專利名稱：聯(lián)合型支原體檢測(cè)試劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種因支原體引起的泌尿生殖道疾病的檢測(cè)試劑及其制備方法。
支原體是性傳播性泌尿生殖道疾病的常見病原體。檢出率占性病人群的40～70％，支原體感染可導(dǎo)致尿生殖道炎、前列腺炎、盆腔炎、男性不育、女性不孕、絨毛膜炎和低出生體重兒等疾病。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)支原體實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)的研究較多，如特異性抗體檢測(cè)技術(shù)、代謝抑制試驗(yàn)、Southern Blot、PCR法、培養(yǎng)法等(Taylor-Robinson D.Clin Lab Sci，1989；9(30)501-523.和Jensen JS et al.J ClinMicrobiol，1991；29(1)46-50)?？贵w檢測(cè)技術(shù)易出現(xiàn)交叉反應(yīng)。代謝抑制試驗(yàn)，需加特異性抗體抑制支原體的生長(zhǎng)，臨床應(yīng)用不多。SouthernBlot實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求較高，不易普遍開展。PCR法容易出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性，已被國(guó)家衛(wèi)生部下令禁止應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)。而培養(yǎng)法是根據(jù)支原體的生活習(xí)性而采用的特異性選擇性培養(yǎng)基檢測(cè)支原體的方法，目前各醫(yī)院常用的培養(yǎng)基多為單一支原體培養(yǎng)基，如單一的解脲性支原體培養(yǎng)基、單一的人型支原體培養(yǎng)基。單一的支原體培養(yǎng)基國(guó)內(nèi)已有人申報(bào)了專利(申請(qǐng)?zhí)?6117201.0發(fā)明人王荷英)。解脲型支原體國(guó)內(nèi)有一家單位申請(qǐng)到了批號(hào)(上海金橋公司)。但是聯(lián)合型支原體培養(yǎng)基未見有人申報(bào)專利，國(guó)內(nèi)外迄今也未見有批號(hào)問世。
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提出了能在一種試劑中同時(shí)檢出幾種支原體的試劑及制備方法，達(dá)到了降低成本、防止漏檢、節(jié)約患者開支和減少檢測(cè)工作量等目的，為支原體病的及時(shí)有效治療提供了保證。
聯(lián)合型支原體檢測(cè)試劑是一種液體培養(yǎng)基，其制備方法如下1、培養(yǎng)基新鮮牛肉浸出液及豬胃或肺消化液的提取(1)、牛肉浸出液的提取新鮮牛肉1～2斤絞碎后，加500～1000ml蒸餾水浸泡10～25小時(shí)，煮沸過濾取其濾液。
(2)、豬胃或肺消化液的提取取新鮮豬胃或肺1～2斤，絞碎，加500～1000ml蒸餾水、0.3～2克蛋白酶，消化10～25小時(shí)，煮沸過濾，取其濾液。
2、基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制按下列比例將下列物質(zhì)混合牛肉浸出液 300～600ml豬胃或肺消化液 100～400ml氯化鈉 3～5克磷酸二氫鉀 1～3克蛋白胨 5～20克待固體化學(xué)物質(zhì)完全溶解后，煮沸后過濾備用。
3、完全培養(yǎng)基的配制按下列比例將下列物質(zhì)混合基礎(chǔ)培養(yǎng)基 500～900ml新鮮小牛血清 100～500ml新鮮酵母液 50～150ml(5～15％)
脲素 0.5～2克精氨酸3～15克酚紅 50～150毫克青霉素50～150萬單位完全培養(yǎng)基配制完成后，即為聯(lián)合型支原體檢測(cè)試劑。該試劑既有利于解脲型支原體生長(zhǎng)，又有利于人型支原體生長(zhǎng)。并含有為解脲型支原體分解利用為能源的尿素和為人型支原體分解為能量的精氨酸，尿素和精氨酸被分解后釋放出NH4+，使試劑pH值升高，最終使培養(yǎng)基中的酚紅指示劑從黃色變成紅色。
本發(fā)明能高效地同時(shí)檢出人型支原體和解脲型支原體，與單一支原體檢測(cè)試劑比較，其特點(diǎn)是性能穩(wěn)定，判斷標(biāo)準(zhǔn)直觀，特異性強(qiáng)，檢出率高，不需特殊設(shè)備，24小時(shí)即可報(bào)結(jié)果。本試劑已在6家綜合性醫(yī)院試用，觀察了5000多例病例，效果很好。為支原體感染病的及時(shí)有效治療提供了保證。
權(quán)利要求
1.聯(lián)合型支原體檢測(cè)試劑，其特征在于，由下述物質(zhì)按比例混合而成基礎(chǔ)培養(yǎng)基 500～900ml新鮮小牛血清 100～500ml新鮮酵母液 50～150ml(5～15％)脲素 0.5～2克精氨酸 3～15克酚紅 50～150毫克青霉素 50～150萬單位
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聯(lián)合型支原體檢測(cè)試劑，其特征在于，所說的基礎(chǔ)培養(yǎng)基由下述物質(zhì)按比例混合而成牛肉浸出液 300～600ml豬胃或肺消化液 100～400ml氯化鈉 3～5克磷酸二氫鉀 1～3克蛋白胨 5～20克
3.聯(lián)合型支原體檢測(cè)試劑的制備方法，其特征在于，將500～900ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基、100～500ml新鮮小牛血清、50～150ml(5～15％)新鮮酵母液、0.5～2克尿素、3～15克精氨酸50～150毫克酚紅與50～150萬單位青霉素按比例混合而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的聯(lián)合型支原體檢測(cè)試劑的制備方法，其特征在于，所說的基礎(chǔ)培養(yǎng)基由300～600ml牛肉浸出液、100～400ml豬胃或肺消化液、3～5克氯化鈉、1～3克磷酸二氫鉀與5～20克蛋白胨按比例混合而成。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的聯(lián)合型支原體檢測(cè)試劑的制備方法，其特征在于，所說的牛肉浸出液的制備方法是將新鮮牛肉絞碎后，按1～2斤牛肉比500～1000ml蒸餾水浸泡10～25小時(shí)，煮沸過濾取其濾液。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的聯(lián)合型支原體檢測(cè)試劑的制備方法，其特征在于，所說的豬胃或肺消化液的制備方法是將新鮮豬胃或肺絞碎后，按1～2斤豬胃或肺加500～1000ml蒸餾水和0.3～2克蛋白酶的比例，消化10～25小時(shí)，煮沸過濾，取其濾液。
全文摘要
一種聯(lián)合型支原體檢測(cè)試劑及制備方法,由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、新鮮小牛血清、新鮮酵母液、脲素、精氨酸、酚紅與青霉素按一定比例混合而成,該試劑既有利于解脲型支原體生長(zhǎng),又有利于人型支原體生長(zhǎng),并含有為解脲型支原體分解利用為能源的尿素和為人型支原體分解為能量的精氨酸,本發(fā)明性能穩(wěn)定,判斷標(biāo)準(zhǔn)直觀,特異性強(qiáng),檢出率高,不需特殊設(shè)備,24小時(shí)即可報(bào)結(jié)果。為支原體感染病的及時(shí)有效治療提供了保證。
文檔編號(hào)C12N1/20GK1270227SQ00113758
公開日2000年10月18日 申請(qǐng)日期2000年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月15日
發(fā)明者黃威權(quán), 姚兵 申請(qǐng)人:黃威權(quán), 姚兵