專利名稱：一種檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置及其方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明申請(qǐng)涉及一種檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置及其方法，屬于臨床免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
支原體肺炎的病理改變以間質(zhì)性肺炎為主，有時(shí)并發(fā)支氣管肺炎，稱為原發(fā)性非典型性肺炎。主要經(jīng)飛沫傳播，潛伏期2 3周，發(fā)病率以青少年最高。臨床癥狀較輕，甚至根本無癥狀，若有也只表現(xiàn)為頭痛、咽痛、發(fā)熱、咳嗽等一般的呼吸道癥狀，但也有個(gè)別死亡報(bào)道。一年四季均可發(fā)生，但多在秋冬時(shí)節(jié)?，F(xiàn)在已有大量臨床資料表明，肺炎支原體感染不僅引起呼吸道感染性疾病，而且引起許多肺外并發(fā)癥，常累及心、肝、腎、中樞神經(jīng)、皮膚、血液等系統(tǒng)。皮膚損害可表現(xiàn)為斑丘疹、結(jié)節(jié)性紅斑、水皰疹等；血液系統(tǒng)損害較常見溶血性貧血；中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害可見多發(fā)性神經(jīng)根炎、腦膜腦炎及小腦損傷等；心血管系統(tǒng)病變偶有心肌炎及心包炎。肺炎支原體(Mycoplasma pneumonia, MP)系人類支原體肺炎的病原體,是能在無細(xì)胞培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的最小微生物之一，平均直徑125nm 150nm，無細(xì)胞壁，能在含有血清蛋白和留醇的瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，2 3周后菌落呈煎蛋狀，中間較厚，周圍低平。支原體主要經(jīng)口、鼻的分泌物在空氣中傳播，引起散發(fā)性呼吸道感染或者小流行。肺炎支原體抗體測(cè)定是臨床感染較為可靠的指標(biāo)之一，且特異性強(qiáng)、靈敏度高。MPIgM 一般在感染后7 9天左右開始升高，3 4周達(dá)高峰，持續(xù)4 6個(gè)月。因此肺炎支原體抗體IgM陽性提示感染急性期，是早期診斷的特異性指標(biāo)。MP IgG出現(xiàn)稍晚，持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，特異性更強(qiáng)。其原因可能是抗原侵入機(jī)體后，免疫系統(tǒng)首先產(chǎn)生IgM抗體，而后出現(xiàn)類型轉(zhuǎn)換而產(chǎn)生IgG。據(jù)報(bào)道，感染后恢復(fù)期，MP IgG抗體滴度明顯上升。IgG、IgM同時(shí)陽性表示已過感染早期，最初出現(xiàn)的IgM尚未消失，IgG已出現(xiàn)，抗體處于較高水平，有診斷意義。臨床檢測(cè)肺炎支原體抗體的常見方法包括金標(biāo)法、間接凝集反應(yīng)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法，但這些方法都存在著不足之處。一、金標(biāo)法金標(biāo)法是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性，膠體金已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。該方法快速、敏感性高，但其特異性差，假陽性率較高，且只能做定性檢測(cè)，不能定量。二、間接凝集反應(yīng)將可溶性抗原(或抗體)先吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體的表面，然后與相應(yīng)抗體(或抗原)作用，在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象，稱間接凝集反應(yīng)或被動(dòng)凝集反應(yīng)。該方法具有快速、敏感、操作簡(jiǎn)便、無需特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)備等特點(diǎn)，能用于抗原或抗體的測(cè)定。但其特異性差，敏感度較低，且只能做定性檢測(cè)，不能定量。三、酶聯(lián)免疫吸附法酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)被廣泛應(yīng)用于檢測(cè)抗肺炎支原體抗體，但該方法也存在著下述的不足之處:(I)使用12X8型、6X8型、8X12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應(yīng)容器，在使用時(shí)只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進(jìn)行獨(dú)立的、單人份的檢測(cè)；(2)定量測(cè)定所用的試劑種類較多，每一種檢測(cè)試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時(shí)都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，力口注試劑的操作也極為繁瑣；(3)缺少對(duì)檢測(cè)信息的相應(yīng)標(biāo)注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標(biāo)識(shí)才能了解或知悉檢測(cè)試劑的生產(chǎn)批號(hào)及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測(cè)過程中不受控，具有很大的隨意性；(4)檢測(cè)試劑在檢測(cè)過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；(5)檢測(cè)過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不是很精確，操作過程極為繁瑣和復(fù)雜，容易發(fā)生操作差錯(cuò)，檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度較差；(6)在檢測(cè)項(xiàng)目成套試劑的數(shù)量配置及使用上均為項(xiàng)目數(shù)X48/96人份，如果需要檢測(cè)10個(gè)項(xiàng)目，則試劑的配置及使用數(shù)須為10X48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測(cè)10個(gè)不同的項(xiàng)目，也需要配置10X48/96人份的試劑，存在著不夠經(jīng)濟(jì)合理的缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明專利申請(qǐng)即是針對(duì)目前對(duì)于肺炎支原體抗體的檢測(cè)中存在的上述不足之處，提供一種能夠進(jìn)行獨(dú)立單人份檢測(cè)的試劑裝置及其檢測(cè)方法。本發(fā)明專利申請(qǐng)基于酶聯(lián)免疫檢測(cè)的原理來實(shí)現(xiàn)肺炎支原體抗體的檢測(cè)，是一種獨(dú)立的、單人份的、一次性的檢驗(yàn)方法；進(jìn)一步的，本發(fā)明申請(qǐng)還提供了與該方法配套的相應(yīng)的試劑裝置，該試劑裝置將肺炎支原體抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)所需要的多種試劑盛裝在一個(gè)獨(dú)立的、多孔結(jié)構(gòu)的試劑裝置內(nèi)，通過分步加注移棄完成檢測(cè)步驟；進(jìn)一步的，所述的試劑裝置還可以通過專用的免疫分析儀進(jìn)行相應(yīng)的全自動(dòng)檢測(cè)。本發(fā)明申請(qǐng)的目的之一是提供一種檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置，該目的是通過下述的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:具體來說，本發(fā)明申請(qǐng)所述的檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置為長(zhǎng)條狀，包括具有八個(gè)孔位的基體和位于基體一端的手柄，八個(gè)孔位的排列順序從近手柄端開始依次為樣本孔、輔劑孔、酶結(jié)合物孔、底物孔、終止液孔、稀釋液孔、反應(yīng)孔和稀釋孔，樣本孔內(nèi)盛有待測(cè)樣本，輔劑孔供檢測(cè)有需要時(shí)加入輔助試劑使用，酶結(jié)合物孔內(nèi)盛有酶結(jié)合物溶液，底物孔內(nèi)盛有底物溶液，終止液孔內(nèi)盛有終止液，稀釋液孔內(nèi)盛有稀釋液，反應(yīng)孔為平底且具有高的光通透性，孔內(nèi)包被有肺炎支原體抗原，并作為反應(yīng)容器加注待測(cè)的液體樣本和檢測(cè)試劑及洗滌液，反應(yīng)終止后進(jìn)行吸光度測(cè)定，稀釋孔作為樣本稀釋容器，供稀釋樣本時(shí)用。進(jìn)一步的，所述的試劑裝置中，當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgG時(shí)，輔劑孔不加入任何試劑，當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgM時(shí)，吸附劑加入輔劑孔內(nèi)或與稀釋液一起加入稀釋液孔中。進(jìn)一步的，所述的試劑裝置中，輔劑孔、酶結(jié)合物孔、底物孔、終止液孔和稀釋液孔上覆蓋有密封薄膜，該密封薄膜主要起到在運(yùn)輸和移動(dòng)的過程中防止液體溢出的作用，另夕卜，也起到防塵防污染及增強(qiáng)穩(wěn)定性的作用。進(jìn)一步的，所述的手柄上粘貼有條形碼，該條形碼標(biāo)識(shí)有肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑及分析裝置的相關(guān)信息。更進(jìn)一步的，所述的信息包括檢測(cè)項(xiàng)目代碼、檢測(cè)試劑生產(chǎn)批號(hào)、試劑有效期、定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)/定性校正系數(shù)、酶聯(lián)免疫反應(yīng)類型、試劑及分析裝置的序列號(hào)等。進(jìn)一步的，所述試劑裝置還包括若干個(gè)支撐柱，所述的支撐柱位于所述試劑裝置基體的下面，相鄰支撐柱之間間隔有一個(gè)以上的孔位，支撐柱的作用是為了加強(qiáng)基體的機(jī)械強(qiáng)度及平衡性。進(jìn)一步的，所述試劑裝置中反應(yīng)孔由外孔和內(nèi)孔構(gòu)成，外孔的底部開有底孔，內(nèi)孔穿過底孔且與底孔緊配合，外孔和內(nèi)孔之間留有防溢腔，防溢腔的作用是在反應(yīng)過程中，如果液體溢出，可以留在腔內(nèi)，防止污染儀器和其他試劑裝置。更進(jìn)一步的，所述試劑裝置中反應(yīng)孔的內(nèi)孔包被的肺炎支原體抗原包括純化且滅活的肺炎支原體或重組的肺炎支原體。更進(jìn)一步的，所述的重組的肺炎支原體包括但不限于肺炎支原體Pl重組蛋白。應(yīng)該明確的是，本發(fā)明申請(qǐng)中，所述試劑裝置中各孔位的大小、形狀并不加以限制，例如各孔位的開放口緣可為方形或圓形，其剖面的形狀也可以是方形、“U”型、或“V”型，但對(duì)于反應(yīng)孔來說，為了獲得較好的光通透性，底部應(yīng)為平底。進(jìn)一步的，所述的樣本孔內(nèi)加入的樣本為待測(cè)血清或血漿，加入的量根據(jù)樣本孔的大小和檢測(cè)需要稀釋的倍數(shù)來確定。所述的輔劑孔是在必要的時(shí)候加入輔助試劑之用，例如吸附劑、中和劑、抑制劑、緩沖液等。如當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgM時(shí)，吸附劑加入輔劑孔內(nèi)或與稀釋液一起加入稀釋液孔中，其主要成份為抗人IgG抗體或人葡萄球菌蛋白A(SPA)，以去除檢測(cè)過程中特異性IgG及類風(fēng)濕因子等其他物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。所述的酶結(jié)合物孔內(nèi)加入酶結(jié)合物溶液，主要成份為辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG或IgM抗體,堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgG或IgM抗體,葡萄糖氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG或IgM抗體,或β -半乳糖苷酶標(biāo)記的抗人IgG或IgM抗體。所述的底物孔中加入的底物溶液主要成份為TMB、OPD或ABTS。TMB作為一種新型安全的色原試劑，已逐步取代強(qiáng)致癌物聯(lián)苯胺和其他致癌性的聯(lián)苯胺衍生物，應(yīng)用于臨床化驗(yàn)、法醫(yī)檢驗(yàn)、刑事偵破及環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域，尤其是在臨床生化檢驗(yàn)方面，TMB作為過氧化物酶的新底物，在酶免疫分析法(EIA)和酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)法(ELISA)中獲得了廣泛的應(yīng)用。所述的終止液孔中加入的終止液主要成份為濃度為0.1 0.5Μ的硫酸或鹽酸溶液。所述的稀釋液孔中加入的稀釋液主要成份為磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、硼酸鹽緩沖液或碳酸鹽緩沖液，并含一定濃度的牛血清白蛋白、疊氮化鈉等組份，用于排除樣本中小分子物質(zhì)的非特異性干擾及增加樣本穩(wěn)定性。本發(fā)明申請(qǐng)的另一個(gè)目的是提供利用上述試劑裝置進(jìn)行肺炎支原體抗體的檢測(cè)方法，所述的方法包括如下的步驟:I)在所述的樣本孔中加入未稀釋的樣本；2)從稀釋液孔中吸取稀釋液加入稀釋孔中；3)移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取部分液體回稀釋液孔；4)從樣本孔中吸取樣本加入稀釋液孔中，將樣本進(jìn)行稀釋；5)從稀釋液孔中吸取液體加入稀釋孔中，將樣本進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋；6)當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgM且輔劑孔內(nèi)加入吸附劑時(shí)，從輔劑孔吸取液體加入反應(yīng)孔中，其他情況則不需要此步驟；7)從稀釋孔中吸取液體加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，孵育30 60min ；8)用洗滌液對(duì)反應(yīng)孔進(jìn)行3 5次洗滌后移除液體；9)從酶結(jié)合物孔中吸取酶結(jié)合物溶液加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，反應(yīng)30 60min后移除液體；10)重復(fù)步驟8)；11)從底物孔中吸取底物溶液加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，反應(yīng)10 20min ；12)從終止液孔中吸取終止液加入反應(yīng)孔中，I IOmin內(nèi)于450nm讀取OD值，或選擇雙波長(zhǎng)法測(cè)定，波長(zhǎng)范圍在620nm 690nm。進(jìn)一步的，所述的方法包括如下的步驟:I)在所述的樣本孔中加入未稀釋的樣本，體積至少為樣本孔容量的1/4 ；2)從稀釋液孔中吸取稀釋液加入稀釋孔中，吸取的量為孔內(nèi)液體總量的7/10以上；3)移除稀釋液孔中的剩余液體，根據(jù)預(yù)期稀釋倍數(shù)從稀釋孔中吸取部分液體回稀釋液孔；4)從樣本孔中吸取樣本加入稀釋液孔中，將樣本進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù)為I 10倍;5)從稀釋液孔中吸取液體加入稀釋孔中，將樣本進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋，稀釋倍數(shù)為I 100倍；6)當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgM且輔劑孔內(nèi)加入吸附劑時(shí)，從輔劑孔吸取液體加入反應(yīng)孔中，其他情況則不需要此步驟；7)從稀釋孔中吸取液體加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，孵育30 60min ；8)用洗滌液對(duì)反應(yīng)孔進(jìn)行3 5次洗滌后移除液體；9)從酶結(jié)合物孔中吸取酶結(jié)合物溶液加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，反應(yīng)30 60min后移除液體；10)重復(fù)步驟8)；11)從底物孔中吸取底物溶液加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，反應(yīng)10 20min ；12)從終止液孔中吸取終止液加入反應(yīng)孔中，I IOmin內(nèi)于450nm讀取OD值，或選擇雙波長(zhǎng)法測(cè)定，波長(zhǎng)范圍在620nm 690nm。更進(jìn)一步的，所述的方法包括如下的步驟:I)在所述的樣本孔中加入樣本80 150 μ L ;2)用精密加液器從稀釋液孔中吸取360 μ L液體到稀釋孔中；3)移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取180 μ L液體回稀釋液孔；4)用精密加液器從樣本孔中吸取20 μ L液體到稀釋液孔中，樣本10倍稀釋；5)用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體20 μ L到稀釋孔中，樣本100倍稀釋；6)當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgM且輔劑孔內(nèi)加入吸附劑時(shí)，用精密加液器從輔劑孔吸取液體30 μ L加入反應(yīng)孔中，其他情況則不需要此步驟；7)用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體IOOyL到反應(yīng)孔中，25 37°C下，孵育60min后移除液體；8)用洗滌液對(duì)反應(yīng)孔進(jìn)行3 5次洗滌后移除液體；9)用精密加液器從酶結(jié)合物孔中吸取100 μ L辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體酶結(jié)合物溶液至反應(yīng)孔進(jìn)行反應(yīng)，25 37°C下，反應(yīng)30min后移除液體；10)重復(fù)步驟8)；11)用精密加液器從底物孔中吸取100 μ L的TMB底物溶液至反應(yīng)孔中反應(yīng)10 15min ；12)用精密加液器從終止液孔中吸取100 μ L的終止液加注至反應(yīng)孔中，I IOmin內(nèi)于450nm和630nm雙波長(zhǎng)條件下進(jìn)行檢測(cè)，讀取OD值。所述的洗滌液包括PBST溶液，PBST溶液是指PBS溶液加上Tween-20，PBS溶液是指磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffer Solution),滲透壓近似于生理?xiàng)l件,又有很強(qiáng)的pH緩沖能力，常用來洗細(xì)胞和作為細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)液，而Tween-20為一種非離子表面活性劑，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)可產(chǎn)生影響，Tween-20有復(fù)性抗原的作用，可提高特異性的識(shí)別能力。本發(fā)明申請(qǐng)所述測(cè)定肺炎支原體抗體的試劑裝置及其方法，不但具有其他檢測(cè)方法所具有的特異性強(qiáng)、靈敏度高，準(zhǔn)確性好、成本較低、使用要求不高、操作較為簡(jiǎn)便、獲得檢測(cè)結(jié)果時(shí)間短、應(yīng)用廣泛等的優(yōu)點(diǎn)，而且解決了其他檢測(cè)方法的諸多不足，具體體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.所述的檢測(cè)方法運(yùn)用酶聯(lián)免疫分析原理，利用特定的分析儀器，采用配套專用的檢測(cè)試劑盒及分析試劑裝置，自動(dòng)實(shí)現(xiàn)肺炎支原體抗體定量測(cè)定，是一種全新的、適用的、實(shí)用的、高效的、快速的檢測(cè)肺炎支原體抗體的方案；2.它是一種獨(dú)立的、單人份的檢測(cè)試劑及分析裝置，無需像通用ELISA法那樣使用12X8型、6X8型、8X 12型或整板型96孔專用酶聯(lián)免疫微孔板作為抗原包被用品和反應(yīng)容器，在使用時(shí)只要有一份樣本即可進(jìn)行對(duì)應(yīng)項(xiàng)目的檢測(cè)而無試劑的浪費(fèi)，如果樣本的數(shù)量超過一份，按實(shí)際樣本數(shù)使用該試劑及分析裝置即可；3.它將每一檢測(cè)必需的試劑盛裝在一個(gè)分析試劑裝置的試劑孔位內(nèi)，而無須將檢測(cè)試劑分別用不同的試劑瓶來盛裝，不但操作極為簡(jiǎn)便，而且不容易造成操作差錯(cuò)，從而保證檢測(cè)結(jié)果的正確性；4.它對(duì)每一個(gè)分析試劑裝置都有一個(gè)專用條形碼，條形碼的數(shù)值包含檢測(cè)所對(duì)應(yīng)的檢測(cè)項(xiàng)目代碼、檢測(cè)試劑生產(chǎn)批號(hào)、試劑有效期、定量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)、具體的酶聯(lián)免疫反應(yīng)類型、試劑及分析裝置的序列號(hào)等信息，不能隨意被改變，使用時(shí)嚴(yán)格受控，尤其是在使用超過有效期檢測(cè)試劑時(shí)，將被識(shí)別并阻止發(fā)出檢測(cè)報(bào)告，從而可以確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性；5.它將每一檢測(cè)試劑進(jìn)行有效分隔和密封，不會(huì)引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測(cè)結(jié)果；6.它是一種專用于特定分析儀器的分析試劑裝置，在檢測(cè)過程中用全自動(dòng)的精密加液器來加注檢測(cè)試劑、洗滌液或樣本，操作自動(dòng)化，加量精確，檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密
度高；7.在檢測(cè)項(xiàng)目成套試劑的數(shù)量配置及使用上，一切按實(shí)際使用需要來進(jìn)行配備即可，尤其是在對(duì)多項(xiàng)目檢測(cè)上，配備更為適量，不會(huì)出現(xiàn)超配置及使用情況。


圖1是本發(fā)明申請(qǐng)所述試劑裝置的一個(gè)實(shí)施例的剖面結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是圖1所述實(shí)施例的平面俯視圖；圖3是本發(fā)明申請(qǐng)所述試劑裝置的另一個(gè)實(shí)施例的剖面結(jié)構(gòu)示意圖；圖4是本發(fā)明申請(qǐng)所述試劑裝置的再一個(gè)實(shí)施例中反應(yīng)孔的平面俯視圖；圖5和圖6是圖4所述試劑裝置中反應(yīng)孔中內(nèi)孔和外孔的裝配示意圖；其中，10為基體、20為手柄、30為條形碼、40為密封薄膜、50為支撐柱、11為樣本孔、12為輔劑孔、13為酶結(jié)合物孔、14為底物孔、15為終止液孔、16為稀釋液孔、17為反應(yīng)孔、18為稀釋孔、171為外孔、172為內(nèi)孔、173為防溢腔、174為底孔。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體的檢測(cè)裝置與實(shí)施步驟對(duì)本發(fā)明申請(qǐng)所述的試劑裝置和檢測(cè)方法進(jìn)行進(jìn)一步的描述，目的是為了公眾更好的理解本發(fā)明申請(qǐng)所述的技術(shù)方案，而不是對(duì)所述技術(shù)方案的限制。事實(shí)上，以相同或近似的原理，對(duì)所述試劑裝置進(jìn)行的改進(jìn)，包括其形狀、尺寸、所用材質(zhì)的改變，以及相應(yīng)結(jié)構(gòu)的增減或替換，都在本發(fā)明申請(qǐng)所要求保護(hù)的技術(shù)方案之內(nèi)。實(shí)施例一檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置一如圖1-2所示，本發(fā)明申請(qǐng)所述的檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置為長(zhǎng)條狀，包括具有八個(gè)孔位的基體10和位于基體10 —端的手柄20，八個(gè)孔位的排列順序從近手柄10端開始依次為樣本孔11、輔劑孔12、酶結(jié)合物孔13、底物孔14、終止液孔15、稀釋液孔16、反應(yīng)孔17和稀釋孔18，所述的樣本孔11內(nèi)盛有待測(cè)樣本，輔劑孔12供檢測(cè)需要時(shí)加入輔助試劑使用(如檢測(cè)IgM時(shí)輔劑孔內(nèi)加入吸附劑)，酶結(jié)合物孔13內(nèi)加入酶結(jié)合物溶液，底物孔14內(nèi)加入底物溶液，終止液孔15加入終止液，稀釋液孔16內(nèi)加入稀釋液，反應(yīng)孔17為平底并具有很高的光通透性，當(dāng)盛裝無色或空白試劑溶液時(shí)，對(duì)可見光或紫外光或熒光的吸光度值接近于零，孔內(nèi)已包被有肺炎支原體組成的抗原，并作為反應(yīng)容器加注待測(cè)的液體樣本和檢測(cè)試劑及洗滌液，反應(yīng)終止后進(jìn)行吸光度測(cè)定，稀釋孔18作為樣本稀釋容器，供稀釋樣本時(shí)用。進(jìn)一步的，所述的試劑裝置中，輔劑孔12、酶結(jié)合物孔13、底物孔14、終止液孔15和稀釋液孔16上覆蓋有密封薄膜40，該密封薄膜40主要起到在運(yùn)輸和移動(dòng)的過程中，防止液體溢出的作用，另外，也起到防塵防污染及增加穩(wěn)定性的作用。進(jìn)一步的，所述的手柄20上粘貼有條形碼30，該條形碼30標(biāo)識(shí)有肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑及分析裝置的信息，所述的信息包括檢測(cè)項(xiàng)目代碼、檢測(cè)試劑生產(chǎn)批號(hào)、試劑有效期、定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)/定性校正系數(shù)、酶聯(lián)免疫反應(yīng)類型、試劑及分析裝置的序列號(hào)。實(shí)施例二檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置二如圖3所示，本實(shí)施例中的檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置，其基本結(jié)構(gòu)與實(shí)施例一中的試劑裝置相同，在所述試劑裝置還包括若干個(gè)支撐柱50，所述的支撐柱50位于所述試劑裝置中基體10的下面，相鄰支撐柱50之間間隔有一個(gè)以上的孔位，支撐柱50的作用是為了加強(qiáng)基體的機(jī)械強(qiáng)度及平衡性。實(shí)施例三檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置三如圖4-6所示，為本發(fā)明申請(qǐng)所述檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置的優(yōu)選的實(shí)施例，其基本結(jié)構(gòu)與實(shí)施例一或?qū)嵤├嗤?，區(qū)別在于反應(yīng)孔17為可拆卸式的結(jié)構(gòu)，反應(yīng)孔17由外孔171和內(nèi)孔172構(gòu)成，外孔171的底部開有底孔174，內(nèi)孔172穿過底孔174且與底孔174緊配合，外孔171和內(nèi)孔172之間留有防溢腔173，防溢腔173的作用是在反應(yīng)過程中，如果液體溢出，可以留在腔內(nèi)，防止污染儀器和其他試劑裝置。進(jìn)一步的，所述內(nèi)孔和外孔的配合固定方式還可以是將內(nèi)孔的外壁設(shè)計(jì)為兩段，上段外壁的厚度大于下段外壁的厚度，外孔的底孔的直徑與內(nèi)孔下段的外徑相等，這樣將內(nèi)孔下段插入底孔中，內(nèi)孔的上段恰好卡在底孔之上，同樣可以起到緊固的效果。實(shí)施例四試劑裝置或試劑盒的制作-間接法檢測(cè)肺炎支原體抗體本發(fā)明是基于酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)上的一種更加簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、有效的一套方法，其采用的基本原理為間接酶聯(lián)免疫法:將由肺炎支原體抗原吸附于固相上，通過孵育使稀釋的人血清或血漿中的特異性抗體與抗原結(jié)合，洗滌去除未與固相結(jié)合的抗體，加入用辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人免疫球蛋白酶聯(lián)物，孵育，去除未結(jié)合的酶聯(lián)物，加入酶色原底物，產(chǎn)生的顏色與檢測(cè)樣本中的特異性抗體濃度成正比。這種方法主要是通過用于酶聯(lián)免疫檢測(cè)的分析試劑裝置和配套試劑來實(shí)現(xiàn)肺炎支原體抗體的免疫檢測(cè)。通過這種酶聯(lián)免疫方法，同時(shí)運(yùn)用特定分析儀器的分析試劑裝置和試劑，可快速，準(zhǔn)確的做出判斷用于輔助臨床診斷。以孔位11作為樣本孔，在使用時(shí)加入液體樣本，供檢測(cè)時(shí)取用；以孔位12作為輔劑孔，檢測(cè)有需要時(shí)加入輔助試劑(如檢測(cè)IgM時(shí)加入吸附劑)，用密封薄膜封口，供檢測(cè)取用；以孔位13作為酶結(jié)合物孔，加入酶結(jié)合物溶液用密封薄膜封口，供檢測(cè)時(shí)取用；以孔位14作為底物孔，加入TMB底物溶液后用密封薄膜封口，供檢測(cè)時(shí)用；以孔位15作為終止液孔，加入終止液后用密封薄膜封口，供檢測(cè)時(shí)用；以孔位16作為稀釋液孔，加入樣本稀釋液后用密封薄膜封口，供檢測(cè)時(shí)用；以孔位17作為包被物孔/反應(yīng)孔/比色孔，已包被有肺炎支原體抗原，并作為反應(yīng)容器加注待測(cè)的液體樣本和檢測(cè)試劑及洗滌液，反應(yīng)終止后進(jìn)行吸光度測(cè)定；以孔位18作為稀釋孔，供稀釋樣本時(shí)用；
在手柄20粘貼有肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑及分析裝置信息的條形碼30，該條形碼包括檢測(cè)項(xiàng)目代碼、檢測(cè)試劑生產(chǎn)批號(hào)、試劑有效期、定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)/定性校正系數(shù)、酶聯(lián)免疫反應(yīng)類型、試劑及分析裝置的序列號(hào)。按照上述方法制備若干分析裝置，另外制備相應(yīng)的校準(zhǔn)品和質(zhì)控物。這樣即構(gòu)成了完整的肺炎支原體抗體測(cè)定試劑盒組份。將檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置及配套使用組份裝入試劑盒的外包裝盒，即制成檢測(cè)肺炎支原體抗體試劑盒。實(shí)施例五肺炎支原體抗體IgG的檢測(cè)方法本發(fā)明申請(qǐng)?zhí)峁┮环N利用上述試劑裝置進(jìn)行肺炎支原體抗體IgG檢測(cè)的方法，所述的方法包括如下的步驟:1.在所述的樣本孔中加入樣本80 150 μ L ;2.用精密加液器從稀釋液孔中吸取360 μ L液體到稀釋孔中；3.移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取180 μ L液體回稀釋液孔；4.用精密加液器從樣本孔中吸取20 μ L液體到稀釋液孔中，樣本10倍稀釋；5.用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體20 μ L到稀釋孔中，樣本100倍稀釋；6.用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體100μ L到反應(yīng)孔中，25°C下，孵育60min后移除液體；7.用洗滌液對(duì)反應(yīng)孔進(jìn)行3 5次洗滌后移除液體；8.用精密加液器從酶結(jié)合物孔中吸取100 μ L辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG抗體酶結(jié)合物溶液至反應(yīng)孔進(jìn)行反應(yīng)，25°C下,反應(yīng)30min后移除液體；9.重復(fù)步驟7;10.用精密加液器從底物孔中吸取100 μ L的TMB底物溶液至反應(yīng)孔中反應(yīng)10 15min ；11.用精密加液器從終止液孔中吸取100 μ L的終止液加注至反應(yīng)孔中，I IOmin內(nèi)于450nm和630nm雙波長(zhǎng)條件下進(jìn)行檢測(cè)，讀取OD值。實(shí)施例六通過全自動(dòng)分析儀實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中肺炎支原體抗體IgG檢測(cè)的分析操作流程進(jìn)一步的，本發(fā)明申請(qǐng)所述的檢測(cè)方法還包括相應(yīng)配合使用的全自動(dòng)分析儀，該全自動(dòng)分析儀包括一個(gè)分析裝置托盤，它是與分析裝置的形狀相配套的，一共有30個(gè)位置可供分析裝置放置，用于檢測(cè)分析，此外還包括模塊式集成機(jī)械電子結(jié)構(gòu)及軟件控制系統(tǒng)，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的加注、稀釋、孵育、洗滌、讀數(shù)、分析過程。每個(gè)位置獨(dú)立定量分析，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。儀器運(yùn)行后，分析裝置托盤會(huì)自行轉(zhuǎn)動(dòng)到不同的位置進(jìn)行加注，稀釋，孵育，洗滌以及讀數(shù)的步驟。具體的操作包括如下的步驟:(I)檢查程序的準(zhǔn)備:按要求配置好相應(yīng)的溶液，包括洗滌緩沖液，清洗液或消毒液，配制完畢裝入相應(yīng)的液體瓶中；(2)與外接計(jì)算機(jī)相連:儀器和外接計(jì)算機(jī)相連，從而將儀器正常工作所得結(jié)果交由集中式系統(tǒng)處理；(3)開機(jī):打開儀器開關(guān)后，通過外接計(jì)算機(jī)的工作界面對(duì)儀器設(shè)置自動(dòng)或手動(dòng)自檢，從而為儀器的正常運(yùn)行做準(zhǔn)備；
(4)預(yù)熱:在開機(jī)后，儀器會(huì)啟動(dòng)加熱程序，將溫度調(diào)至待檢溫度；(5)沖洗檢查；(6)肺炎支原體抗體IgG的檢測(cè):I)從有密封口的一邊打開包裝袋，取用所需數(shù)量的分析試劑裝置，排除空氣后將袋口封緊；2)檢查分析試劑裝置TMB底物孔中的溶液，應(yīng)為無色澤改變，否則應(yīng)棄掉；3)分別在每個(gè)分析試劑裝置的樣本孔中加50 120 μ L未稀釋的樣本，建議加100 μ L的樣本，每更換一個(gè)批號(hào)的試劑，應(yīng)取其中一個(gè)分析試劑裝置及校準(zhǔn)品進(jìn)行儀器校準(zhǔn)；4)按照所需檢測(cè)的數(shù)量在分析裝置托盤中放入相對(duì)應(yīng)數(shù)量的分析試劑裝置，點(diǎn)擊“開始”、“掃描”，儀器可自動(dòng)地掃描分析試劑裝置條碼、質(zhì)控物條碼和校準(zhǔn)品條碼，然后對(duì)樣本進(jìn)行編號(hào)，或通過外部條碼掃描儀對(duì)樣本條碼進(jìn)行掃描；5)點(diǎn)擊“運(yùn)行”，儀器根據(jù)條碼信息自動(dòng)運(yùn)行，根據(jù)條碼，程序首先檢測(cè)校準(zhǔn)品，通過校準(zhǔn)，修正標(biāo)準(zhǔn)曲線；其次對(duì)質(zhì)控物進(jìn)行檢測(cè)，如果其檢測(cè)結(jié)果在標(biāo)示的范圍內(nèi)，則表示檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線符合要求，可用于樣本的檢測(cè)，最后開始樣本的檢測(cè)程序；6)稀釋:加注針刺破孔位密封薄膜自動(dòng)吸取稀釋液360 μ L到稀釋孔中，并移除稀釋液孔中的剩余液體，再?gòu)南♂尶字形∠♂屢?80μ L回稀釋液孔，加注針從樣本孔自動(dòng)吸取樣品20 μ L到稀釋液孔進(jìn)行樣本稀釋，再?gòu)南♂屢嚎字形?0 μ L到稀釋孔，動(dòng)作完成后，被稀釋的樣本被加注針移至反應(yīng)孔孵育30 60min，通常儀器設(shè)定為60min，之后移除液體；7)洗滌:沖洗針從相應(yīng)的液瓶中吸取一定量的洗滌緩沖液對(duì)試劑孔進(jìn)行三到五次洗滌后移除液體；8)加注針刺破酶結(jié)合物孔密封薄膜吸取IOOyL辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG抗體酶結(jié)合物溶液至反應(yīng)孔進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)30 60min后移除液體，通常儀器設(shè)定為30min ；9)重復(fù)步驟7);10)加注針刺破TMB底物孔密封薄膜吸取100 μ L的TMB底物至反應(yīng)孔反應(yīng)10 20min,通常儀器設(shè)定為IOmin ；11)加注針刺破終止液孔密封薄膜吸取100 μ L的終止液加注至反應(yīng)孔，在I IOmin內(nèi)于450nm/630nm雙波長(zhǎng)下讀取OD值。(7)檢測(cè)結(jié)果:當(dāng)檢測(cè)程序運(yùn)行完畢，可通過計(jì)算機(jī)上的數(shù)據(jù)處理軟件分析，最后生成報(bào)告單以便查閱；(8)關(guān)機(jī):檢測(cè)結(jié)束后，在儀器關(guān)機(jī)前，必須啟動(dòng)清洗循環(huán)，這樣可以避免來自溶液中的殘留鹽份在液路中結(jié)晶，避免損壞儀器或?qū)е聶z測(cè)結(jié)果無效，清洗完成后，儀器電源自動(dòng)關(guān)閉。實(shí)施例七患者樣本中肺炎支原體抗體IgG的檢測(cè)應(yīng)用、結(jié)果分析以及檢測(cè)的質(zhì)控采用實(shí)施例五的操作方法與程序，使用實(shí)施例四所述的試劑盒，可用于定量測(cè)定人血清或血漿中的肺炎支原體抗體IgG水平。檢測(cè)血清中特異性抗體可以反映病原體的感染情況。肺炎支原體抗體IgG出現(xiàn)可能較晚，持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，特異性更強(qiáng)?？筛鶕?jù)檢測(cè)的結(jié)果來輔助臨床診斷，初步判斷患者患病的情況，最終確診應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)或其他診斷方法/指標(biāo)進(jìn)行綜合考慮。以下為檢測(cè)結(jié)果的分析:(I)參考值(參考范圍)正常參考值:0 30AU/mL ;檢測(cè)一定數(shù)量(具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)的陰性樣本，結(jié)果的平均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差(即X+3SD)為參考值的上限。各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)實(shí)際情況建立適宜的參考范圍。(2)檢測(cè)結(jié)果的解釋若樣本值> 30AU/mL，提示抗體水平升高，但應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)或其他診斷方法/指標(biāo)進(jìn)行確診。為了方便臨床應(yīng)用，可參考如下判斷規(guī)則:樣本值< 24AU/mL陰性24AU/mL <樣本值< 36AU/mL 可疑樣本值> 36AU/mL陽性當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為可疑時(shí)，應(yīng)重新檢測(cè)，若仍為可疑，需在2 3周后重新采集樣本檢測(cè)。

以下是將實(shí)施例六的檢測(cè)過程重復(fù)檢測(cè)陽性和陰性質(zhì)控血清，檢查結(jié)果的再現(xiàn)性，獲得如下的結(jié)果:
/ _
陽性質(zhì)控物
編號(hào)檢測(cè)值結(jié)果 I編號(hào)I 檢測(cè)值結(jié)杲
147.3P649.9 — P
246.4P759.7 — P
355.9P850.5 — P
442.3P949.0 ' P
5I 54.5 I P I I 10 I 51.6P
測(cè)定結(jié)果均值為50.7AU/mL,CV%=9.9%。
陰性質(zhì)控物
18.9 NI I 6I 7.2N
29.0 N78.6— N
37.7 N87.4— N
48.2 N97.0— N
59.1 N108.0N
測(cè)定結(jié)果均值為8.1 AU/mL, CY%=9.5%實(shí)施例八肺炎支原體抗體IgM的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明申請(qǐng)?zhí)峁┮环N利用上述試劑裝置進(jìn)行肺炎支原體抗體檢測(cè)IgM的方法，所述的方法包括如下的步驟:1.在所述的樣本孔中加入樣本80 150 μ L ;2.用精密加液器從稀釋液孔中吸取370 μ L液體到稀釋孔中；3.移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取180 μ L液體回稀釋液孔；4.用精密加液器從樣本孔中吸取20 μ L液體到稀釋液孔中，樣本10倍稀釋；5.用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體20 μ L到稀釋孔中，樣本100倍稀釋；6.當(dāng)吸附劑加入輔劑孔內(nèi)時(shí)，用精密加液器從輔劑孔中吸取液體30 μ L到反應(yīng)孔中，當(dāng)吸附劑與稀釋液一起加入稀釋液孔內(nèi)時(shí)，則不需此步驟；7.用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體IOOyL到反應(yīng)孔中，25 37°C下，孵育60min后移除液體；8.用洗滌液對(duì)反應(yīng)孔進(jìn)行3 5次洗滌后移除液體；9.用精密加液器從酶結(jié)合物孔中吸取100 μ L辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgM抗體酶結(jié)合物溶液至反應(yīng)孔進(jìn)行反應(yīng)，25 37°C下，反應(yīng)30min后移除液體；10.重復(fù)步驟8;11.用精密加液器從底物孔中吸取100 μ L的TMB底物溶液至反應(yīng)孔中反應(yīng)10 15min ；12.用精密加液器從終止液孔中吸取100 μ L的終止液加注至反應(yīng)孔中，I IOmin內(nèi)于450nm和630nm雙波長(zhǎng)條件下進(jìn)行檢測(cè)，讀取OD值。實(shí)施例九通過全自動(dòng)分析儀實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中肺炎支原體抗體IgM檢測(cè)的分析操作流程進(jìn)一步的，本發(fā)明申請(qǐng)所述的檢測(cè)方法還包括相應(yīng)配合使用的全自動(dòng)分析儀，該全自動(dòng)分析儀包括一個(gè)分析裝置托盤，它是與分析裝置的形狀相配套的，一共有30個(gè)位置可供分析裝置放置，用于檢測(cè)分析，此外還包括模塊式集成機(jī)械電子結(jié)構(gòu)及軟件控制系統(tǒng)，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的加注、稀釋、孵育、洗滌、讀數(shù)、分析過程。每個(gè)位置獨(dú)立定性分析，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。儀器運(yùn)行后，分析裝置托盤會(huì)自行轉(zhuǎn)動(dòng)到不同的位置進(jìn)行加注，稀釋，孵育，洗滌以及讀數(shù)的步驟。具體的操作包括如下的步驟:(I)檢查程序的準(zhǔn)備:按要求配置好相應(yīng)的溶液，包括洗滌緩沖液，清洗液或消毒液，配制完畢裝入相應(yīng)的液體瓶中；(2)與外接計(jì)算機(jī)相連:儀器和外接計(jì)算機(jī)相連，從而將儀器正常工作所得結(jié)果交由集中式系統(tǒng)處理；(3)開機(jī):打開儀器開關(guān)后，通過外接計(jì)算機(jī)的工作界面對(duì)儀器設(shè)置自動(dòng)或手動(dòng)自檢，從而為儀器的正常運(yùn)行做準(zhǔn)備；(4)預(yù)熱:在開機(jī)后，儀器會(huì)啟動(dòng)加熱程序，將溫度調(diào)至待檢溫度；(5)沖洗檢查；(6)肺炎支原體抗體IgM的檢測(cè):I)從有密封口的一邊打開包裝袋，取用所需數(shù)量的分析試劑裝置，排除空氣后將袋口封緊；
2)檢查分析試劑裝置TMB底物孔中的溶液，應(yīng)為無色澤改變，否則應(yīng)棄掉；3)分別在每個(gè)分析試劑裝置的樣本孔中加50 120 μ L未稀釋的樣本，建議加100 μ L的樣本，每更換一個(gè)批號(hào)的試劑，應(yīng)取其中一個(gè)分析試劑裝置及校準(zhǔn)品進(jìn)行儀器校準(zhǔn)；4)按照所需檢測(cè)的數(shù)量在分析裝置托盤中放入相對(duì)應(yīng)數(shù)量的分析試劑裝置，點(diǎn)擊“開始”、“掃描”，儀器可自動(dòng)地掃描分析試劑裝置條碼、質(zhì)控物條碼和校準(zhǔn)品條碼，然后對(duì)樣本進(jìn)行編號(hào)，或通過外部條碼掃描儀對(duì)樣本條碼進(jìn)行掃描；5)點(diǎn)擊“運(yùn)行”，儀器根據(jù)條碼信息自動(dòng)運(yùn)行，根據(jù)條碼，程序首先檢測(cè)校準(zhǔn)品，通過單點(diǎn)校準(zhǔn)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；其次對(duì)質(zhì)控物進(jìn)行檢測(cè)，如果其檢測(cè)結(jié)果在標(biāo)示的范圍內(nèi)，則表示建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線曲線合格，可用于樣本的檢測(cè)，最后開始樣本的檢測(cè)程序；6)稀釋:加注針刺破孔位密封薄膜自動(dòng)吸取稀釋液370 μ L到稀釋孔中，并移除稀釋液孔中的剩余液體50 μ L，再?gòu)南♂尶字形∠♂屢?80 μ L回稀釋液孔，加注針從樣本孔自動(dòng)吸取樣品20 μ L到稀釋液孔進(jìn)行樣本稀釋，再?gòu)南♂屢嚎字形?0 μ L到稀釋孔，另外從輔助試劑孔中吸取30 μ L吸附劑到反應(yīng)孔中，動(dòng)作完成后，被稀釋的樣本被加注針移至反應(yīng)孔孵育30 60min,通常儀器設(shè)定為60min,之后移除液體；7)洗滌:沖洗針從相應(yīng)的液瓶中吸取一定量的洗滌緩沖液對(duì)試劑孔進(jìn)行三到五次洗滌后移除液體；8)加注針刺破酶結(jié)合物孔密封薄膜吸取IOOyL辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgM抗酶結(jié)合物溶液體至反應(yīng)孔進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)30 60min后移除液體，通常儀器設(shè)定為30min ；9)重復(fù)步驟7);10)加注針刺破TMB底物孔密封薄膜吸取100 μ L的TMB底物至反應(yīng)孔反應(yīng)10 20min,通常儀器設(shè)定為IOmin ；11)加注針刺破終止液孔密封薄膜吸取100 μ L的終止液加注至反應(yīng)孔，在I IOmin內(nèi)于450nm/630nm雙波長(zhǎng)下讀取OD值。(7)檢測(cè)結(jié)果:當(dāng)檢測(cè)程序運(yùn)行完畢，可通過計(jì)算機(jī)上的數(shù)據(jù)處理軟件分析，最后生成報(bào)告單以便查閱；(8)關(guān)機(jī):檢測(cè)結(jié)束后，在儀器關(guān)機(jī)前，必須啟動(dòng)清洗循環(huán)，這樣可以避免來自溶液中的殘留鹽份在液路中結(jié)晶，避免損壞儀器或?qū)е聶z測(cè)結(jié)果無效，清洗完成后，儀器電源自動(dòng)關(guān)閉。實(shí)施例十患者樣本中肺炎支原體抗體IgM的檢測(cè)應(yīng)用、結(jié)果分析以及檢測(cè)的質(zhì)控采用實(shí)施例八的操作方法與程序，使用實(shí)施例四所述的試劑盒，可用于定性檢測(cè)人血清或血漿中的肺炎支原體抗體IgM水平。檢測(cè)血清中特異性抗體可以反映病原體的感染情況。肺炎支原體抗體IgM出現(xiàn)較早，且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，其陽性提示感染急性期，是早期診斷的特異性指標(biāo)?？筛鶕?jù)檢測(cè)的結(jié)果來輔助臨床診斷，初步判斷患者患病的情況，最終確診應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)或其他診斷方法/指標(biāo)進(jìn)行綜合考慮。以下為檢測(cè)結(jié)果的分析:(I)參考值(參考范圍)
正常參考值:0 1.0。(2)檢測(cè)結(jié)果的解釋若樣本值> 1.0，提示抗體水平升高，但應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)或其他診斷方法/指標(biāo)進(jìn)行確診。為了方便臨床應(yīng)用，可參考如下判斷規(guī)則:樣本值<0.9陰性0.9≤ 樣本值≤ 1.1可疑樣本值> 1.1陽性當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為可疑時(shí)，應(yīng)重新檢測(cè)，若仍為可疑，需在2 3周后重新采集樣本檢測(cè)。以下是將實(shí)施例九的檢測(cè)過程重復(fù)檢測(cè)陽性和陰性質(zhì)控血清，檢查結(jié)果的再現(xiàn)性，獲得如下的結(jié)果:
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置，其特征在于:所述的試劑裝置為長(zhǎng)條狀，包括具有八個(gè)孔位的基體和位于基體一端的手柄，八個(gè)孔位的排列順序從近手柄端開始依次為樣本孔、輔劑孔、酶結(jié)合物孔、底物孔、終止液孔、稀釋液孔、反應(yīng)孔和稀釋孔，樣本孔內(nèi)盛有待測(cè)樣本，輔劑孔供檢測(cè)有需要時(shí)加入輔助試劑使用，酶結(jié)合物孔內(nèi)盛有酶結(jié)合物溶液，底物孔內(nèi)盛有底物溶液，終止液孔內(nèi)盛有終止液，稀釋液孔內(nèi)盛有稀釋液，反應(yīng)孔為平底且具有高的光通透性，孔內(nèi)包被有肺炎支原體抗原，并作為反應(yīng)容器加注待測(cè)的液體樣本和檢測(cè)試劑及洗滌液，反應(yīng)終止后進(jìn)行吸光度測(cè)定，稀釋孔作為樣本稀釋容器，供稀釋樣本時(shí)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑裝置，其特征在于:所述的試劑裝置中，當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgG時(shí)，輔劑孔內(nèi)不加入任何試劑，當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgM時(shí)，吸附劑加入輔劑孔內(nèi)或與稀釋液一起加入稀釋液孔中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑裝置，其特征在于:所述的試劑裝置中，輔劑孔、酶結(jié)合物孔、底物孔、終止液孔和稀釋液孔上覆蓋有密封薄膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑裝置，其特征在于:所述的手柄上粘貼有條形碼，該條形碼標(biāo)識(shí)有肺炎支 原體抗體檢測(cè)試劑及分析裝置的相關(guān)信息。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑裝置，其特征在于:所述試劑裝置還包括若干個(gè)支撐柱，所述的支撐柱位于所述試劑裝置中基體的下面，相鄰支撐柱之間間隔有一個(gè)以上的孔位。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑裝置，其特征在于:所述試劑裝置中反應(yīng)孔由外孔和內(nèi)孔構(gòu)成，外孔的底部開有底孔，內(nèi)孔穿過底孔且與底孔緊配合，外孔和內(nèi)孔之間留有防溢腔。
7.根據(jù)權(quán)利要求6任一項(xiàng)所述的試劑裝置，其特征在于:所述試劑裝置中反應(yīng)孔的內(nèi)孔包被的肺炎支原體抗原包括純化且滅活的肺炎支原體或重組的肺炎支原體。
8.利用權(quán)利要求1-7所述的試劑裝置進(jìn)行肺炎支原體抗體檢測(cè)的方法，其特征在于:所述的方法包括如下的步驟: 1)在所述的樣本孔中加入未稀釋的樣本； 2)從稀釋液孔中吸取稀釋液加入稀釋孔中； 3)移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取部分液體回稀釋液孔； 4)從樣本孔中吸取樣本加入稀釋液孔中,將樣本進(jìn)行稀釋； 5)從稀釋液孔中吸取液體加入稀釋孔中，將樣本進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋； 6)當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgM且輔劑孔內(nèi)加入吸附劑時(shí)，從輔劑孔吸取液體加入反應(yīng)孔中，其他情況則不需要此步驟； 7)從稀釋孔中吸取液體加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，孵育30 60min； 8)用洗滌液對(duì)反應(yīng)孔進(jìn)行3 5 次洗滌后移除液體； 9)從酶結(jié)合物孔中吸取酶結(jié)合物溶液加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，反應(yīng)30 60min后移除液體； 10)重復(fù)步驟8)； 11)從底物孔中吸取底物溶液加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，反應(yīng)10 20min； 12)從終止液孔中吸取終止液加入反應(yīng)孔中，I IOmin內(nèi)于450nm讀取OD值，或選擇雙波長(zhǎng)法測(cè)定，波長(zhǎng)范圍在620nm 690nm。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的肺炎支原體抗體檢測(cè)的方法，其特征在于:所述的方法包括如下的步驟: 1)在所述的樣本孔中加入未稀釋的樣本，體積至少為樣本孔容量的1/4； 2)從稀釋液孔中吸取稀釋液加入稀釋孔中，吸取的量為孔內(nèi)液體總量的7/10以上； 3)移除稀釋液孔中的剩余液體，根據(jù)預(yù)期稀釋倍數(shù)從稀釋孔中吸取部分液體回稀釋液孔； 4)從樣本孔中吸取樣本加入稀釋液孔中，將樣本進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù)為I 10倍； 5)從稀釋液孔中吸取液體加入稀釋孔中，將樣本進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋，稀釋倍數(shù)為I 100 倍； 6)當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgM且輔劑孔內(nèi)加入吸附劑時(shí)，從輔劑孔吸取液體加入反應(yīng)孔中，其他情況則不需要此步驟； 7)從稀釋孔中吸取液體加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，孵育30 60min； 8)用洗滌液對(duì)反應(yīng)孔進(jìn)行3 5次洗滌后移除液體； 9)從酶結(jié)合物孔中吸取酶結(jié)合物溶液加入反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，反應(yīng)30 60min后移除液體； 10)重復(fù)步驟8)；11)從底物孔中吸取底物溶液加入`反應(yīng)孔中，25 37°C的條件下，反應(yīng)10 20min； 12)從終止液孔中吸取終止液加入反應(yīng)孔中，I IOmin內(nèi)于450nm讀取OD值，或選擇雙波長(zhǎng)法測(cè)定，波長(zhǎng)范圍在620nm 690nm。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的肺炎支原體抗體檢測(cè)的方法，其特征在于:所述的方法包括如下的步驟: 1)在所述的樣本孔中加入樣本80 150μ L ; 2)用精密加液器從稀釋液孔中吸取360μ L液體到稀釋孔中； 3)移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取ISOyL液體回稀釋液孔； 4)用精密加液器從樣本孔中吸取20μ L液體到稀釋液孔中，樣本10倍稀釋； 5)用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體20yL到稀釋孔中，樣本100倍稀釋； 6)當(dāng)檢測(cè)肺炎支原體抗體IgM且輔劑孔內(nèi)加入吸附劑時(shí)，用精密加液器從輔劑孔吸取液體30 μ L加入反應(yīng)孔中，其他情況則不需要此步驟； 7)用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體100μ L到反應(yīng)孔中，25 37°C下，孵育60min后移除液體； 8)用洗滌液對(duì)反應(yīng)孔進(jìn)行3 5次洗滌后移除液體； 9)用精密加液器從酶結(jié)合物孔中吸取100μ L辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體酶結(jié)合物溶液至反應(yīng)孔進(jìn)行反應(yīng)，25 37°C下，反應(yīng)30min后移除液體； 10)重復(fù)步驟8)； 11)用精密加液器從底物孔中吸取IOOyL的TMB底物溶液至反應(yīng)孔中反應(yīng)10 15min ； 12)用精密加液器從終止液孔中吸取100μ L的終止液加注至反應(yīng)孔中，I IOmin內(nèi)于450nm和630nm雙波長(zhǎng)條件下進(jìn)行檢測(cè)，讀取OD值。
全文摘要
本發(fā)明申請(qǐng)公開一種檢測(cè)肺炎支原體抗體的試劑裝置及其方法，所述的試劑裝置為長(zhǎng)條狀，包括具有八個(gè)孔位的基體和位于基體一端的手柄，八個(gè)孔位的排列順序從近手柄端開始依次為樣本孔、輔劑孔、酶結(jié)合物孔、底物孔、終止液孔、稀釋液孔、反應(yīng)孔和稀釋孔。本發(fā)明申請(qǐng)基于酶聯(lián)免疫檢測(cè)的原理，利用上述的試劑裝置對(duì)肺炎支原體抗體進(jìn)行檢測(cè)，是一種獨(dú)立的、單人份的分析檢測(cè)方法，并且可以與相應(yīng)的特定分析儀器配合使用，在檢測(cè)過程中，用全自動(dòng)的精密加液器來加注檢測(cè)試劑或樣本，具有操作自動(dòng)化，加量精確，檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度高的優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)G01N33/543GK103185784SQ20111045395
公開日2013年7月3日 申請(qǐng)日期2011年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月30日
發(fā)明者胡德明, 劉清波, 何林, 陽輝 申請(qǐng)人:深圳市亞輝龍生物科技有限公司