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體外多段重組酶系統(tǒng)及其在基因組裝中的應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):11936695閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種體外多段重組酶系統(tǒng),其特征在于:按體積百分比計(jì),所述的體外多段重組酶系統(tǒng)包括如下配方:

5X pre-assembly buffer 35~45%,

T5核酸外切酶 0.1~0.15%,

高保真Taq酶 4.5~5.5%,

ddH2O 50~60%;

其中,所述的5X pre-assembly buffer包括如下配方:占所述的5X pre-assembly buffer總體積20~30%的聚乙二醇、450~550mM的三(羥甲基)氨基甲烷、45~55mM的MgCl2、45~55mM的二硫蘇糖醇、0.9~1.1mM的dNTPs。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體外多段重組酶系統(tǒng),其特征在于:按體積百分比計(jì),所述的體外多段重組酶系統(tǒng)包括如下配方:

5X pre-assembly buffer 37.5~42.5%,

T5核酸外切酶 0.1~0.13%,

高保真Taq酶 4.7~5.2%,

ddH2O 52.2~57.7%;

其中,所述的5X pre-assembly buffer包括如下配方:占所述的5X pre-assembly buffer總體積23.75~26.25%的聚乙二醇、475~525mM的三(羥甲基)氨基甲烷、47.5~52.5mM的MgCl2、47.5~52.5mM的二硫蘇糖醇、0.95~1.05mM的dNTPs。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的體外多段重組酶系統(tǒng),其特征在于:按體積百分比計(jì),所述的體外多段重組酶系統(tǒng)包括如下配方:

5X pre-assembly buffer 39.5~40.5%,

T5核酸外切酶 0.12~0.13%,

高保真Taq酶 4.93~5.05%,

ddH2O 54.45~55.45%;

其中,所述的5X pre-assembly buffer包括如下配方:占所述的5X pre-assembly buffer總體積24.75~25.25%的聚乙二醇、495~505mM的三(羥甲基)氨基甲烷、49.5~50.5mM的MgCl2、49.5~50.5mM的二硫蘇糖醇、0.99~1.01mM的dNTPs。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的體外多段重組酶系統(tǒng),其特征在于:所述的聚乙二醇為聚乙二醇-8000。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的體外多段重組酶系統(tǒng),其特征在于:所述的三(羥甲基)氨基甲烷的pH為7.4~7.6。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的體外多段重組酶系統(tǒng),其特征在于:所述的體外多段重組酶系統(tǒng)為2X體外多段重組酶系統(tǒng)。

7.一種如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的體外多段重組酶系統(tǒng)在基因組裝中的應(yīng)用。

8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于:所述的基因組裝的制備體系包括:19~21μL的ddH2O、9.5~10.5μL的體外多段重組酶系統(tǒng)、線性化克隆載體和插入片段擴(kuò)增產(chǎn)物,其中,所述的線性化克隆載體和所述的插入片段擴(kuò)增產(chǎn)物的每片段最適使用量為(0.02× 片段堿基對(duì)數(shù))ng。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用,其特征在于:所述的基因組裝的制備體系在冰水浴中配制。

10.根據(jù)權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用,其特征在于:將所述的基因組裝的制備體系在PCR儀器內(nèi),在47.5~52.5℃下反應(yīng)5~60min。

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