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檢測支原體的引物組、試劑盒及檢測支原體污染的方法與流程

文檔序號:12457531閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于檢測支原體的引物組,其包括:

正向引物,其序列如SEQ ID No.1所示;以及

反向引物,其序列如SEQ ID No.2所示。

2.一種用于檢測支原體的試劑盒,其包括如權(quán)利要求1所述的用于檢測支原體的引物組。

3.如權(quán)利要求2所述的試劑盒,其特征在于:

所述試劑盒還包括:

支原體裂解緩沖液;

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試劑;以及

陽性對照。

4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于:

所述陽性對照為包含支原體16S rDNA保守序列的陽性質(zhì)粒。

5.如權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于:

所述試劑盒還包括陰性對照。

6.如權(quán)利要求2至4中任意一項所述的試劑盒用于檢測支原體污染的用途。

7.如權(quán)利要求6所述用途,其特征在于:所述試劑盒用于檢測以下支原體中的任意一種或幾種:M.fermentans、M.hyorhinis、M.arginini、M.orale、M.salivarium、M.hominis、M.pulmonis、M.arthritidis、M.bovis、M.pneumoniae、M.pirum、M.capricolum、Acholeplasma或Spiroplasma。

8.一種采用如權(quán)利要求2至4中任意一項所述的試劑盒檢測支原體污染的方法,該方法包括以下步驟:

步驟1)支原體裂解:采用所述試劑盒中的支原體裂解緩沖液處理待檢測樣品獲得裂解液;

步驟2)PCR擴增:將步驟1)所獲得的裂解液與所述聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試劑和所述引物組混合,進行PCR擴增反應(yīng);

步驟3)電泳:將步驟2)所得的PCR擴增產(chǎn)物上電泳,根據(jù)電泳條帶結(jié)果判斷是否存在支原體污染。

9.如權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于:

所述步驟2)的PCR擴增的條件如下:

首先進行步驟a:94℃,10分鐘;隨后,

步驟b:94℃,30秒;

步驟c:60℃,30秒;

步驟d:72℃,30秒;

上述步驟b至步驟d共30個循環(huán);

最后進行步驟e:72℃,10分鐘。

10.如權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于:

所述步驟1)包括:對待檢測的樣品進行去除細胞碎片的處理,之后離心以沉淀支原體,該支原體沉淀物重新混懸于所述支原體裂解緩沖液中,并在90~95℃下加熱3~5分鐘。

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