本發(fā)明涉及藥物化學(xué)，具體涉及環(huán)己烷類化合物或其立體異構(gòu)體或鹽，尤其涉及如式IB和式I所示的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體或鹽及其制備與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：伴隨著社會(huì)的飛速發(fā)展，人們生活節(jié)奏和壓力日益增加，精神類疾病已經(jīng)成為一種嚴(yán)重影響人類健康的疾病，為患者及其家庭帶來(lái)了嚴(yán)重的后果。由于自殺、缺乏醫(yī)療照顧、較高的并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)(如營(yíng)養(yǎng)不良、缺乏鍛煉、肥胖和吸煙)等，導(dǎo)致患者平均壽命縮短。大量研究表明，精神疾病與中樞多種神經(jīng)遞質(zhì)及受體功能異常相關(guān)，如腦內(nèi)單胺遞質(zhì)，尤其是多巴胺(DA)系統(tǒng)和5-羥色胺(5-HT)系統(tǒng)與人體正常精神活動(dòng)密切相關(guān)。當(dāng)DA和5-HT系統(tǒng)功能紊亂時(shí)，易導(dǎo)致多種神經(jīng)精神類疾病的發(fā)生，如精神分裂癥、抑郁癥、神經(jīng)性疼痛、躁狂癥、焦慮癥、帕金森氏疾病等。專利WO9967206A1描述了環(huán)己烷類衍生物在疼痛疾病治療中的應(yīng)用，但是并未公開報(bào)道其在精神類疾病中的應(yīng)用，尤其是對(duì)多巴胺D2/D3受體的作用。專利CN1829703A描述了具有(硫代)氨基甲酰基側(cè)鏈的環(huán)己烷衍生物在調(diào)節(jié)多巴胺受體病癥中的應(yīng)用，其中由ForestLaboratories和GedeonRichter共同開發(fā)的D2/D3拮抗劑和5-HT1A部分激動(dòng)劑卡利拉嗪(Cariprazine，RGH-188)目前已經(jīng)完成臨床實(shí)驗(yàn)處于注冊(cè)審批階段，用于精神分裂癥和躁狂癥及抑郁癥的治療?？ɡ旱幕瘜W(xué)結(jié)構(gòu)如下式所示，該藥物對(duì)D2/D3受體和5-HT1A的親和力(Ki值)分別為0.72nmol、0.08nmol和3.42nmol，其對(duì)D2/D3受體雖然有一定的選擇性，但仍不夠理想，因此可能使該藥物在臨床上仍具有低概率(3mg劑量下有近5％的概率)的靜坐不能、椎體外系反應(yīng)的原因，因?yàn)檫@些副作用都跟D2受體的過度阻斷有關(guān)?；谝陨蠁栴}，專利CN103130737A對(duì)卡利拉嗪進(jìn)行了進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)修飾，以實(shí)現(xiàn)更高的D3受體選擇性。但是，由于精神類疾病產(chǎn)生的原理有多種，雖然上述化合物目前對(duì)抗精神分裂具有較好的藥效，但是還不能滿足精神類疾病治療的需要，宜進(jìn)一步研究開發(fā)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述不足之處，研究設(shè)計(jì)改進(jìn)環(huán)己烷衍生物結(jié)構(gòu)，提供如式IB和式I所示的環(huán)己烷衍生物或其立體立體異構(gòu)體或其鹽，使其具有D2/D3拮抗劑作用和5-羥色胺吸收抑制作用，以及抗精神分裂作用，增加對(duì)精神類疾病治療的廣譜性，減少副作用。本發(fā)明提供的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體或鹽，其結(jié)構(gòu)如下式IB所示：其中X為N或C；R為并且，所述R基團(tuán)可任選的被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自鹵素、取代或未取代的C1-C6烷基；所述鹵素選自F、Cl、Br或I中的一種或多種；所述取代或未取代的C1-C6烷基選自取代或未取代的C1-C4烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基，所述取代基為鹵素，例如F、Cl、Br或I中的一種或多種，所述取代的C1-C4烷基優(yōu)選為三氟甲基。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的環(huán)己烷衍生物、或其立體異構(gòu)體或鹽，其結(jié)構(gòu)如下式I所示：其中R為并且，所述R基團(tuán)可任選的被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述取代基選自鹵素、取代或未取代的C1-C6烷基；所述鹵素選自F、Cl、Br或I中的一種或多種；所述取代或未取代的C1-C6烷基選自取代或未取代的C1-C4烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基，所述取代基為鹵素，例如F、Cl、Br或I中的一種或多種，所述取代的C1-C4烷基優(yōu)選為三氟甲基。本發(fā)明所述環(huán)己烷衍生物的立體異構(gòu)體為順式立體異構(gòu)體或反式立體異構(gòu)體，優(yōu)選為反式立體異構(gòu)體。本發(fā)明所述環(huán)己烷衍生物的鹽由環(huán)己烷衍生物與酸形成，所述酸為有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸，所述無(wú)機(jī)酸選自鹽酸、硫酸、硝酸或磷酸；所述有機(jī)酸選自甲酸、乙酸、草酸丙二酸、馬來(lái)酸、富馬酸、琥珀酸或苯甲酸；以及其他生理學(xué)上可以接受的鹽。優(yōu)選的，本發(fā)明所述環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體或鹽選自以下化合物或其鹽：N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物1)N'-[反式-4-[2-[7-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物2)N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[c]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物3)N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[d]異噻唑)-3-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物4)N'-[反式-4-[2-[4-(6-氟-苯并[d]異惡唑)-3-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物5)N'-[反式-4-[2-[4-(3-氯-苯并[d]異惡唑)-6-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物6)N'-[反式-4-[2-[4-(6-氟-苯并[d]異惡唑)3-哌啶基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物7)N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌啶基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物8)N'-[反式-4-[2-[7-(苯并[b]噻吩)-7-哌啶基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物9)N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[c]噻吩)-7-哌啶基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物10)N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[d]異噻唑)-3-哌啶基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物11)N'-[反式-4-[2-[4-(3-氯-苯并[d]異惡唑)-6-哌啶基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物12)N'-[反式-4-[2-[4-(3-甲基-苯并[d]異惡唑)-6-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物13)N'-[反式-4-[2-[4-(6-甲基-苯并[d]異惡唑)-4-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物14)本發(fā)明的另一目的是提供所述環(huán)己烷衍生物、或其立體異構(gòu)體或鹽的制備方法，該方法包括下列步驟：4-乙基環(huán)己胺衍生物II與N,N-二甲?；柞Ｂ菼II在縛酸劑存在下反應(yīng)，得到IB化合物IB：其中R、X同上述定義。所述化合物II與化合物III的摩爾比為1-1.5:1，反應(yīng)溫度為0℃-50℃，縛酸劑為有機(jī)堿性物或無(wú)機(jī)堿性物；所述有機(jī)堿性物選自三乙胺、二異丙基乙胺或吡啶中的一種或者幾種，所述無(wú)機(jī)堿性物選自碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀中的一種或幾種，所述縛酸劑(堿性物)與化合物II的摩爾比為1-1.5:1。本發(fā)明還提供了化合物II的制備方法，該方法包括下列步驟：或者其中R、X同上述定義，Pg為氨基保護(hù)基，選自芐基Bn、甲酸芐酯CBz或叔丁氧羰基Boc。式II化合物自身可以是順式或者反式，亦可以最后使式IB化合物通過色譜分離或者結(jié)晶以獲得其順反立體異構(gòu)體。(1)當(dāng)X為氮時(shí)，采用哌嗪與溴代物進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得中間體IV；所述偶聯(lián)反應(yīng)是在鈀催化下，強(qiáng)堿性物叔丁醇鉀、叔丁醇鈉、碳酸鉀或碳酸銫的存在下進(jìn)行，反應(yīng)溫度為50-150℃，哌嗪與溴代物摩爾比為1-5:1；或者，當(dāng)X為C時(shí)，中間體IV可商業(yè)購(gòu)得(上海竺鑰化工)。(2)中間體IV與4-氨基保護(hù)的環(huán)己烷乙醛進(jìn)行縮合亞胺還原反應(yīng)，得中間體V；所述還原劑為硼化合物，如三乙酰氧基硼氫化鈉或硼氫化合鈉；中間體IV與4-氨基保護(hù)的環(huán)己烷乙醛投料摩爾比為1-1.2:1；硼化合物與中間體IV摩爾比為1-2:1；(3)脫氨基保護(hù)基；更為具體的是當(dāng)Pg為叔丁氧羰基Boc時(shí)，加入酸脫氨基保護(hù)基；所述酸為氯化氫有機(jī)溶液或三氟乙酸等；或者，當(dāng)Pg為芐基Bn或甲酸芐酯CBz時(shí)，使用鈀碳加氫脫氨基保護(hù)基，加氫壓力為0.1-1Mpa。本發(fā)明的又一目的是提供所述環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽在制備抗神經(jīng)精神性疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽是根據(jù)化合物藥效結(jié)構(gòu)融合藥物設(shè)計(jì)原理，將具有潛在對(duì)多巴胺D3受體作用的藥效結(jié)構(gòu)和具有潛在5-羥色胺吸收抑制作用的藥效結(jié)構(gòu)進(jìn)行融合，經(jīng)過對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)改造、制備、體外活性試驗(yàn)、體內(nèi)抗精神分裂活性試驗(yàn)、構(gòu)效關(guān)系研究以及再優(yōu)化而得到的新化合物。藥理研究結(jié)果表明：本發(fā)明的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽對(duì)D3受體、5-羥色胺具有較強(qiáng)親和力，而對(duì)D2受體親和力則較弱，表現(xiàn)出對(duì)D3/D2受體的高選擇性，達(dá)到了意想不到的效果。體外受體結(jié)合試驗(yàn)表明：本發(fā)明的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽所涉及的大部分化合物特別對(duì)多巴胺D3受體、5-HT1A受體具有強(qiáng)親和力(Ki<10nmol)，對(duì)多巴胺D2受體則弱親和力(Ki>50nmol)，體現(xiàn)出良好的D3/D2受體選擇性，以及對(duì)5-HT1A受體的強(qiáng)親和力。體內(nèi)抗精神分裂活性試驗(yàn)表明，本發(fā)明的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽有較強(qiáng)的抗精神分裂癥癥狀作用。構(gòu)效關(guān)系研究表明，對(duì)多巴胺D3受體、5-HT1A受體的強(qiáng)親和力和對(duì)D3/D2受體的高選擇性，以及具有抗精神分裂癥癥狀作用，與本發(fā)明的所述環(huán)己烷衍生物系列化合物結(jié)構(gòu)中的苯并雜環(huán)片段例如苯并噻吩、苯并異噻唑、苯并異惡唑片段有密切關(guān)系(現(xiàn)有卡利拉嗪的相應(yīng)片段是2,3二氯苯)。因此，本發(fā)明的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽可用于制備神經(jīng)精神類疾病藥物。本發(fā)明所述的藥物是指由所述環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽作為活性成分與藥用輔料組成的藥物組合物。本發(fā)明所述的藥物組合物可以選擇任何便利的給藥方式。例如口服、胃腸道、口腔、舌下、鼻腔、直腸或者透皮給藥?？梢蚤_發(fā)成不同劑型如固體劑型和液體劑型，例如懸浮劑、片劑、膠囊。固體片劑形式的組合物可以包含制劑中常規(guī)使用的填充劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑。液體制劑采用適當(dāng)?shù)囊后w載體例如水溶性溶劑如水、乙醇或者甘油，或者非水溶性溶劑如聚乙二醇或者油中的混懸劑或者溶液。更為具體的，本發(fā)明所述藥物組合物是由式IB或式I所示的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽作為活性成分與藥用輔料組成的固體片劑。所述固體片劑由下列重量配比的成分組成：所述稀釋劑選自淀粉、乳糖或微晶纖維素；所述粘合劑選自羥基苯甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；所述崩解劑選自羥基乙基淀粉鈉或交聯(lián)聚維酮，所述潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂。優(yōu)選的，本發(fā)明提供由N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲化合物作為活性成分與藥用輔料組成的固體片劑。所述固體片劑由下列重量配比的成分組成：其中稀釋劑選自淀粉、乳糖或微晶纖維素，粘合劑選自羥基苯甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮，崩解劑選自羥基乙基淀粉鈉或交聯(lián)聚維酮，潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂?；蛘?，本發(fā)明所述藥物組合物是由式IB或式I所示的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽作為活性成分與藥用輔料組成的混懸劑。所述混懸劑由下列重量配比的成分組成：所述助懸劑選自黃原膠或微晶纖維素；所述防腐劑選自苯甲酸鈉、對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸乙酯，所述稀釋劑選自水或山梨醇；所述緩沖劑為檸檬酸鹽；所述共溶劑選自環(huán)糊精、乙醇、丙二醇或聚乙二醇；調(diào)味劑可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的甜味劑(如糖、糖精等)；著色劑可以是脂溶性著色劑或水溶性著色劑，如胡蘿卜素、可可色素、焦糖色素等。優(yōu)選的，本發(fā)明提供由N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲化合物作為活性成分與藥用輔料組成的混懸劑。所述混懸劑由下列重量配比的成分組成：所述助懸劑選自黃原膠或微晶纖維素，防腐劑選自苯甲酸鈉、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯，稀釋劑選自水、山梨醇，緩沖劑為檸檬酸鹽，共溶劑選自環(huán)糊精、乙醇、丙二醇或聚乙二醇，調(diào)味劑可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的甜味劑(如糖、糖精等)；著色劑為脂溶性著色劑或水溶性著色劑，如胡蘿卜素、可可色素或焦糖色素等。本發(fā)明的又一目的是提供所述環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽在制備抗神經(jīng)精神性疾病藥物中的應(yīng)用，所述應(yīng)用是指制備對(duì)神經(jīng)精神類疾病具有改善/治療作用的藥物，可用于制備改善/治療精神分裂、精神紊亂、精神障礙、精神錯(cuò)亂、情緒紊亂、雙相類精神障礙、抑郁癥、恐懼癥、強(qiáng)制性障礙、焦慮癥或認(rèn)知障礙疾病的藥物。急性毒性實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明所述的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體、鹽僅有極低的毒性(LD50＞1000mg/Kg)，極優(yōu)于卡利拉嗪(Cariprazine)(LD50＝75.3mg/Kg)。說明本發(fā)明藥物毒性小，安全性好。藥理試驗(yàn)表明，本發(fā)明的環(huán)己烷衍生物或其立體異構(gòu)體或鹽是一類新型的抗神經(jīng)精神性疾病的治療藥物，有較好的臨床應(yīng)用前景，為患者帶來(lái)福音，有良好的社會(huì)效益。并且本發(fā)明化合物制備方法簡(jiǎn)單易行，宜于工業(yè)化生產(chǎn)，有較大的應(yīng)用價(jià)值。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例所用原料和試劑除特別說明外，均可市售得到。實(shí)施例11-苯并[b]噻吩-4-哌嗪鹽酸鹽的制備將7.20g4-溴苯并[b]噻吩、19.9g哌嗪酐、4.70g叔丁氧基鈉、0.32g(R)-(+)-2,2′-雙(二苯膦基)-1,1′-二萘(BINAP)、0.63g二鈀三(二亞芐基丙酮)和150ml甲苯的混合物在氮?dú)夥諊谢亓?小時(shí)。在反應(yīng)溶液中倒入150ml水，然后用100ml×3乙酸乙酯萃取，經(jīng)水洗后，無(wú)水硫酸鎂干燥，使溶劑在減壓下蒸發(fā)(0.01MPa，45℃)。剩余物通過硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇:25％氨水＝100:10:1)提純，獲得4.60g黃色油形式的1-苯并[b]噻吩-4-基-哌嗪。將2ml濃鹽酸加入含有4.6g1-苯并[b]噻吩-4-基-哌嗪的甲醇溶液(25ml)中，并將溶劑在減壓條件下蒸發(fā)(0.01MPa，45℃)。在剩余物中加入乙酸乙酯(50ml)，沉淀結(jié)晶經(jīng)過濾，在15ml甲醇中回流溶解后冷卻至室溫(25℃)重結(jié)晶，獲得無(wú)色針狀結(jié)晶的1-苯并[b]噻吩-4-基-哌嗪鹽酸鹽。實(shí)施例2反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基-氨基甲酸叔丁酯的制備將2.54g(10mmol)1-苯并[b]噻吩-4-哌嗪鹽酸鹽(實(shí)施例1制得)和2.40g(10mmol)反式-2-{1-[4-(N-叔丁氧碳基)氨基]環(huán)己基}-乙醛溶于120ml二氯甲烷中，在室溫(25℃±2℃)下加入1.40ml(10mmol)三乙胺緩慢攪拌10分鐘，然后逐步加入3.16g(14.8mmol)三乙酰氧基硼氫化鈉，室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)24小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后加入10％碳酸氫鈉溶液120ml。反應(yīng)體系直接萃取分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，最后過濾旋蒸至干，固體用15ml乙酸乙酯回流溶解冷卻至室溫(25℃±2℃)結(jié)晶得到3.70g目標(biāo)產(chǎn)物。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.81(1H,brs)，7.78(1H,d,J＝5.5Hz)，7.73(1H,d,J＝8.1Hz)，7.41(1H,m)，7.30(1H,d,7.6Hz)，6.94(1H,d,J＝7.6Hz)，3.54(1H,m)，3.35-3.23(8H,m)，2.46(2H,m)，1.86-1.65(8H,m)，1.51-1.49(1H,m)，1.42(9H,s)，1.37-1.35(2H,m)。實(shí)施例3反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己胺的制備冰水浴下，將4.43g反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基-氨基甲酸叔丁酯(實(shí)施例2制得)置于反應(yīng)瓶中，加入80ml飽和氯化氫的乙酸乙酯溶液，攪拌反應(yīng)8小時(shí)進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)，最后生成白色沉淀，得到標(biāo)題化合物的鹽酸鹽3.42g。將上述固體加入50ml二氯甲烷溶液中，50ml飽和碳酸氫鈉溶液攪拌半小時(shí)后，分液萃取，有機(jī)相濃縮(0.01MPa，40℃)得到目標(biāo)產(chǎn)物3.30g。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.78(1H,d,J＝5.5Hz)，7.76(1H,d,J＝8.1Hz)，7.37(1H,m)，7.29(1H,d,7.6Hz)，6.96(1H,d,J＝7.6Hz)，3.48-3.38(8H,m)，2.53(1H,m)，2.46(2H,m)，1.78-1.63(8H,m)，1.51-1.49(1H,m)，1.42(2H,brs)，1.37-1.35(2H,m)。實(shí)施例4N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物1)的制備將1.73g反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己氨(實(shí)施例3制得)溶于50ml二氯甲烷中，加入三乙胺1.40ml，接著加入5.50mmol的N,N-二甲酰基甲酰氯。室溫(25℃±2℃)攪拌48小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束加入50ml水萃取分液，有機(jī)相濃縮(0.01MPa，45℃)，用甲醇:二氯甲烷＝1:10柱層析(400目硅膠型號(hào))收集目標(biāo)組份，濃縮得到1.89g無(wú)定形的目標(biāo)產(chǎn)物。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.79(1H,d,J＝5.5Hz)，7.76(1H,d,J＝8.1Hz)，7.33(1H,m)，7.28(1H,d,7.6Hz)，6.96(1H,d,J＝7.6Hz)，6.48(1H,brs)，3.44-3.36(8H,m)，3.58(1H,m)，3.01(6H,s)，2.46(2H,m)，1.68-1.42(8H,m)，1.52-1.48(1H,m)，1.38-1.36(2H,m)。實(shí)施例5N'-[反式-4-[2-[7-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物2)的制備7-溴苯并[b]噻吩為起始原料制備，參照實(shí)施例1-4方法制備化合物2。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.78(1H,d,J＝5.6Hz)，7.76(1H,d,J＝8.0Hz)，7.31(1H,m)，7.27(1H,d,7.6Hz)，6.98(1H,d,J＝7.2Hz)，6.44(1H,brs)，3.48-3.42(8H,m)，3.54(1H,m)，3.00(6H,s)，2.46(2H,m)，1.68-1.42(8H,m)，1.52-1.48(1H,m)，1.38-1.36(2H,m)。實(shí)施例6N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[C]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物3)的制備以4-溴苯并[c]噻吩為起始原料，參照實(shí)施例1-4方法制備化合物3。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.33(2H,s)，7.27-7.25(1H,m)，7.27(1H,d,7.6Hz)，6.77(1H,d,J＝7.2Hz)，6.73(1H,d,J＝7.2Hz)，6.44(1H,brs)，3.48-3.42(8H,m)，3.54(1H,m)，2.99(6H,s)，2.46(2H,m)，1.68-1.42(8H,m)，1.52-1.48(1H,m)，1.46-1.42(2H,m)。實(shí)施例7N'-[反式-4-[2-[4-(6-氟-苯并[d]異惡唑)-4-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物5)的制備以6-氟-3-溴-1,2苯并[d]異惡唑?yàn)槠鹗荚?，參照?shí)施例1-4方法制備化合物5。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.41(1H,d)，7.12(1H,d)，6.98(1H,s)，6.52(1H,brs)，3.55(1H,m)，3.46-3.42(8H,m)，2.99(6H,s)，2.45(2H,m)，1.68-1.40(8H,m)，1.50-1.48(1H,m)，1.37-1.35(2H,m)。實(shí)施例8N'-[反式-4-[2-[4-(3-氯-苯并[d]異惡唑)-6-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物6)的制備以3-氯-6-溴-苯并[d]異惡唑?yàn)槠鹗荚现苽?，參照?shí)施例1-4方法制備化合物6。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.25(1H,d)，6.78(1H,s)，6.72(1H,d)，6.51(1H,brs)，3.54(1H,m)，3.46-3.42(8H,m)，2.99(6H,s)，2.45(2H,m)，1.67-1.40(8H,m)，1.50-1.48(1H,m)，1.42-1.35(2H,m)。實(shí)施例9N'-[反式-4-[2-[4-(6-氟-苯并[d]異惡唑)-4-哌啶基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲(化合物7)的制備以6-氟-3-哌啶-4-基-1,2苯并[d]異惡唑?yàn)槠鹗荚?購(gòu)于上海竺鑰化工)，參照實(shí)施例2-4方法制備化合物7。1H-NMR(CDCl3)δppm：7.41(1H,d)，7.12(1H,d)，6.97(1H,s)，6.51(1H,brs)，3.55-3.53(1H,m)，2.99(6H,s)，2.78-2.76(1H，m)，2.66-2.37(4H,m)，2.46-2.40(2H,m)，1.78-1.68(12H,m)，1.50-1.48(1H,m),1.37-1.34(2H,m)。實(shí)施例10N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲化合物1的固體片劑按照下表中的配方制備1000片，每片重200mg。制備方法：將活性成分、乳糖、微晶纖維素和羥基乙基淀粉鈉混合，加入高剪切濕法制粒機(jī)中，在一定轉(zhuǎn)速下攪拌均勻；然后向混合物中加入羥丙甲基纖維素水溶液50.0g，在高速剪切條件下制得合適的顆粒；然后采用流化床干燥濕顆粒；將所得干顆粒與硬脂酸鎂混合均勻，壓片。實(shí)施例11N'-[反式-4-[2-[4-(苯并[b]噻吩)-7-哌嗪基]乙基]環(huán)己基]-N,N-二甲基脲化合物1的口服混懸液按照下表中的口服混懸液的配方(按照規(guī)格10mg/ml)制備1000瓶，每瓶5ml。組成成分用量(g)實(shí)施例4制得的化合物1(活性成分)50.0水3500.0聚乙二醇50.0山梨醇500.0微晶纖維素25.0黃原膠5.0對(duì)羥基苯甲酸甲酯1.25對(duì)羥基苯甲酸乙酯1.25檸檬酸鹽調(diào)pH4～8制備方法：將對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸乙酯在熱水中溶解后冷卻至室溫(25℃±2℃)，依次加入山梨醇、聚乙二醇、黃原膠、檸檬酸鹽、平均粒度為30μm的化合物1和微晶纖維素，攪拌均勻，獲得口服混懸液。實(shí)施例12藥理實(shí)驗(yàn)一、本發(fā)明環(huán)己烷衍生物的體外生物活性研究按照江蘇恒誼藥業(yè)有限公司專利CN103130737A描述的多巴胺D2/D3受體結(jié)合試驗(yàn)以及5-HT1A受體結(jié)合試驗(yàn)的方法進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)。使用非線性分析程序由濃度-依賴反應(yīng)計(jì)算出IC50值。使用Cheng-Prussoff公式由IC50值計(jì)算出Ki值。即：Ki＝IC50/(1+[L]/KD)，Ki為藥物與受體的親和力，L為待測(cè)化合物濃度，KD為放射性配基與受體的親和力。(一)多巴胺D2受體結(jié)合試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料：①、D2受體細(xì)胞轉(zhuǎn)染：用含有D2受體蛋白基因的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，使用磷酸鈣轉(zhuǎn)染法，并從轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞中，通過含G418的培養(yǎng)液培養(yǎng)，以及挑選細(xì)胞單克隆和放射性配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)，最終獲得能穩(wěn)定表達(dá)D2受體蛋白的穩(wěn)定細(xì)胞株。②、受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)材料：同位素配基[3H]Spiperone(113.0Ci/mmol)；購(gòu)自Sigma公司；(+)spiperone，購(gòu)自RBI公司；GF/B玻璃纖維濾紙，購(gòu)自Whatman公司；Tris進(jìn)口分裝；PPO、POPOP購(gòu)自上海試劑一廠；脂溶性閃爍液。BeckmanLS-6500型多功能液體閃爍計(jì)數(shù)儀。2、實(shí)驗(yàn)方法：①、細(xì)胞：用含以上各種基因的重組病毒分別感染HEK-293細(xì)胞，48-72小時(shí)后受體蛋白在膜上大量表達(dá)，將細(xì)胞1000rpm離心5min后棄培液，收胞體，保存于-20℃冰箱內(nèi)備用。實(shí)驗(yàn)時(shí)用Tris-HCl反應(yīng)緩沖液(pH＝7.5)重懸。②、受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)：將待測(cè)化合物與放射性配基各20μL及160μL受體蛋白加入反應(yīng)試管中，使受試化合物及陽(yáng)性藥物終濃度均為10μmol/L，30℃水浴孵育50min后，即刻移至冰浴終止其反應(yīng)；在Millipore細(xì)胞樣品收集器上，經(jīng)過GF/C玻璃纖維濾紙快速抽濾，并用洗脫液(50mMTris-HCl，pH7.5)3mL×3次，用微波5～6min烘干，將濾紙移入0.5mL離心管中，加入500μL脂溶性閃爍液。避光靜置30min以上，計(jì)數(shù)測(cè)定放射性強(qiáng)度?；衔餄舛葹?0umol/L，按以下公式計(jì)算各化合物對(duì)同位素配基結(jié)合的抑制率百分率：抑制率(I％)＝總結(jié)合管cpm-化合物cpm/總結(jié)合管cpm-非特異結(jié)合管cpm×100％。(二)多巴胺D3受體結(jié)合試驗(yàn)化合物10umol/L濃度，實(shí)驗(yàn)方法參照J(rèn)ournalofPharmacologyandExperimentalTherapeutics2010，333(1):328進(jìn)行。(三)5-HT1A受體結(jié)合試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料：5-HT1A受體同位素配基[3H].8-OH-DPAT(購(gòu)自PE公司)，(+)5-hydroxytrptamine(購(gòu)自Sigma公司)，GF/B玻璃纖維濾紙(購(gòu)自Whatman公司)，脂溶性閃爍液：PPO，POPOP(購(gòu)自上海試劑一廠)，甲苯(購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，Tris進(jìn)口分裝。細(xì)胞：用基因重組穩(wěn)定表達(dá)5-HT1A受體的HEK-293細(xì)胞，用DMEM+10％血清的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)3-5后，用PBS收細(xì)胞，將細(xì)胞用-4度3000轉(zhuǎn)離心10分鐘后棄上清液，收胞體，存于-80度冰箱保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)用D1BindingBuffer(pH7.4)重懸。2、實(shí)驗(yàn)方法：粗篩測(cè)定每個(gè)化合物10umol/L濃度對(duì)[3H]8-OH-DPAT與5-HT1A受體結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)抑制率。具體實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如表1所示。表1：化合物對(duì)D2和D3受體結(jié)合試驗(yàn)及5-HT1A受體的親核力(Ki：nmol)結(jié)論：從表1實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明系列化合物對(duì)D3的親核力很強(qiáng)，對(duì)D2親核力非常弱，兩者相差近萬(wàn)倍，說明本發(fā)明系列化合物對(duì)D2/D3受體選擇性很強(qiáng)，避免了對(duì)D2受體選擇產(chǎn)生的副作用；同時(shí)對(duì)5-HT1A受體也表現(xiàn)出較強(qiáng)的親核力，增加了抗神經(jīng)精神類疾病的廣譜性。實(shí)施例13本發(fā)明環(huán)己烷衍生物的體內(nèi)抗精神分裂活性試驗(yàn)1、MK-801模型(1)、MK-801誘導(dǎo)小鼠精神分裂癥實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒prague-Dawley大鼠100只(上海萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供)，均為雄性，按體重均衡隨機(jī)分為10組：空白對(duì)照組，MK-801模型對(duì)照組，本發(fā)明環(huán)己烷衍生物C1-C8組(分別對(duì)應(yīng)本發(fā)明化合物1至化合物7，化合物14)(0.3mg/kg)、陽(yáng)性對(duì)照藥卡利拉嗪(按照專利CN103130737A方法制備)組(0.3mg/kg)。每只動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)前一天放入隔音箱適應(yīng)30min，第二天給予受試物后30分鐘，用濃度為0.3mg/kg的MK-801溶液，按照5.0mL/kg小鼠體重進(jìn)行腹腔注射誘導(dǎo)建立小鼠精神分裂癥實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。給藥方式：本發(fā)明環(huán)己烷衍生物組、陽(yáng)性對(duì)照藥卡利拉嗪組為口服灌胃，MK-801模型對(duì)照組為腹腔注射給藥。(2)、曠場(chǎng)跑動(dòng)行為學(xué)觀察小鼠給藥MK-801后，立即放入隔音箱，觀察記錄2.5小時(shí)內(nèi)小鼠自主活動(dòng)的總路程。改善率＝(模型對(duì)照組活動(dòng)總路程-給藥組活動(dòng)總路程)/(模型對(duì)照組活動(dòng)總路程)×100％。(3)、統(tǒng)計(jì)方法全部數(shù)據(jù)以表示，用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)包處理，進(jìn)行兩個(gè)樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn)及單因素方差分析，以P<0.05為顯著性差異。(4)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體結(jié)果參看下表2。表2：?jiǎn)未慰诜o予本發(fā)明環(huán)己烷衍生物對(duì)MK-801誘導(dǎo)小鼠精神分裂癥模型曠場(chǎng)運(yùn)動(dòng)總路程的影響表2結(jié)果顯示，與MK-801模型對(duì)照組相比較，陽(yáng)性對(duì)照藥卡利拉嗪組和本發(fā)明的環(huán)己烷衍生物化合物1至化合物7均降低了大鼠150分鐘內(nèi)的總活動(dòng)路程。其中*P<0.05，****P<0.0001。本試驗(yàn)結(jié)果表明：①與空白對(duì)照組相比較，MK-801模型對(duì)照組曠場(chǎng)運(yùn)動(dòng)距離明顯增加，說明MK-801能造成小鼠精神分裂癥。②與MK-801模型陽(yáng)性對(duì)照藥卡利拉嗪組相比較，陽(yáng)性對(duì)照藥卡利拉嗪組在劑量0.3kg/kg下明顯抑制MK-801誘導(dǎo)的大鼠高自發(fā)活動(dòng)(P<0.0001)；本發(fā)明的環(huán)己烷衍生物化合物1、2、3和5在劑量0.3kg/kg下均能顯著抑制MK-801誘導(dǎo)的大鼠高自發(fā)活動(dòng)(P<0.0001)，本發(fā)明的環(huán)己烷衍生物化合物6、7和14在劑量0.3kg/kg下也能明顯抑制MK-801誘導(dǎo)的大鼠高自發(fā)活動(dòng)(P<0.05)，與陽(yáng)性對(duì)照藥卡利拉嗪組相當(dāng)。由于MK-801誘導(dǎo)的曠場(chǎng)運(yùn)動(dòng)模型與精神分裂癥癥狀密切相關(guān)，因此說明本發(fā)明的環(huán)己烷衍生物系列有較強(qiáng)的抗精神分裂癥狀作用。實(shí)施例14本發(fā)明環(huán)己烷衍生物急性毒性研究評(píng)價(jià)ICR小鼠口服給予本發(fā)明化合物，觀察其口服給予后動(dòng)物出現(xiàn)的毒性征狀和死亡情況，用Bliss法統(tǒng)計(jì)，比較其急性毒性。實(shí)驗(yàn)方案(1)、溶媒配制：稱取適量吐溫-80，用去離子水稀釋至濃度為5％(g/v)吐溫-80。(2)、給藥制劑：分別稱取所需的供試品，用5％吐溫80溶液配制成濃度為0.94、1.88、3.75、7.5、15、30、60mg/mL(分別相當(dāng)于18.75、37.5、75、150、300、600、1200mg/kg)混懸液。(3)、給藥途徑：供試品及溶媒對(duì)照組(0.5％吐溫-80)的給藥途徑均為口服。一般癥狀觀察：給藥當(dāng)天于第一次給藥后約10分鐘、0.5、2、4、6小時(shí)分別觀察1次；觀察期第2-6天，每天觀察2次，上、下午各1次。觀察內(nèi)容包括但不限于：一般狀況、行為活動(dòng)、步態(tài)姿勢(shì)、眼、口、鼻、胃腸道、皮膚被毛、泌尿生殖道。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。表4：化合物單次口服給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)論：表明本發(fā)明的環(huán)己烷衍生物急性毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于陽(yáng)性對(duì)照藥卡利拉嗪(RGH-188，75.3mg/kg)，安全性良好。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3