)高糖高脂對照組(簡稱高組)：高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周，期間與其他組等體積的生理鹽水(20mL/kg)。
(2)模型動物實驗組(以C4和C5為例)：
C4組：高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周，同時C4(20μmol/kg灌胃)給藥8周。
C5組：高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周，同時C5(20μmol/kg灌胃)給藥8周。
(3)陽性組：高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周，二甲雙胍(20μmol/kg灌胃)給藥8周。
表3.C4和C5對肥胖型糖尿病的預(yù)防及降脂實驗結(jié)果
測試結(jié)果及數(shù)據(jù)分析(結(jié)果見表3)
(1)化合物C4(3-乙?；?咖啡酸-賴氨酸芐酯)和C5(3-(3,5-二(3-甲基丁-2-烯)苯基)丙烯酸-賴氨酸)具有非常顯著的控制體重，并有預(yù)防糖尿病的性質(zhì)，每日20μmol/kg灌胃給藥8周后，其血糖值相較高組有大幅的降低，基本接近正常血糖值；相同劑量下，其預(yù)防糖尿病的能力大于二甲雙胍。
(2)化合物C4和C5在降低血糖的同時，能夠有效降低TC、TG和LDL，并可以使HDL的水平正?；?。
(3)肝臟組織形態(tài)學(xué)顯示：參見圖1，高組的肝臟組織中，細(xì)胞核皺縮明顯，脂肪粒明顯增多；而化合物C5在用藥保護8周后，細(xì)胞核無皺縮明顯，脂肪粒較少。能顯著降低脂肪肝。
總之，本發(fā)明所提供的咖啡酸-賴氨酸及其衍生物具有顯著的降糖作用，相較于臨床所用降糖藥物，其降糖能力略低于二甲雙胍，但不會引起血糖過低，2小時內(nèi)的降糖過程更加平穩(wěn)；化合物C4(3-乙?；?咖啡酸-賴氨酸芐酯)和C5(3-(3,5-二(3-甲基丁-2-烯)苯基)丙烯酸-賴氨酸)具有非常顯著的控制體重，并有預(yù)防糖尿病的性質(zhì)；此外能夠有效降低TC、TG和LDL，并可以使HDL的水平正常化，減小肝臟脂肪化的趨勢。因此，可作為預(yù)防和治療糖尿病藥物的先導(dǎo)化合物，尤其是對肥胖型糖尿病有較好的效果。此外，血糖和血脂持續(xù)和長期的升高，會引發(fā)一系列的糖尿病并發(fā)癥，如糖尿病腎病、眼病、足病、心血管并發(fā)癥、神經(jīng)病變等等，本發(fā)明提供的咖啡酸-賴氨酸及其衍生物，亦可作為早期輔助治療的藥物之一。