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一種NK細(xì)胞培養(yǎng)基及NK細(xì)胞的培養(yǎng)方法與流程

文檔序號:11936655閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種NK細(xì)胞培養(yǎng)基,按重量份數(shù)計(jì),包括

無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基 94~98份

血漿 7~10份

抗CD3單克隆抗體 0.6~1.6份

類胰島素一號增長因子 2~4份

PBS緩沖液 20~30份

烏賊墨 1~4份

紅花多糖 2~6份

大蒜素 2.5~4.5份

苜蓿多糖 1~3份

桂皮醛 2~4份。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細(xì)胞培養(yǎng)基,按重量份數(shù)計(jì),包括

無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基 96份

血漿 8.5份

抗CD3單克隆抗體 1份

類胰島素一號增長因子 3份

PBS緩沖液 25份

烏賊墨 2.5份

紅花多糖 4

大蒜素 3.5

苜蓿多糖 2

桂皮醛 3份。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種NK細(xì)胞培養(yǎng)基,其特征在于:所述無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基為Lonza X-VIVO 15無血清細(xì)胞培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種NK細(xì)胞培養(yǎng)基,其特征在于:所述烏賊墨經(jīng)過黑色素代謝酶處理。

5.如權(quán)利要求1至4所述的任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的一種NK細(xì)胞的培養(yǎng)方法,包括以下步驟:

S1、采集健康人的外周血,并用稀釋液對外周血進(jìn)行稀釋,獲得稀釋血;

S2、向離心管一中加入Ficoll,沿傾斜的管壁緩慢加入稀釋血;

S3、將離心管一放入到18℃的恒溫室中進(jìn)行離心30min~45min;

S4、用吸管輕輕吸取S3的離心管一中的PBMC層移入到離心管二中;

S5、向離心管二中加入足量稀釋液進(jìn)行洗滌,并離心5min~7min后去除上清液,獲得潔凈的PBMC細(xì)胞;

S6、將PBMC細(xì)胞進(jìn)行磁珠分選,獲得 NK 細(xì)胞;

S7、將獲得的NK細(xì)胞轉(zhuǎn)移到上述NK細(xì)胞培養(yǎng)基中,并將NK細(xì)胞培養(yǎng)液放置在培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種NK細(xì)胞的培養(yǎng)方法,其特征在于:S1中外周血與稀釋液的體積比為1:2~3。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種NK細(xì)胞的培養(yǎng)方法,其特征在于:S2中的Ficol與稀釋血的體積比為1:2~4。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種NK細(xì)胞的培養(yǎng)方法,其特征在于:S3和S5的離心轉(zhuǎn)速為1500r/min~1800r/min。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種NK細(xì)胞的培養(yǎng)方法,其特征在于:S7中培養(yǎng)箱的溫度為2~8℃,且其二氧化碳的濃度為5~6%。

10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種NK細(xì)胞的培養(yǎng)方法,其特征在于:S7中NK細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間為13~15天。

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